Среда для выделения вибрионов Советский патент 1975 года по МПК C12K1/06 

1

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения вибрионов при исследованиях на холеру.

Известна среда для выделения вибрионов, содержащая агар-агар, хлористый натрий, мясо-пептонный бульон и эмульсию яичного желтка.

Однако известная среда обладает низкой элективностью (избирательностью).

С целью повышения элективности и дифференцирующих свойств предложенная среда содержит кальция хлористого 0,1-0,2 г, магния сернокислого 0,1-0,2 г, цинка сернокислого 0,05-0,075 г, натрия хлористого 5,0- -25,0 г, натрия двууглекислого 0,75-0,8 г, бромтимолового синего 0,04-0,06 г, желатины 10,0-11,0 г, агар-агар 9,5-10,5 г, эмульсию яичного желтка 20-30 мл, дистиллированную воду 1000 мл.

Увеличение содержания поваренной соли до 2,5% (вес./объем) в среде придает ей большую элективность и делает пригодной для выделения галофильных вибрионов Vibrio parahaemolyticus u V. alginolyticus.

Для приготовления сухой минерально-желатиновой основы навески всех ингредиентов (кроме желтка), растирают в ступке или шаровой мельнице и тщательно смешивают. Б таком виде основа может храниться в прохладном сухом месте при условии герметизации упаковки.

Перед употреблением сухую основу вновь перемещивают встряхн-ванием в таре и берут

требуемую навеску из расчета 26-28 г на 1 л дистиллированной воды (46-48 г для галофильных вибрионов). Навеску суспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды и оставляют для набухания на

15-20 мин. Затем доливают воду до нужного объема и растворяют навеску кипячением в течение 5-6 мин при постоянном перемещивании. Эмульсию желтка готовят ех ternpore. Свежие куриные яйца моют щеткой

в мыльной воде, выдерживают 5-10 мин в сиирте и обжигают. Затем отделяют желтки от белка и добавляют к ним равный объем стерильного физиологического раствора. Смесь встряхивают для гомогенизации (из

одного желтка получается 30-40 мл эмульсии).

К расплавленной и охлажденной до 50°С минерально-желатиновой основе добавляют 2-3 об. % эмульсии желтка, среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри, затем подсушивают как обычно и используют для посевов.

Предлагаемая среда имеет зеленовато-голубой цвет. На ней могут расти вибрионы,

которые «не боятся высокого рН и способмы утилизировать желтож и желатину-единственные источники азота и углерода. Выросшие колонии вибрионов окрашены в желтый цвет и окружены таким же ореолом.

Ореолы, возникающие в результате расщенления микробами лецитина, - двуконтурны. Внутренний контур мутный, с металлическим блеском, наружный - нрозрачный. Соотношение контуров и величина ореолов зависят от возраста культур, их варьируют от штамма к штамму. После того как среду заливают 5-7 мл 15-20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты ее цвет меняется до белесовато-желтого, а на месте колоний на мутном фоне проявляются прозрачные зоны протеолиза (расщепление желатины).

Размеры зон могут быть больше, чем площадь ореолов. Для пересевов и постановки реакции агглютинации колонии снимают до обработки чашек раствором трихлоруксусной кислоты.

При посеве 200 клеток на предлагаемой среде вырастает примерно столько же колоний, сколько и на щелочном агаре Мартена- эталонной среде.

Предлагаемая среда обладает способностью подавлять рост воздушной микрофлоры, благодаря чему даже в открытых чашках Петри она остается стерильной (но крайней мере в течение двух суток).

Электронные свойства этой среды проявляются в угнетании роста таких микробов, как Е. соИ, S. typhosa, S. paratyphi А, Sh. flexneri, Proteus vulgaris, Comamonas terrigena, lersinia pseudotuberculosis, lersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis.

Штаммы Aeromonas formicans на этой среде либо не растут, либо образуют очень мелкие колонии, расщепляющие лецитин, но не желатину. Pseudomonas aeruginosa растет в виде мелких колоний, вызывающих лишь протеолиз.

Предмет изобретения

Среда для выделения вибрионов, включающая источники углерода, азота и минеральные соли, отличающаяся тем, что, с целью повышения элективности и дифференцирующих свойств, она содержит кальция хлористого 0,1-0,2 г, магния сернокислого 0,1-0,20 г, цинка сернокислого 0,05-0,075 г, натрия хлористого 5,0-25,0 г, натрия двууглекислого 0,75-0,8 г, бромтимолового синего 0,04-0,06 г, желатины 10,0-11,0 г, агарагара 9,5-10,5 г, эмульсии яичного желтка 20-30 мл, дистиллированной воды 1000 мл.