Способ получения 6-метил-2-нафтойной кислоты Советский патент 1975 года по МПК C12D13/00 

3,ОХ;0,6 ц, подвижные с двумя-тремя полярными жгутиками, грамотрицательные.

Экологические признаки. Растет в интервале температур 4-37°С, не растет при 41°С. Оптимальная гемпература для роста 28°С.

Физиологические признак и. Растет па обычных питательных средах, органических и минеральных, ассимилирует углеводы за исключением ксилозы.

На минеральных средах растет предпочтительнее с нитратной формой алота, чем с аммонийной.

Желатину не разжижает, молоко не изменяет, нитраты восстанавливает, крахмал не гидролизует, инозит не усваивает.

Биохимические признак и. Окисляет нафталин до салициловой кислоты. Салицилат окисляет полностью.

Характеристика бактерии Р s е п d о ш о п а S f 1 U о г е S с е п S штамм 44. Выделен из почвенных образцов, взятых на территории Енакиевского коксохимического завода.

К у л ь т у р а л ь и ы е п р и знак и. Колонии па твердых питательных средах гладкие, плоские, блестящие, бесцветные или серовато-белые. На стандартной среде Кинга образует флюоресцирующий пигмент. На мясо-пептоином бульоне растет, образуя муть и пленку и продуцируя зеленый фл1ооресцируюп.ий иигмент.

Морфология культуры. Клетки палочковидные с округленными концами, 1,5- 3,ОХЭ,6ц, подвижные с двумя-тремя полярными жгутиками, грамотрицательные.

Экологические признаки. Растет в интервале температур 4-30°С, пе растет при 37°С и 41°С. Оптимальная температура для роста 28-30°С.

Ф и 3 и о л о г и ч е с к и е признак и. Растет на обыч1гых питательиых средах, органических и минеральных, ассимилирует углеводы. Ма минеральных средах нредпочтительнее растет с аммонийной формой алота, чем с пит)атной.

Желат1 н разжижает, молоко свертывает, крахмал гидролизует, нитраты иосстаиавливает, ииолит ус1 аинает, гиппурат и глицин не использует.

Б и о X и м и ч е с к и е п р и знак и. Окис;1яет нафталин до салициловой кисло i i. Салицилат окисляет полиостью.

Предлагаемый способ поясняется примерами его выполиеиия.

Пример 1. Культуру Pseudomonas putida штамм 7 поддерживают на косяках с МПА. Ипокулят готовят путем разведения в стерильной водопроводной воде культуры, выросшей на косяках с МПА.

Плотность суспензии клеток, использ емой в качестве инокулята, составляет 2,0 единицы по шкале оптической плотности нефелометра.

Культуру в течение 24 час вырашивают при 29-30°С иа среде МПА, разлитой в медицинские матрацы по 250 мл в каждый. В конце этого времени проводят смыв культуры с агаризованной поверхности среды АША фосфатным буфером рН 8,5-8,8.

Бактериальную суспеизию центрифугируют 10 мин при 8-10000 об/мин, дважды промывают фосфатным 6yqbepoM и ресуспеидируют в таком же буфере.

100 мл суспензии с оптической плотностью 2,2, что составляет 1,5 г в пересчете иа сухой вес клеток, вносят о медицинские колбы на 750 мл и одновременно добавляют по 100 мл (0,64 моль) 2,6-днметилпафталина.

Трансформацию проводят при 29-ЗО С в колбах на качалке в течение 12-15 час. Затем бактериальные клетки отделяют центрифугироваиием при 8-10000 об/мин.

Надосадочную жидкость фильтруют через стеклянный фильтр, упаривают ма роторном испарителе при 40С, концентрируя первоначальный объем в 4-5 раз.

Сконцентрированный раствор охлаждают до 5-6°С и к охлажденному раствору приливают 4-5-кратный объем этнлоиого спирта, охлажденного до , для осаждения белков.

Через 20--25 мин осадок отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр. Фильтрат подкисляют 10% НС1 до рН 3,0 и упаривают досуха на роторном испарителе при 40°С.

Сухой остаток экстрагируют абсолютным этанолом и проводят препаративюе выделение конечного продукта окисления путем тонкослойпой хроматографии на пластипках «Silufo UV-254 в системе: бензол-метанолуксусная кислота (45 : 4: 2).

В качестве элюирующего агента используют абсолютиый этиловый спирт. Элюат упаривают досуха на роторном испарителе и высушивают иод вакуумом. Концентрацию конечного продукта определяют снектрофотометрически.

Выход 6-метил-2-нафтойпой кислоты равен 0,33 моль.

Пример 2. Культуру Pseudomonas putida пиамм 7 выращивают на агаризованиой среде Чапека с глюкозой. Среду Чапека разливают в медицинские матрацы по 250 мл в каждый и после сте м-к иза1и и проводят «закашивание среды и матрацах.

Инокулят готовят аналогично тому, как указано в примере I. Инкубацию проводят при 29 в течение 24 час. ДальнеЙ пий про1осс , Kaic указано в примере 1.

Выход ко ечного продукта равен 0,30 моль.

Пример 3. Культуру Pseudomonas fluorescens штамм 44 поддерживают иа косяках Ш1А. Для получения биомассы выращивание культуры проводят па среде с МПА.

Остальиые этапы ведения процесса такие, как описано в примере 1.

Выход конечного продукта равен 0,35 моль.

Пример 4. Культуру Pseudomonas fluorescens штамм 44 выращивают на среде Чапека с глюкозой. Дальше процесс проводят, как описано в примере 1. Выход конечного продукта равен 0,32 моль.

Предмет изобретения

1.Способ получения 6-метил-2-нафтойнон кислоты окислением 2,6-диметилнафталина при помощи микроорганизмов в жидкой среде в аэробных условиях с последующим выделением готового продукта, отличающийся тем, что, с целью сокращения продолжительности процесса, окисление 2,6-диметилнафталина проводят при помощи микроорганизмов, относящихся к роду Pseudomonas.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем.

что из рода Pseudomonas используют вид Pseudomonas putida.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что из вида Pseudomonas putida используют Pseudomonas putida щтамм 7.

4.Способ по п. 1, отличающийся тем, что из рода Pseudomonas используют вид Pseudomonas fluorescens.

5.Способ по пп. 1, 4, отличающийся тем, что из вида Pseudomonas iluorescens используют Pseudomonas fluorescens щтамм 44.