Способ электрофоретического разделения саркоплазматических и миофибриллярных белков скелетных мышц животных Советский патент 1975 года по МПК B01K5/00 

(54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕН14Я САРКОПЛАЗМАТИЧЕСКИХ И МИОФИБРИЛЛЯРНЫХ БЕЛКОВ СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ ЖИВОТНЫХ 4960 .. . . l-3 гидрата окиси лития и 0,076 М борной киспоты; рН 8,5), содержащего 1 М мочевины (фракционирование саркоплаэматических белков); к 24,5 г крахмала добавляют 22О мл трис-боратного буфера, содержащ&то 4 М мочевины (({ акционирование миофибриллярных белков). Пох гченный гель заливают в кювету из плексигласа (270 х xllO X ), толщина дниша которого составлдат 5 V. Для применения способа электрофорети- ческого разделения белков скелетных мышц животных целесообразны и другие известные буферные системы. Саркоплазматические белки растворяют в трис-боратном буфере, содержащем сахарозу, а миофибриглярные белки - в 8 М мочевине из расчета 3-4 мг на погхоску хроматографической бумаги (3-10 мм), которую затем вставляют в гелевую пластину. Разделение белков проводят при силе тока 25-30 Д|а, напряжения 8О0-1100в ,в течение 2,О-3,5 час. Для обнаружения белков на протеинограмме гель вьщерживают в растворе НИРрозина. Денситометрирование протеинограмм проводят на микрофотометре МФ-4 с записью сигнала на автоматическом потенцио метре ЭПП-О9. Для эффективного охлаждения крахмального геля по предлагаемому способу электрофореза в качестве хладоносителя применяют этиловый спирт или фреон - 30, хлад агентом является смесь сухого льда и спир та, загружаемая в малый котел ультратермостата. При этом хпадоноситель поступает в охлаждающий столик (270 х 110 х X 25 мм) из плексигласа, .охлаждающая поверхность которого является одновременно дном кюветы, используемой для приготовления крахмального геля. Необходимая retJ пература краХмальДОг о гепя (22-2б°С и хладоносителя :ОТ.-5 до -25- и от -30 до -550С) для разделения соответственно cap коплазматических и миофибриллярньтх бел- , ков поддерживается ультратермостатом (например марки И-10 или И-8, ГДР). Температуру крахмального геля в процессе электрофореза определяют хромель копелевой термопарой с помощью потенциометра ПП-63 (класс 0,5) с внешним гальванометром Ml 95/2. Большое число и содержание отдельных белковых фракций как при разделении сарко п.лазматических белков, так и миофибрилляр; ных выявляется при использовании хладоно:сителя с .дифференцированной отрицательной I температурой. Значительно меньшее количество и число белковых фракций выявляется при электрофорезе в крахмальном геле, охлаждаемом льдом. Этот вывод подтверждается результатами денситометрирования протеинограмм, приведенными в таблице. Из нее следует, что сумма площадей пиков саркоплазмати- ческих. белков, разделенных при использовании хладоносителя с температурой от -5 до -25 °С, превышает почти в 1,6 раз площадь пиков, полученную при разделении белков с использованием льда. Еще большее различие наблюдается при разделении мио- фибриллярных белков. Так при использовании предложенного способа (температура хладоносителя от -30 до -55°С и температура крахмального геля 23°-26°) площадь пиков возрастает в 1,8 раз.

Саркоплазматические белки, см

Применение хла- доносителя с температуройот -5 до -250С

Миофибриллярные белки, см

Применение хладоносителя с температурой от -30 до -550С Формула изобретения 1. Способ Эпектрофоретического раздел пения саркоплазматическик и миофибрвпл5ф ных белков скелетных мышц животных в крахмальном геде, предусматривающий при-, готовление крахмального геля, его охлаждение и разделение белков методом электрофореза, отличающийся тем, что, с целью предотвращения тепловой денатурации белков в крахмальном геле в про цессе их разделения и промерзания геля, электрофорез проводят в крахмальном геле при температуре преимущественно 22-26°С с одновременным охлаждением геля хладоносителем, например этиловым спиртом или 4 еоном - 30 при температуре от -5 до -550с, 2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что разделение саркоплазматиче ---. ских белков в процессе электрофореза осуществляют при температуре хладоносителя от -5 до . 3,Способ по п. 1, отличающи с я тем, что разделение миофибриллярных белков в процессе электрофореза проводят при температуре хладоносителя от -30 дл -550С.