Способ получения антибиотика Советский патент 1975 года по МПК C12D9/00 

(54) СПОСЮБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА

Изобретение относится . к фармацевтичео кой промышленности. Прецложенный способ получения антибиотика заключается в том, что культуру CKaetomlum ytobosum Капге ex FmsNfSZ 3877 Bi.ip/ииивают на среце, содержащей источники углероаа, азота, минеральные солн и микроэлек(енты с послецующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости и мицелйя известными приемами Выращивание осуществляют при 12-37 и иН 5,7-6,0 в течение 6-12 суток. FloBbift штамм вица CKaetomium jlobosum kunze ex Tries обнаружен в пон (4снной пробе из Кюснахта (Швейцария), часть которой была отдана на хранение в United 5tdteS Depaftamant of AgflcitUuffc (Nortkenn UtilLtallon ResearcK and Devetopwent ivtslcn) R Г. Пеория в штате Иллинойс (США) под номером NRRZ 3877. Новый 1 ;тамм вица Cbctowiun kun et Frits выращивают на агаре из солоцового и дрожжевого экстрактов при 12-37 С (п(.1ес1пачтительно при ). На питательной среде он образует воздушный мице.чий белого-светло-серого цвета и светлый субстратный мицелий. Через несколько дней после инкубации образуются темные перетеции, окрашенные в оливково-коричневый цвет. Обратная сторона колонии и субстрат окрашены в коричневый цвет. В чистой культуре, например, на солодовом агаре при температуре 12-ЗО С гриб легко образует плоцовые тела, а при более высоких температурах в течение 8- 1О суток. В зависимости от условий туры плодовые тела окрашены в зеленыйоливково-зеленый UBej-, который переходит в темно-коричневый. Они шарообразны. Их диаметр 2ОО-ЗОО мкм. На верхушке Ш одовые тела имеют округлую пору. Их перидий состоит из коричневых клеток, сросшихся меандрически. Они имеют плотнук оболочку. Пору окружают многочисленные волоски коричнево-зеленого цвета, иыхоцящие из наружного слоя клеток. По мере уцаления от поры их количество уменьшае ся. У основания их циаметр составляет по 4,5 мкм, квер:117 их диаметр составляет до 3 мкм. имеют jipKo выракенную волни стую форму, несут многочисленные шипы и во всю длину разделяются нврегороцками. Аски с растянутым основанием, по фор ме напоминающие булаву, выхоцят из внутреннего основания перетеция. Аски заключены в тонкую оболочку, которая раз рушается во созревания аскопор (по восемь в каждой аске). Аскопоры одноклеточны, по форме они напоминают лимон с заостренными оконцами. Сначала они бесцветны, а затем окрашиваются в красноватый, а в конце в темно-бурый цвет. На одном конце они имеют легко заметную пору прорастания. Длина спор 9-12 мкм рина 6-9 мкм. Новый штамм K1RR2 3877 вырашивают на многих питательных средах. Источником углерода цля нового штамма являются глюкоза, сахароза, крахмал, лактоза, декстрин, источником азота - органические и неорганические азотсодержащие соединения, например, пептон, дрож жевой и мясной экстракты, сульфат аммония, нитрат аммония, аминокислоты и обы ные минеральные соли и микроэлементы. Для получения нового антибиотика жидкую питательную среду заражают суспензией спор нового штамма вида , Chaelqmiam globosuin и культуру инкубирукУ в течение 6-12 суток (предпочтительно 1О суток) при температуре 12-37°С (предпочтительно при 27°С) и значении рН 5,7-6,0.Выращивание проводят в аэробных условиях в культуре на поверхностном слое среды или в погруженной культуре со встряхиванием. или в ферментаторах с вдуванием воздуха или азота и перемешиванием. После получения антибиотика его фильтруют и получают известными способами экстракции и/или адсорбции из культуральной жидкости или из мицелия. Новый антибиотик выделяют из неочищенного экстракта хрома- тографическим путем, с помощью кристаллизации или путем противоточного распределения. Одним из методов является экстракция фильтра с помошью энтиленхлорида, но используют и другие органические растворители, например бензол, хлороформ, бутилац тат, метиленхлорид., бутанол или уксусный эфир. Затем из экстрактов удаляют растворитель, например, путем перегонки, а остаток очищают хромотографическим путем на адсорбирующих средствах, например глиноаеме, силикагеле, силикате магния, или путем противоточного распределения и/или кристаллизации.. Новый антибиотик находит применение в качестве лекарственного средства. Он оказывает тормозящее действие на развитие отека, обладает свойствами, предотвращающими язвы, оказывает иммуносупрессивное действие на иммунитет клеток. Новый антибиотик применяют как в чистой кристаллической или аморфной форме, так и в виде Неочищенного концентрата, а также в соответствующих лекарственных формах для орального, энтерального или парэнтерального введения. Пример .В ферменаторе Юл питательного раствора, содержащего на 1 л (в г): Мальтозу Бобовую муку Пептон Дрожжевой экстрах КН РО ..24 MqSO, - 4 Ca(N О NaCi FeSO Zn Cl MnCl CuSO . CaCt и деминерализованную воду, заражается суспензией спор штамма 3877 и инкубируется с аэрацией 1,О л воздуха (мин) л питательного растворив при перемешивании ЗОО об/мин в течение 10 суток при 27°С и значении рН 5,7. Затем раствор фильтруют, получают около 9 л культурального фильтра и около 1 кг мицелия, Культуральный фильтрат экстрагируют этилеихлоридом три аза по 9 л. Затем органические фазы п юмываtoT водой два раза по 4 л, сушат на сулыфате натрия и упаривакгг досуха. После

I обезжиривания петролейным эфиром сырой экстрат хроматографируюг на селикагеле.

Новый антибиотик элюируют смесью хлороформа и метанола (98:2) и для очистки перекристаллнзовывают из простого эфира, из уксусного эфира и два раза из хлороформа.

Дополнительное количество чистого антибиотика получают из мицелия. Мицелий обрабатывают три раза 90%-ным метанолом/по 1 л/ в измельчителе ультратурраке.

Растворенный мицелий фильтруют, метанол отгоняют из фильтрата, а водный раствор экстрагируют этиленхлорицом три раза по 0,5 л. Этиленхлоридные растворы промывают О,3 л воды, сушат на сульфате натрия, упаривают досуха. Полученный сырой экстракт обезжиривают и хроматографируют, затем получают новый антибиотик.

Суспензию спор получают следующим образом.

Питательную среду, содержащую на 1 л (г):

Церелозу2О

Пептон2

Солодовый зкстрат2

Дрожжевой экстрат2

Агар-агар15

и деминерализованную воду, заражают штаммом NRRZ 3877 и инкубируют 12 суток при 27 С.

6

Выросший на этой питательной среде мицелий суспендируют в физиологическом растворе.

Новый антибиотик имеет следующую характеристику.

Желтые кристаллы, которые плавятся при при 172-182 С, образуя при этом новые кристаллы с температурой плавления 238°С (с разложением).

Удельное вращение: gl 376°/С

D

О, 78Ь пиридине.

.Элементарный анализ,%: С 73,1; И 6,8; N5,3; О 15,1.

УФ спектр: максимумы при 221пгп/ м. 1,96,

274nm/i3j l,16/, 280nm/ c l, 16/, 29Опта/Л5е 1,09/

ИК-спектр: полосы при 345О, 2920, 1695, 1620 см.

Предмет изобретении

C/iartowtum lobosum, ku,nze ex Fries MRRZ. выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные со.г1и и микроэлементы, с последующим выделением целевого продукта из культурной жидкости и мицелия известными приемами.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и и- с я тем, что выраашвание осуществляк1Т при 12-37°С и рН 5,7-6,0 в течение 612 суток.