ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПИГИДРОКОРТИЗОНА Советский патент 1973 года по МПК C12N1/14 

Известна питательная среда для получения эпигидрокортизона, содержащая 1 % кукурузного экстракта и 2,5% сухого вещества и глюкозы.

Недостатком известной ореды является наличие кукурузного экстракта, имеющего сложный и непостоянный состав, что приводит к образованию дополнительных побочных продуктов и затрудняет выделение конечного продукта.

Качество целевого продукта повышается за счет того, что питательная среда содержит, глюкозу 28,5-30,0, мочевину 1,0-1,1, фосфат калия однозамещенный 0,35-0,50, фосфат калия -двузамещенный 0,30-0,40, сульфат магния 0,13-0,15, сульфат железа 0,015-0,02.

Пример. Для подготовки посевного материала гриб Tieghemella hyolospora выращивают в пробирках на скощенном сусловом агаре в течение двух недель. Затем культуру смывают водой и используют для засева посевной среды из следующего расчета: смыв с одной пробирки на 500 мл посевной среды.

Посевная среда имеет следующий состав, г/л:

Мочевина1,0 (стерилизация отдельно) Глюкоза28,5-30,0

0,40 0,35 0,15 0,02

Кукурузный экстракт 0,5 (на сухое вещество), водопроводная вода, рН доводят после стерилизации 10%-ным раствором NaOH до 7,5-7,6.

Посевной материал выращивают на качалке в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды в течение 30 час. Полученным посевным материалом засевают синтетическую среду в количестве 3% по объему.

Синтетическая среда, на которой выращнвают культуру для проведения трансформации стероидов, имеет тот же состав, что посевная среда, но без кукурузного экстракта. Выращивание ведут также на качалке в колбах емкостью 750 мл со 100 мл синтетической среды.

Снустя 30-36 час культуру разводят водой в два раза, после чего разливают по 50 мл в колбы емкостью 750 мл. На 50 мл жидкости вносят по 20 мг 21-ацетата вещества «S Рейхщтейна в 1,5 мл этанола. Колбы помещают на качалку. Через 18 час жидкость экстрагируют пять раз равными объемами хлороформа и проводят хроматографическое разделение с последующим количественным он3ределением стероидов на спектрофотометре. Находят эпигидрокортизон с выходом 74% и гидрокортизон с выходом 8% (выход в расчете на количество внесенного ацетата вещества «S Рейхштейна). Выращивание гриба и трансформацию стероидов ведут при 28-30°С, используют качалку с 190-200 об/мин. Предмет изобретенияЮ 1. Питательная среда для получения эпигидрокортизона, содержащая источники азота и углерода, отличающаяся тем, что, с целью 4 повышения качества целевого продукта, она содержит глюкозу, мочевину, фосфат калия, сульфаты магния и железа, 2. Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что компоненты среды содержатся в следующих количествах, г/л: Мочевина 1,0-1,1 Глюкоза 28,5--30,0 Фосфат калия однозамещенный 0,35-0,50 Фосфат калия двузамещенный 0,30-0,40 Сульфат магния 0,13-0,15 Сульфат лселеза 0,015-0,02