Способ получения вещества эпи- Советский патент 1975 года по МПК C12D13/08 C07C169/32 

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ получения вещества ЭПИ-F путем трансформации ацетата вещества «S Рейхщтейна с помощью штамма Thiegemella hyalospora в культуральной жидкости.

При известном способе стероид предварительно растворяют в ацетоне, метаноле, этаноле или другом растворителе и в таком виде вносят в культуральную жидкость для его дальнейшей трансформации.

Однако для такого способа характерна низкая концентрация исходного стероида в культуральной жидкости. Увеличению концентрации стероида препятствует наличие в культуральной жидкости токсичных для микроорганизма растворителей, вносимых со стероидом.

С целью повышения эффективности процесса и увеличения исходной концентрации ацетата вещества «S Рейхщтейна предложено это вещество вводить в культуральную жидкость в виде суспензии в диметилсульфоксиде (ДМСО). Суспензия представляет собой частицы ацетата вещества «S Рейхштейна в диметилсульфоксиде размером преимущественно мкм.

Механическое измельчение стероида можно проводить в присутствии ДМСО с помощью

любого известного способа: в фарфоровой ступке, с использованием шаровой мельницы для дезинтегратора. При этом получаются кристаллы величиной 3-20 мкм, которые доступны для ферментных систем микроорганизма. Пример. Культуру гиба Thiegemella hyalospora выращивают в течение 22 час в 400 мл среды в колбах с объемом 2 л при 28° С в среде следующего состава, %: куку

рузный экстракт 5,0 (по сухому весу); сусло пивное неохмелённое 1,0 (сахара по шкале Беллинга -14°); сахар-рафинад 1,0; рН среды 6,0.

В качестве инокулята используют споровую суспензию Т. hyalospora.

Засеянные колбы (3 колбы по 400 мл среды) инкубируют на круговой качалке (220 об/ мин) до получения 7-8 г/л биомассы (в пересчете на а бсолютно сухой вес мицелия).

После этого культуральную жидкость стерильно переносят в лабораторный ферментер и разводят в 3,5-4 раза питательной средой СС-3 следующего состава, %: К2НР04 1,0; MgSO4 1,0; CuSO4 0,001; ZnSO4 0,001.

Общий объем культуральной жидкости и среды СС-3 составляет 5 л.

Инкубацию в лабораторном ферментере продолжают до получения биомассы 3-4 г/л, после чего вносят стероид, который готовят

следующим образом: к 7,5 г ацетата вещества «S Рейхштейна добавляют 12,5 Л1л ДМСО, 50 г NaCl и 50 мл дистиллированной воды. Смесь тщательно растирают в фарфоровой ступке и образовавшуюся пастообразную массу ВНОСЯТ в культуральную жидкость для трансформации.

Одновременно со стероидом вносят 25 г сахара-рафинада в виде 50%-ного стерильного раствора.

Дальнейшую трансформацию проводят в тех же условиях (рН, температура), как указано выше, при расходе воздуха 0,2 л в I мин на 1 л культуральяой жидкости.

Окончание трансформации стероида определяют с помощью хроматографии в тонком слое.

Выделение стероида после окончания трансформации проводят на ионообменной смоле известным способом.

(Получают 6,75 г продукта, удовлетворяющего техническим требованиям (выход 76,2% от теоретического).

Предмет изобретения

1.Способ получения вещества ЭПИ-F путем траноформации ацетата вещества .«S

Рейхштейна с помощью штамма Thiegemella hyalospora в культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности процесса и увеличения выхода готового продукта, перед трансформацией ацетат вещества «S Рейхштейна измельчают в присутствии диметилсульфоксида и в культуральную жидкость вводят в виде полученной суспензии.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что измельчение осуществляют до размеров частиц, преимущественно 20-30 мкм.