СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ Советский патент 1973 года по МПК G01N27/26 

1

Изобретение относится к биохимии.

Известен способ количественного определения белковых фракций путем электрофореза на крахмальном геле, заключающийся в просветлении непрозрачного фона окр ашенной электрофореграммы и денситометрировании геля. Однако указанный способ имеет сложную методику.

Целью предложенного изобретения является создание более простой методики.

Поставленная цель достигается тем, что фореграммы обрабатывают ацетоном, высушивают, разрезают, элюируют муравьиной кислотой с добавлением едкого натра и фотометрируют.

Пример. После электрофоретического разделения белковой смеси в крахмальном геле (по известной методике) и ее окраски крахмальную фореграмму переносят в ацетон на 20-25 мин. Затем ацетон сливают, фореграмму высушивают в термостате при температуре 37°С в течение 15 мин и разрезают на окрашенные зоны по видимым границам раздела, соответствующим окрашенным белковым фракциям. Каждый окрашенный и контрольный участки форёграмм- (контрольным служит

участок фореграммы, не содержащий белка) помещают в пробирки. В них же заливают по 5 мл муравьиной кислоты и кипятят на водяной бане 8-12 мин для перехода окраски в раствор (при этом происходит разрушение гранул). За это время пробирки 2-3 раза встряхивают. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 мл. 1 н. едкого натра и оставляют на 10 мин. Фотометрируют при синем

светофильтре на фотоэлектроколориметре. Для количественного определения белковых фракций можно использовать крахмальные фореграммы, хранившиеся 18-24 месяца в отмывающей смеси. По полученным величинам экстракцией на ФЭК дальнейшее количественное определение каждой белковой фракции проводят по известной методике.

Предмет изобретения

Способ количественного определения белковых фракций путем электрофореза на крахмальном геле, отличающийся тем, что, с целью упрощения методики, фореграммы обрабатывают ацетоном, высушивают, разрезают, элк)ируют муравьиной кислотой с добавлением едкого натра и фотометрируют.