Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для контроля любых микроорганизмов, культивируемых в растворе питательной среды, например культуры дрожжей, применяемой в хлебопечении.
Известен способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, добавление к твердой фракции раствора с последующим математическим расчетом массы дрожжевых клеток.
Однако известный способ неточен, так как определяют массу клеток вместе с массой внеклеточной влаги.
С целью повышения точности определения перед разделением суспензии на фракции определяют плотность исходной
суспензии, а после ее разделения - жидкую фракцию удаляют и определяют ее плотность, а к твердой добавляют такое же количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют, вновь добавляют к твердой фракции тот же раствор известной плотности, перемешивают и определяют плотность полученной суспензии дрожжевой массы по соотношению указанных плотностей (суспензий и растворов) .
Способ осуществляют следующим образом.
Суспензию дрожжевых клеток берут из, дрожжерастительного аппарата, принимая, что масса анализируемого объема суспензии (Mf) представляет собой сумму масс дрожжей (М2) и культуральной жидкости (Мд) :
(I)
М Мз + Мз Л ft + 3 (2) ,1/9 . Vt соответствующие объемы; ,jO,,y)j - плотности. Суспензию разделяют центрифугированием, например с помощью пробирочной центрифуги, на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, а перед разделением определяют плотность ( А ) исходной суспензии. После разделе.ния из пробирок отбирают культуральную жидкость и определяют её плотность ( / ). В пробирки для замещения .культуральной жидкости добавляют до первоначального объема (до метки) раствор известной плотности, перемещивают и вновь центрифугируют. После разделения фугат сливают, в пробирки вновь добавляют тот же раствор известной плотности, содержимое перемешивают и повторно отбирают пробу и определяют плотность суспензии / . Затем определяют массу дрожжевых клеток путем математического расчета, который осуществляют по соотношению указанных плотностей (суспензий и растворов) по формуле: . где Pf. - плотность размещающего раствора (разбавителя). Способ осуществляют в течение 4045 мин. при одной и той же температуре предпочтительно 20°С, которую поддерживают с отклонением на величину не более + 0,. Пример I. На контроль берут пробу суспензии, содержащей 100 г дрож жей в литре в расчете на прессованные дрожжи с влажностью 75/0. Плотности определяют при 20°С, при этом 1,01236 г/см, 1,00496 г/см. В качестве разбавителя используют водопроводную воду с f 0,99843 г/см После замещения плотность суспензии / 1,00618 г/см. 110 формуле (3) подсчитывают концентрацию биомассы дрожжей (-)f которая составляет 61,3 г/л. Анализ погрешностей показывает, что при ошибках противоположного знака в определении и -у на 0,00001 г/см абсолютная погрешность в подсчете концентрации равна, примерно, 3 г/л. Для уменьшения погрешностей анализируемую (исходную) суспензию сгущают несколько раз за счет ее жидкой фазы. Кратность сгущения (К) равна: где t/fi - объем суспензии после сгущения. При этом в К раз увеличивается концентрация биомассы, так как Г/д, . N Суспензию сгущают в пробирках центрифугированием одновременно с процессом замещения, при этом на пробирки наносят две отметки: одну (верхнюю) для первоначального объема, другую (нижнюю) - для объема в К раз меньшего. При сгущении способ осуществляют следующ 1М образом. Суспензию заливают в пробирки до верхней отметки и центрифугируют, после разделения половину пробирок снимают (черев одну) и отбирают из них культуральную жидкость до нижней отметки. Затем оставшуюся жидкость перемешивают с осажденшми дрожжами, получая сгущенную суспензию, которую отбирают и определяют ее плотность , Из оставшихся в центрифуге пробирок удаляют культуральную жидкость и определяют ее плотность J , а вместо нее до нижней отметки добавляют разбавитель. Затем содержимое перемешивают и центрифугируют, после чего отделенную жидкую фазу сливают и в пробирки вновь до нижней отметки добавляют разбавитель, перемешивают и отбирают для определения плотности у .
Концентрацию биомассы в сгущенной суспензии подсчитывают по формуле, аналогичной формуле (3):
МООО/ А-ч (ф), (6)
И р и м е р 2. Суспензию, анализируемую в примере I, сгущают в 2 раза, при этом jO 1,01976 г/см, а f.f 1,01393 г/сы, плотности культуральной жидкости и разбавителя те же, что и в примере I, при этом
122,6 г/л.
Jli
61,3 г/л. ТГв
Установлено, что, чем больше кратность сгущения, тем точнее окончательный результат контроля концентрации.
Необходимо отметить, что все операции спосоиа могут быть автоматизированы, сгущение и разделение суспензии возможно осуществлять под вакуул5оы, а подсчет концентрации биомассы после
aвтo iaтичecкoгo контроля - с помощью счетного устройства.
.Предмет изобретении
Способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, перед разделением суспензии на фракции определяют плотность исходной суспензии, а после ее разделения - жидкую фракцию удал;1ют и ипределП.п ео плотность, а к твердой добавляют такое же количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют, вновь добавляют к твердой фракции тот же раствор известной плотности, перемешивают и определяют плотность полученной суспензии, а затем осуществляют определение массы дрожжевых клеток путем математического расчета по соотношению указанных плотностей (растворов и суспензий).
