Способ получения гидрокортизона и ацетата кортизона Советский патент 1975 года по МПК C07C167/08 C12D13/00 

Изобретение ОГНОСИЕСЯ к ыикробиологическим способам получения гормональных веществ и может быть испопьзовано в медицинской промышленности для получения лекарственных нрепарятов гидрокортизона и ацетата кортизона.

Известен способ получения гидрокортизона и ацетата кортизона путем микробиологической трансформации вещества «J ieMxniTeuHa или его 21-ацетата в растворе органического растворителя, например этанола, zvметиясульфоксида, при помощи отмыто-го мицепия гриба .oc ойзЛХо(л. , выращенного в питательной среде, содержащей источники углерода, азота, соли фосфора, серы, магния, с последующим выделением гидрокортизона из реакционной смеси и химическим превращением осальных продуктов трансформации в ацетат кортизона.

Известный способ малопроизводителен, так как позволяет проводить храисформацию исходного стероида при концентрации его не выше 0,5 г/в.

Повышение концентрации исходного стероида приводит либо к ингибированию процесса трансформации из-аа токсичности растворителя, либо к стимулированию процессов деструкции стероидов.

С целью интенсификации процесса предложено в питательнуо среду дополнительно вводить соли калия , кальция и меди, а вещество t Рейхштейна или его 21-ацетат вносить дробно В таком количесгве, чтобы его концент рация в реакционной сыёси не превышала О,44),8 г/л. 21-аце1аг вещества i Рейхштейна цеяе сообрази о вносить в pacsозоре этанопа в концентрации 251лг/ия порциями по 0,15-0,20 г/л через каждне 2 часа до конечной концентрации 1,5-2,0 г/л, а в растворе диыетидсульфокоида в концентрации 25 ыг/мн порциями по 0,2-0,3 г/л через каждые 2 часа до конечной концентрации 2,5-3,t) г/л. Вещество р Рейхштейна удобно вносить в iQfcr-aoti метанольном растворе СаС в концентрации 30-35 ыг/мд порциями по 0,15 г/л через каждые 2 часа до конечной концентрации 2,0-2,5 г/л. Из солей калия, кальция и меди рекомендовано использовать в количестве 2 г/л, GaCOg - 0,5 г/л и Cuk,e, X - 0,015 г/а. Пример I. Культуру гриба с, c/renlо(л.ь штаыы 233 поддерживают на скошенном сусле-агаре во флаконах или пробирках. Цри пересеве гриб выращивают 12-14 дней при 28°С, а затем 6-8 дне при комнатной температуре. Дня трансформации используют куль туру, выращенную при пересеве с косяков не более, чем месячной давности. Споры гриба смывают с поверхности агара стерильной водой либо с редой и I мл споровой суспензии (3-10 спор/мл засевают среду в конические колбы объемом 750 ил со 100 мл среды Cj следр)щего состава (в г/л) : кукурузный экстракт 20,0; сахар-рафинад 30,0;Kj,HPOi, 2,0;К2.50 0,5; . W,0 ..0,.. qois CaCOg 0,5; вода водопроводная 1л. Среду стерилизую при 0,8 атм 30 мин, рН после стерилизации 5,5. Культуру выращиваю в течение 20-22 час при 28°С на круговой качалке (220 об/ыин). Полученным инокулятом в количестве 1 5-7 мл засевают такие же колбы со 100 мл ср1вды Cg и проводят вторую инокуляцию в указанных условиях. Мицелий гриба, отфильтрованный и отмытый от питательной среды водой (рН;7,0), испольауюх для проведения процесса трансформации. Трансформацию проводят также в медицинских колбах объемом 750 мл со 100 мл водопроводной воды (рН 7,0). В воду вносят мицелий гриба из расчета 8,0-9,0 г/л (по весу, воздушносухого мицелия) и вносят раствор исходного стероида в этаноле (25 мг/мл; растворителя) из расчета 0,15-0,20г/п и затем такое же количеств о стероида каждые 2 часа. Режим аэрации, температуру и перемешивание среды под держивают такими, как при выращивании культуры. В указанных условиях общее количество превращаемого стероида в течв-i ние всего процесса составляет 1,5-2,0 г/л. Продолжительность процесса контролируют методами хроматографии на бумаге или тонкослойной хроматографии на силикагеле (силуфоле). После исчезновения из реакционной смеси вещества и 4 W Рейхштейна и его 21-ацетата процесс останавливают подкислениеы среды Hi 50 до рН 2,0. Продолжительность трансформации в указанных условиях составляет 26-28 час. Выход стероидов составляет в среднем (в %): эпигидрокортизон20,0 гидрокортизон60,0 кортизон2,0 веществе Г Рейхштейна и его 21-ацета1 следы. Выделение гидрокортизона и превращение эпигидрокортизона и кортизона в ацетат кортизона проводят известными методами.