Способ получения производных 7-ациламиноцефалоспорановой кислоты Советский патент 1976 года по МПК C07D501/04 

1

Изобретение относится к области получения новых производных 7 - ациламиноцефалоспорановой кислоты, которые 1 обладают улучшенными свойствами по сравнению с известньнии аналогичными соединениями и могут найти применение в фармацевтической про1«ышленносги.

Известен способ получения производных 7 -амнноцефалоспорановой кислоты общей формулы

N С-Д- ОС - HNj-r Н В.

J-NyJ-CHjTl, СОК ч

где RI и RI могут иметь одинаковые или различные значения - атомы водорода, моновалектный углеводород или присоединенный атомом углерода гетероциклический радикал, который может быть замещен, или RI и R; вместе означают двухвалентный углеводородный радикал, который может быть прерван гетероатомами и/или замещен; Ra - остаток свободной оксн группы или остаток оксигруппы, зтерифицированной в сложный эфир карбоновой кислотой, в котбром э(}жрные атомы кислорода могут быть . атомами серы, или карбаМоилоксигруппа, которая может быть N-замещена и в котОрсА атомы кНслороЛ.

могут быть замещены атомами серы, или гуаннлмеркапто или а - аминоалкил- или аралкиямеркаптогруппа, вторичная, третичная или четвертичная аминогруппа, меркаптотруппа, ароматически, алифатически или гетеродаклически этерифицкровавная в простри эфир, азидо- ИЛИ тиосульфаткая группа,

R4 - оксигруппа; пртпем этернфицированная меркаптогруппа имеет формулу S-Rj f л которой R - ароматический остаток, гетерсциклический радикал, преимуществмшо ш1тя-ше«1П1 членный гетероциюшческий радакал, сод жа1Ш1Й один-три гетероатста, например азот, кислород и/или серу, п(жсоещтенный к атому серы меркаптогруппы атомом углерода, с двоннЫ1 омзыо. Известный способ заключается в том, что соответствующую 7 - аошноцефалоспоршовую кислоту подвергают ащитрованию ацилируповт «гевтом, содержащим группу.

Ы«С-С-СОK R,

в которой RI и R% амеют указанные значения, в растворителе е пдследукнцим выдетгапм продуктов известныл епдСОбом. В полученных при этом соединениях, где Ra эфирная группа или свободная оксигруппа, эти гругаш известными приемами при необходимости замещают N - замещенной Карбамоилоксигруппой, гуанилмеркаптсйгруппой, а иминоалкил- или аралкилмеркаптогруппой, первичной, вторичной или третичной аминогруппой или меркаптогруппой, этерифицировакной алифатически, ароматически ят гетероднклически. Согласно изобретению предлагается основанный на известной реакции способ получения производных 7 ациламиноцефалоспорановой кислоты общей формулы NsC-e-CO-NH-. „ -KvVj.,, где RI и R2 - атомы водорода, йизший алкил, в соответствующем случае замещенные моно- или дициклические арил- или арил низший алкил, моно- или дищ1клические гетероциклический или гетерил-низщий алкил остатки или Rj и Rj вместе означают группу в которсм RI и R имеют значения, указанные для RJ и RJ, Ra - замещенный низшим алкилом или алкилтиогруппой гетероциклический остаток ароматического характера, содержащий два атома азота и по меньшей мере еще один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из азота, кислорода и серы, и присоединенный атомом углерода к атому серь меркаптогруппы, Cnocoio заключается в том, что соединение общей формулы Т-Р ше-д- CONH в, СООН где Ra - сложно-зтерифицировашшя оксигруипа; Н и Rj имеют указанные значения, или соль зтого соединения подвергают взаимодействию с тиолом общей формулы III HSRs или с его солью, где RS имеет указанные значения. Продукты выделяют в свободном виде или в виде соли или, при необходимости, если Rj и Rj оба означают атомы водорода, подвергают взаимодействию с альдегидом или кетоном, желательно в присутствии катализатора. Моно или дициклические гетероциклический или гетерил-низшие алкилостатки RI и Rj представляют собой пяти-шестичленные циклы ароматического харакрера, содержащие до трех гетероатомов, наиболее предпочтительны тиенил, фурил, пиридил, пиколил, гшррил, тенил, фурфурил, пиридил - 2 -метил. Заместителями моно- или лицнклических арилили арю1- ™зишй алкил, глоно- или дациклических гетероциклических И7шгетернл- шзщии алкил остатKOBRj и R2 являются одна и ли несколько одинаковых функциональных групп, такие как окси-, шзигая алКОКСИ-. низшая, алкилмер.каптоамино-, нитро-, цианогруппы, свободные или сложно-этерифкцированные карбоксигруппы, атомы галогена, трифторметильная группа. Гетероциклический радикал Rs содержит 5-6 атомов в кольце, преимущественно 5, может быть конденсирован с бензольным кольцом. Сложно-зтерифицировашшя окснгруппа представляет собой группу, зтерифицировашгую минеральной кислотой - галоидводородной кислотой, или низшей алкашсарбоновой кислотсй (которая может быть замещена атомом галогена), например уксусной, хлоруксусной, пропионовой, арил- или арил-низшей алкашсарбоновой кислотш, например бензойной, фе1шлуксусной. Соли новых соединений I представляют собой прежде всего терапевтически применимые соли щелочньЬс или щелочноземельных металлов, как натрий, калий, кальций, аммониевые соли, соли с органическими основаниями, например с триэшламинрм, N; - зтилпиперидином, дибензилэтилендиамином, прокаином, диизопрошшамином, этаноламином. Возможно также образование внутренних солей, если Rj - остаток основного характера. Реакцию соединения II с соединением III проводят обьино в таком инертном растворителе, как спирт, простой эфир, кетон, N, N - дизамещенный амид, например диметилформамид, диметилацетамид. При употреблении солей проводят реакцию предпочтительно в воде или в смешиваемом с эодой инертном растворителе или в смеси воды и одного из упомянутых растворителей, например в ацетоне, метаноле, этаноле, диоксане, тетрагидрофуране или в их водных растворах, предпочтительно в водном ацетоне. Реакцию проводят обычно при 15-70, предпочтительно 40-60° С. Величину рН раствора поддерживают предпочтительно 5,0-7,5. Если необходимо, прибавляют буфер, например фосфатный буфер или ацетат натрия, а, если используют соединение в форме соли щелочного металла, то добавляют, например, уксусную кислоту. Используют альдегиды, кетош 1 или нитриль алифатического характера, как. формальдегид, ацетальдегид, ацетон, метилэтилкетон, зтилбутилкетон, циклопентанон, даклогексанон, циклогептанон, ацетонитрил, трихлорацетонитрил или трифторацетонитрил, или аралифатического или ароматического характера, самре большее с двумя кольцами, которые замещены в данном случае, как указанно выше, например, бензальдегид, п - хлорбензальдегид, п - шгтробензальдегид, коричный альдегид, салициловый альдегид, анисовый альдепщ, ванилин, ацетофенон, бензофенон, п - оксиацетофенон, фе1шлацето штри-ч, беызонитрил или нитрил коричной Кислоты.

В качестве катализаторов при реакции oOM-vvia t карбонильными соединениями или нитрилами прежде всего пригамаются во внима ше соли, в частности ацетаты аммиака или аминов, например ацетат аммония, ацетат амиламина, ацетат гшперидана, ацетат триэтиламмония, дауэкс-3 (т.е. свободное основание и соль уксусной кислоты), далее соединения, к:оторые одновременно содержат кио лые и основные группы, например п - аминофенол.

В Приводимых примерах при тонкослойной хроматографии на силикагеле применяются следующие системы:

система 52 А - н - буганол-ледяная уксусная

кислота - вода (67:10:23); система 101 А - н -бутанол пиридин - ледянзя уксусная кислота -вода (42:24:4:30); система 102 А слождаш

уксусный эфир - метилэтилкетон - муравьиная

кислота - вода (50:30:10:10). Йодным раствором

для опрыскивания делают пятна видимыми.

Пример.

а) В растворе 3,2 г натриевой соли 7 - цианацетиламиноцефалоспорановой кислоты в 72 мп фосфатного буфера (1/15 М) с рН 6,4 суспендируют 1,52 г 2 - метил - 1, 3, 4 - тиадиазолин - 5 - тиона. Прибавляя раствор 2 н. карбоната натрия по каплям и перемешивая интенсивно, доводят рН до 6,4 и при пропускании азота нагревают смесь в течение 6 ч до 60° С. Показатель рН реакционной смеси повьшиется. при этом до 6,9- Охлаждают смесь и экстрагируют ее два раза, употребляя по 800 мл сложного уксусного эфира. Применяя по 10 мл буфера с рН 6,5, промьшают органические фазы еще два раза и выбрасьшают их. Расслаивают соединенные водные фазы 1 л сложного уксусного эфира и при интенсивном перемешивании доводят величину рН при помощи 4 н. соляной кислоты (примерно 8,5 мл) до 2,2. Возникающий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насыщают ВОД1ШЙ раствор поваренной солью и дополнительно зкстрап руют сперва 1 л и потом 0,6 л сложного уксусного :з$чра. После того как промыли органические фаэд два раза, используя по W МП насыщенного раствора йоваренной соли, сущат их сульфатом натрия, затем фильтруют через копонну 90 г силикагеля (днакютр 4,5 см, высота 12,5 см) и упаривают их под пониженным давлением досуха. Растворяют остаток в смеси ацетона и метанола и переводят его при помощи натрий - а отилгексаш1та в соль натр:ня.

Послещпою переводят в кислотную форму способом, описанным при экстракции, и затем фшп труют остаток, растворенный в смеси равщ.1х частей хлороформа и ацетона, через колонну из силикагеля (диаметр: . Bbicoia ТТ 9); получают 7 ПИанадетиламино - 3 ( метил - I, 3, 4 -тнадиазол - 5 - илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 -карбоновую кислоту. В УФ спектре в воде соединение имеет максимум X 2б8 нм.

Тонкослойная хроматография на силикагеле: RfszA 0.36; Rfio«A 0,54; RfioiA 0.68Сравнение: для 7 - бромацетилцефалоспоранозой кислоты RfsjA 0,42; Rfio:А цепорина: PfioiA 028; RfiojA 0,23; Rf,,13.

6) В растворе 12,8 г натриевой соли 7 - цнанацетиламиноцефалоспорансюой кислоты в 280 мл фосфатного буфера с рН 6,4 суспендируют 6,0 г 2 метил - 1, 3, 4 - тиадиазолин - 5 - тиона. Прибавляя раствор 2 н карбоната натрия по каплям и перемешивая интенсивно, доводят показатель рН до 6,6 и в среде азота нагревают смесь 8 ч до 60° С. Охлаждают смесь и экстрагируют ее сперва 2 л и потом 1,5 л сложного уксусного эфира. Применяя по 20 мл буфера с рН 6,5, промывают органические фазы два раза и выбрасывают их. Соединенные водные фазы расслаивают 2,5 л сложного уксусного эфира и при интенсивном перемешивании доводят показатель рН при помоши 4 н. соляной кислоты (примерно 35 мл) до 2,4.

Образующийся при этом бурый осадок удаляют

фильтрацией.

Разделяют фазы, насыщают водный раствор поваре1шой солью и дополнительно экстрагируют сперва при помощи 1,5л, а потом 1л сложного

уксусного эфира. После того как промыли органические фазы два раза, употребляя по 100мл насыще1шого раствора поваренной соли, сушат их сульфатом натрия, фильтруют их через колонну 150 г силикагеля (диаметр 4,5, высота 21см) и упаривают под пониженным давлением досуха. Растворяют остаток (13,9 г) примерно в 50 мл ацетона, прибавляют сухой слож:ный уксусный эфир и сгущают в вакууме до небольшого объема. Затем растворяют смесь еще раз в сложном уксусном

эфире, сгущают и добавляют несколько капель гексана. Вьщерживают смесь 1ч при -15° С, отфильтровывают осадок на нутче и дополнительно промьшают его сперва сложным уксусным эфиром - гексаном (3:1), потом гексаном. 3,7 г полученного так остатка адсорбируют из ацетонового раствора на 35 г нейтрального силикагеля. Сухой адсорбент загружают ,в колонну 300 г силикагеля (диаметр 4,5, :8ыссгта Д5 см) я эпюируют сперва смесью 2 об. ч. хлороформа и 1 об. ч. ацетона, а

потом хлороформом-ацетоном (1:1). Выбрасьшают первые 1,2л злюата, последуюи:ше 1,2л содержат реакционный продукт. Последние 1,2 л упаривают под пониженным давлением досуха, растворяют остаток в 40 об. ч. ацетона, прибавляют 10 об. ч.

метанола, и прибавлением 1,3 об. ч; 3 М метанольного раствора натрий - а - этилгексаната переводят CNKCb в кристаллическую натриевую соль 7 - цианацетиламино - 3 - (2 - метил - 1,3,4 - тнадказол - 5 илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 - карбоновой кислоты.

Натриевая саль не имеет четкую точку плавления, а разлагается примерно при;215С с окрашиванием в бурый цвет. Свободатая кислота плавится при 146-147°С (в вакуулшой трубке, с разложением).

ВУФ-спектре -макс, 272нм (е 13500); ( -35 ± 1° (с 1,02 в воде),

Тонкослоййая хроматография на шишкагеле: Rf52Ai 036; RfioiA 0.54; Rfjoi А 0,68;Rf сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислЬте {9:1) составляет 0,14.

Пример 2. В растворе 12,8 г натриевой соли 7 цианацетиламинодефалоспорановой кислоты в 280мл фосфатного буфера (Юн.) с показателем рН 6,7 суспендируют 5,2 г I - метил - 5 меркапто-тетразола. Прибавляя раствор 2 н. карбонага натрия по каплям и перемешивая иитенс1шно, доводят рН до 6,6 и в среде азота нагревают 7 ч до 60° С. Охлаждают и экстрагируют смесь сперва 2 л и потом 1,5 л сложного jTccyCHoro эфира. Промьшают органические фазы даа раза, употребляя по 20 мл буфера рН 6,5, и выбрасьшают их. Соед 1неиные водные фазы расслаивают 2,5 л сложного уксусного эфира и при интенсивном перемеишва1ши доводят рН при помощи 4 н. соляной кислоты (примерно 30 мл) до 2,5. Возникающий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насыщают водньш раствор поваренной солью и дополнительно экстрагаруют его снерва один раз при помощи 1,5 л и потом два раза при помощи 1л сложного уксусного эфира. После того как взболтали органические фазы два раза, употребляя но 100мл насыщегшого раствора поваренной соли, сушат их сульфатом штрия и под пониженным давле1шем сгущают до объема примерно 150 мл. При хорошем перемешивании добавляют к этому раствору 150 мл гексана маленькими порщ1ями и затем выдерживают смесь несколько часов на холоде. ,льтруют на нутче и промьшают остаток смесью (рложного уксусного эфира и гексана (1:1). Вы расьшают фильтрат. Остаток (6,57 г) адсорбируют из ацетонового раствора на 50 г нейтрального сияикагеля. Сухой адсорбент загружают в колонну 450 г нейтрального сияикл-еля (диаметр 5,75, высота 41 см) и элюируют при помощи смеси 2 об. ч. хлороформа и 1 об. ч. ацетона. Первые 1,5 л элюата выбрасьшают, последующие 2 л содержат реакционный продукт. 2 л элюата упаривают в вакууме досуха, растворяют остаток в 40 об. ч. ацетона, прибавляют 10 об. ч. метанола и прибавлением -1,3 об. ч. 3 М метанольного раствора натрий - а -этилгексаната переводят его затем в кристаллическую натриевую соль 7 - цианацетиламино - 3 - (1 -метилтетразолил,- 5 - илтио) метилцеф - 3 - ем -. 4 - карбоновой кислоты. В УФ - спектре

- -1-2211° Хмакс; 268 нм (с 11150); (с 0,99 в воде).

Тонкослойная хроматография на силикагеле: fif5aA 0,28; Rf,,54; RfjoaA 0,76;

Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусно кислоте (9:1) составляет 0,19.

Примерз.В растворе 12,8 г натриевой соли 7 - цианацетиламлноцефалоспорановой кислоты в 280мл фосфатного буфера (10%) с рН 6,7 суспендируют 6,0 г 3 - мел1л - I, 2, 4 - гиадиазолин - 5 . Прибавляя раствор 2 н. карбошта натрия покаилям и перемеидшая интенсивно, доводят эатем рИ до 6,6 и в азотной среде нагревагот смесь 6 ч до 60° С. Охлаждают и экстрагаруют ее сперва 2 л и потом 1,5 л сложного уксусного эфира. Органичес1ше фазы промьшают два раза, употребляя по 20 мл буфера с рН 6,5, и выбрасывают их. Соеданешп ге вод1п ге фазы расслаивают 2,5 л сложного уксусного эфира и при итенсивном неремеишвати доводят их при помощи 4 н. соляной кислоты до рН 2,5. Возникающий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насыщают водный раствор поварегшой солью и допол1штельно экстрагаруют его сперва один раз 1,5 л и потом два раза

1л сложного уксусного эфира. После того как взболтали оргашиесю1е фазы два раза, употребляя по 100 мл насыщенного раствора поварегаюй соли, сущат их сульфатом натрия и под пониженным давле1шем сгущают их до объема примерно 60 мл, причем получают объемистый остаток. При хорощем перемещивании добавляют к этой массе 100 мл гексана маленькими порциями и вьщерживают 1 ч на холоде. Фильтруют на нутче и промьшают остаток смесью сложного уксусного эфира и гексана (2:3). Выбрасьшают фильтрат. Остаток адсорбируют из ацетонового раствора на 50 г нейтрального сшшкагеля. Сухой адсорбент помещают на колонну 450 г нейтрального силикагеля (диаметр 5,75, высота 41 см) и элюируют смесью

2об. ч. хлороформа и 1 об. ч. ацетона.

Выбрасьшают первые 1,2 л элюата, последующие 2,5 л содержат реакционный продукт. Эти 2,5 л упаривают в вакууме досуха, растворяют остаток в 40 об. ч. ацетона, прибавляют 10 об. ч. метанола и прибавлением 1,3 об. ч. 3NI метанольного раствора натрий - « - этилгексаната переводят смесь в кристаллическую натриевую соль 7 - Ш1анацетиламино - 3 - (3 - метил - 1,2,4 тиадиазол - 5-илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 - карбоновой кислоты.

В УФ-спектре , 274 нм (е 750); aj -3 ±1°С (с 0,99 в воде).

Тонкослойная хроматография на силикагеле: Rfs2A 0.47; 0,62; Rfio2A 84; Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоты (9:1) составляет 0,37.

Пример 4. В растворе 25,6 г натриевой соли 7 - цишацетиламиноцефалоспорановой кислоты в 560 мл фосфатного буфера (10%) с рН 6,7 суспендируют 16,0 г 2 - метилтио - 1, 3,4- тиадиазолин - 5-тиона. Прибавляя раствор 2 н. карбоната натрия по каплям и перемешивая интенсивно, доводят рН до 6,6 и в азотной среде нагревают смесь в течеш(е 6 ч до 60° С. Охлаждают и экстрагируют смесь сперва 2,5 л, потом 2 л сложного уксусного эфира. Органические фазы промьюают два раза, употребляя по 50 мл буфера с рН 6,5, и выбрасывают и.х.

Соединенные водные фазы рассла1гаают 2,5 л сложного уксусного эфира и при ишенсивном перемешивании доводят их при 4н. соляной

кислоты до рН 2,5. Возшшающий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насыщают водный раствор повареш1ой солью и дополнительно эксграгирунгт его сперва один раз 1,5 л и потом три раза 1 л сложного уксусного эфира. После того как взболтали оргаш1ческие фазы два аза, употребляя nolOO мл насыщенного раствора поваренной соли, сушат их сульфатом натрия и под ониженным давлением сгущают до объема примерно 400 мл, причем образуется осадок. При хорощем перемешивании добавляют к этой сглеси 350 мл гексага и дают ей стоять 1 ч на холоде. Фильтруют объемистый осадок на нутче и промыают остаток смесью сложного уксусного эфира и ексана (1:1). Выбрасьгаают фильтрат. Остаток адсорбируют из ацетонового раствора на 50 г нейтрального силикагеля. Сухой адсорбент загружают колонну 750 г нейтрального силикагеля (диаметр 5,75, высота 41 см) и элюируют смесью 2 об. ч. лороформа и 1 об. ч. ацетона. Выбрасывают первый 1 л элюата, последующие 2 л содержат реакционный продукт. 2 л упаривают в вакууме досуха, растворяют остаток в 40 об. ч. ацетона, прибавляют 10 об. ч. метанола и прибавлением 1,3об. ч.|ЗМ. метанольного раствора натрий - а - этилгексаната переводят затем смесь в кристаллическзто натриевую соль 7 - цианацешламино 3 - (2 - метилтио , 3, 4 - тиадиазол - 5 - илтио) - мет1шцеф - 3 - ем карбоновой кислоты. В УФ-спектре |Хмакс 274 им (е 13500); а -79±1 Тс О,95 в воде). Тонкослойная хроматография на сит икагеле: Rfs2A 0 40; Rf 101А 0,45; RfioiA 0,78; Rf в сложном уксусном эфире-ледянш уксусной кислоте (9:1) составляет 0,30.

Пример 5. В растворе 12,8 г натриевой соли 7 - цианацетиламиноцефалоспорановой кислоты в 280 мл фосфатного буфера (10%) с рН 6,7 суспендируют 5,27 г 2 - метил - 1, 3,4- оксадиазолиц: 5- тиона. Прибавляя раствор 2 н. карбоната натрия по каплям и перемешивая икгенсивно, доводят рН до 6,6 и в азотной среде нагревают смесь в течение 7 ч до 60° С. Охлаждают и экстрагируют смесь сперва 2 л, а потом 1,5л сложного уксусного эфира. Органические фазы промьтают два разл, употребляя по 20 мл буфера с рН 6,5 и выбрасывают их. Соединенные водные фазы расслаивают 2 л сложного уксусного эфира и при интенсивном перемещивании доводят их при помощи 4 н. соляной кислоты до рН 2,5. Возникающий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насыщают водный раствор поваренной солью и дополнительно экстрагируют его сперва раз 1,5л, а потом два раза 1л сложного уксусного эфира. После того как взболтали органические фазы два раза, употребляя по 100 мл насыщенного раствора поваренной соли, сущат их сульфатом натрия и под пониженным давлением сгущают до объема примерно 200 мл, выпадает осадок. При хорощем перемешивании добавляют к массе 200 мл гексана и выдерживают 1 ч на холоде.

Фильтруют на нутче и промывают остаток смесью слотаюго уксусного эфира и гексана (1:1). Выбрасывают фильтрат. Остаток адсорбируют из ацетонового раствора iia 30 г нейтрального силикагеля. Сухой адсорбент помещают на колонну 570 г нейтрального силикагеля (диаметр 5,75, высота 47 см) иэлшируютсмесью2об.ч. хлороформа и 1 об.ч. ацетона. Выбрасьшашт первые 2 л элюата, послег1ую1Ш1е 2 л, содержащие реакционный продукт, упаривают в вакууме досуха и затем растворяют в небольшом количестве Сложного уксусного эфира. Таким образом получают почти бесцветные, сильно сольватировашше кристаллы кислотной формы. Последш1е растворягот в 40 об. ч. ацетона, добавляют 10 об. ч. метанола и прибавлением 1,3 об. ч. ЗМ метанольного раствора натрий - а - этилгексаната переводят затем раствор при медленном сгущении последнего в кристаллическую натриевую соль 7 цианацет1шамнно - 3 (2 - метил 1, 3, 4 -оксадиазол - 5 - илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 -карбоновой кислоты. В УФ-спектре а268нм (е 10500); а -57±1° (с 0,9 в воде). Тонкослойная хроматография на силикагеле: Rfs2A 0.27; RfioiA 0,38; Rf,.65; Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоте (9:1) составляет 0,18.

Примерб. В растворе 12,8 г натриевой соли 7 - цианацетиламиноцефалоспорановой кислоты в 280мл фосфатного буфера (10%) с рН 6,7 суспендируют 5,8 г 5 - меркапто - 3 - метил - 1, 2, 4 триазола. Прибавляя раствор 2 и. карбоната натрия по каплям и перемешивая интенсивно, доводят рН до 6,8 и в азотной среде нагревают смесь 8 ч до 60 С. О-Хлаждают и экстрагируют смесь три раэа, употреблял по 1,5 л сложного уксусного эфира. Органические фазы промывают два раза, употребляя по 50 мл буфера с рН 6,5, и выбрасывают их. Соединенные водные фазы расслаивают 2 л сложного уксусного эфира и при интенсивном перемешивании доводят их при помощи 4 н. соляной кислоть (примерно 45 мл) до рН 2,5. ВозникаЬщий при этом бурый осадок удаляют фильтрацией. Разделяют фазы, насьпцают водный раствор поваренной солью и зкстрагируют сперва при помощи 1,5 л и потом при помощи 1 л сложного уксусного эфира. После того как взболтали органические фазы два раза, употреб;1яя по 100 мл насыщенного раствора поваренной соли, сушат их сульфатом натрия и под пониженным давлением концентрируют примерно до 300 мл. При интенсивном перемешивании добавляют к зтому раствору 300 мл гексана, при этом вьшадае т осадок. Выдерживают реакционную смесь 30 NfflH при 0°С, отфильтровывают осадок на нутче и дополнительно промывают сперва сложным уксусным эфиром-гексаном (1;1), потом гексаном. 5,9 г полученного так осадка адсорбируют из ацетонового раствора на 30 г силикагеля. Сухой адсорбент загружают в колонну 470 г силикагеля (диаметр 5,75, высота 42 см) и элюируют сперва смесью 2 об. ч. хлороформа а 1 об. ч. ацетона

(и л) и потом смесью 1 об. ч хлороформа и 1 об. ч. цетона (3л).

Первые 6 л элюата выбрасьшагот, последующие

3л, которые содержат реакционный продукт, упар1шают в вакууме досуха и растирают остаток со ложным уксусным эфиром. После фильтрации получают 7 - цианацетиламино -,3 - (3 - метил -1,2,

. триазол - 5 - илтио) - мегЬшцеф - 3 - ем 4 карбоновую кислоту в виде легко окрашегаюго

порошка. Последш Й суспендируют в метаноле, прибавлением 1,3 об. ч. 3л. метанольного раствора натрий - а - этилгексаната доводят его до растворения и прибавлением TQfo же объема абсолютного этанола и сгущением до небольшого объема переводят его в твердую натриевую соль. Легкое окраишвание вещества моКно удалить, обрабатывая его аквшированным углем в метанольном растворе. С целью очистю{ переводят натриевую соль оп;пь в кислоту, подкисляя водный раствор натриевой соли до рН 2,5 и экстрагируя сложным уксусным эфиром; полученную кислоту растирают со сложным уксусным эфиром и затем получают опять натриевую соль, как было описано вьпле. ВУФ-спектре Хмакс 267 нм (е 9900); а -llil (с 1,0 в воде). Тонкослойная.хроматография насиликагеле: , 0,31; RfjoiA O. RfiozA ,

О,:57; Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоте (9:1) составляете,.

Пример 7.В растворе 1,34 г натриевой соли 3 - прош онилоксиметил-7- цианацет шаминоцеф3 - ем - 4 - карбоновой кислоты в 30 мл фосфатного буфера (10%) с рН 6,7 суспендируют 0,53 г, I метил - 5 - меркалтотетразола. Прибавляя раствор 2 н. карбоната натрия по каплям и перемешивая интенсивно, доводят рН до 6,6 и в среде азота нагревают смесь в течение 7 ч До 60° d Охлаждают и экстрагируют смесь сперва 200 мл, потом 150 мл сложного уксусного эфира. Органические фазы промьтают два раза, употребляя по 5 мл буфера с рН 6,5, и выбрасывают их. Соединешаш водные фазы расслаивают 300 мл сложного уксусного эфира и при интенсивном перемешивании доводят их при помощи 2 н. соляной кислоты (примерно 6 мл) до рН 2,5. Образующийся бурый бсадок удаляют фильтрацией. Равделяют фазы, насыщают водный раствор поваренной солью и дополнительно экстрагируют еще два раза, употребляй цо 150 мл сложного уксусного эфира. После того как йэболтали органические фазы два раза, употребляй во 10 мл насыще1шого раствора поваренной соли, сушат их сульфатом натрия и при пониженном давлении сгущают до объема примерно 20 мл. При хорошем перемещивании добавляют к этому раствору 20 мл гексана маленькими порциями и выдерживают реакционную смесь несколько часов на холоде. Отфильтровывают на нутчй и промьтают остаток смесью сложного уксусного эфира и гексаиа (1:1). Выбрасывают фильтрат. Остаток адсорбируют из ацетонового раствора на 5 г нейтрального силикагеля. Сухой адсорбент загружают в колонну 5 г

нейтрального силикагеля и элюируют смесью 2 об. ч. хлороформа и 1 об. ч. ацетона. Первые 160 мл эrfюaтa выбрасывают, последующие 200 мл, содержащие реакщюнный продукт, упаривают в

вакууме .досуха, растворяют остаток в 30 об. ч. ацетона, прибавляют 5 об. ч. метанола и прибавлением 1,3 об. ч. 3 М метанольного раствора натрий а - этилгексаната переводят реакционную смесь в кристаллическую натриевую соль 7 - цианацетиламино - 3 - (1 - метилтетразолил - 5 - илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 - карбоновой кислоты. В УФ-спектре Хмакс р 268 нм (б 11150; (а +22±1° (с 0,99 в воде). Тонкослойная хроматография на силикагеле: RfjjA 0,28; RfioiA

Х),54; RfioiA 0,76; Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоте (9:1) составляет 0,19.

Исходньй продукт изготовляют следующим образом.

20,0 г (36,7 моля) N, N фталоилцефалоспорина С (72 н.) взмучивают в 400 мл дистиллированной воды и при помощи 71 мл 1 н. натрового щелока доводят до растворения. Раствор перемещивают 20ч с 400мг ацетилэстеразы из Bacillus

subtilis АТСС6633 при 37° и рН 7,3. Выделяющуюся при ферментативном омылении уксусную кислоту нейтрализуют 32 мл нормального натрового щелока. По окончании реакции омыления добавляют сложный уксусный эфир и при

охлаждении до 0° С и перемещивании , прибавляют фосфорную кислоту, пока не достигнут рН 2,3. Насыщают водаую фазу хлоридом натрия и экстрагирзоот ее еще три раза 300 мл сложного уксусного эфира.. Промывают экстракты насыщенным раствором поваренной соли, сущат сульфатом натрия и упаривают. Дезацетилированный сырой продукт N, N - фталоилцефалоспорина С растворяют в 320 мл диоксана и 80 мл метанола, прибавляют 18г:.дафешшдназометана порциями и перемешивай 3 Ч гфИ КЙййматйой «ешературе. Упаривают раствьр.:дреуха.и аагерируют его два раза 400 мл простого эфйра астворйютостаток в бензоле и хроматографируют на 200 г промытого кисдотой силикагеля (диаметр колонны 4,15 см); выделяизт фракции rto 100 мл. Выбрасывают три фракции бензола, три фракции бензола-сложного уксуснй о эфира 0:1) и три фракция бензола-сложного уксусйдго эфира (5:5). Последующими четырьмя фракциями бензола-сложного уксусного эфира (5:5)

элюируют €ензгидриловьЕЙ эфир 7 - фтайймидо - 5 - сарбсксибен:лтщрилвалероил1 - аминоцеф - 3- ем- З-хжсиметил- 4 - карбоновой кислоты и перекриста:(0газовьшают его из сложного уксусного эфира-шклогексаш, т. пл. 113-115° С; а

+5 ±1° (с 1,131 в хлороформе); УФ-спектр потлощения (в этиловом спирте вьющей очистки): Амак 1259нм (е 9100) иАТБГфл) 241 нм (е F14600). При тонкослойиш хроматографии на силикагеле в системе толуол-ацетон (4 : 1) веществ)

имеет коэффициент Rf 0,11, (выявление при помощи йода). К смеси 3,46 мл(40ммолей)хлорангидрида пропионовой кислоты и 2,90 мл;(3бммолей) пиридина в 30 мл абсолютного |димстилформашадз I прикапьшают при охлаждении сухим льдом раствор 3,34 г |(4ммоля) бензгидрилового эфира 7- 15 - фталимидо - 5 - карбоксибензгидрилвалероил аминоцеф - 3 - ем - 3 - оксиметил 4 чсарбрновой кислоты в 7 мл диметилформамида. Дают смеси стоять 3 ч при комнатной температуре. Разделяют реакциошйш продукт между 800 мл 10%-ного первичного ортофосфата калия и 1000 мл сложного уксусного эфира, и экстрагируют его еще два раза, употребляя по 500 мл сложного уксусного эфира, Промывают экстракт сложного уксусного эфира насьвденным раствором поваренной соли, сушат сульфате натрия и упаривают. Бензгидриловый эфир 7 - 5 - фталимидо -5 -карбоксибензгадрилвалероил - аминоцеф - 3 - ем 3 - прсяшонилоксиметил - 4 - карбоновой кислоты .ерекристаллизовьшают из ацетона-сложного уксусного эфира в форме бесцветных друз, T.nJi.l63-16fC, а -И6 (с 1,110 в хлороформе); УФ-спектр поглощения (в этиловом спирте высшей очистки): Лмако. 260 нм (е 9100)Хинфл. 241 нм (е 14300).При тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе толуол-ацетон (9:1) вещество имеет коэффициент Rf« 0,19. 2,03 г (2,28ммоля) бензгидрилового эфира 7 - (5 фталимидо - 5 - карбоксибензгидрилвалерокл) - аминоцеф 3 ем - 3 -пропиошшоксиметил - 4 - карбоновой кислоты растворяют в 20 мл метиленхлорида, .охлаждают до -10° С и прибавляют 1,75 мл (21,7 ммоля) абсолютного пиридина. При перемешиваиии добавляют затем в течение 12 мин 11,4мл (5,5 ммоля) свежеприготовленного 10%-кого раствора пятихлористого фосфора в абсолютном метиленхлориде. После этого перемешивают 40 мин при -10 С. В течение 3 мин к раствору прибавляют 7,62 мл (188 лололя) охлажденного до -20° С абсолютного метанола. Перемешивают реакционную смесь сперва 30 мин при -ЮС и затем 60 мин при . При хорошем перемешивании прибавляют 19 мл (19 ммолей) 1 и. соляной кислоты и дают смеси реагировать 45 мин при 20° С. При помощи 3,8 мл 50%-ного водного раствора трет ортофосфата калия и 18,3 мл 2 н, натрового щелока доводят затем рН смеси до 8,0. Разделяют фазы, упаривают высушенный над сульфатом натрия экстракт метиленхлорида и сушат его 2 ч под высоким вакуумом. Растворяют остаток в 50 мл толуола - сложного уксусного эфира (3:1) и экстрагируют его три раза, употребляя по 20 мл этанола - 2 в. соляной кислоты (1:1). При помощи 30 мл 2 и. содового раствора доводят рН соединенных нижних фаз до 7,0, упаривают спирт и при помошя сложного уксусного эфира экстрагируют водный раствор еще раз. Непосредственно после этого растворяют высушеш1ый н упаренный экстракт сложного уксусного эфира в 1,14мл (10,5 ммоля) а шзола. охлаждают до -|30°С и прибавляют 3,32мл (43,5 ммоля) трифторуксусной кислоты. Дают кисдоте реагировать 30 мня при fZOC и упаривают ее после этого, прибавляя толуол. К остатку добавляют 40 мл охлажденного до -30 С метанола и прибавлением 0,4 мл триэтиламина доводят ве)шчину рН до 3,5. Центрифугируют спонтанно возни(ающий осадок, промьтают его два раза, употребляя по 5 мл метанола, метиленхлорида и простого эфира, и сушат его в высоком вакууме. 3 Пропионилоксиметил 7 - аминоцеф - 3 ем - 4 карбоновая кислота представляет собой аморфный порошок. . Ы +110 ±1° (с 1,000 в 0,5 н. бикарбо нате (атрия); УФ-спектр поглощения (в 0,5 н. бикарбонате натрия) | макс262 им (е 8200). При тонкосяойной хроматографии на силикагеле в системе н-бутанол-пириднн -ледяная уксусная кислота-вода (300:20:6:24) коэффициент Rf составляет 0,58 (7 - аминоцефапоспорановая кислота: Rf 0,35). В колбе для сулъф фования емкостью 25 мл с лагнитнсда мешалкой прибавляют 0,596 мл триэтиламина и 0-,4.76 мл тг схлорацетилхлорида к раствору 374 мг-циануксусной кислоты в 2,5 мл тетрагидрофурана в азотной среде при температуре от -50 до -70 С. При перемеишвании дают смеси реагировать 15 мин при температуре от -50 до -70° С. После яогв п{жбавлякгг охлажденный до -70° С раствор 573мг(2ммоп11) 7 - аминоцеф - 3 - ем - 3 Пропионилоксиметил - 4 - карбоновой кислоты и 1 мл триэтипамина в 6,5 мл метиленхлорида и потом перемешивают 45 мин при температуре от -50 до -70 С в азотной среде. Затем перемешивают исходную смесь с 10 мл 10%-ного водного раствора дитдрофосфата калия, причем получается показатель рН 5,0. Отделяют нижнюю органическую фазу и дополнительно :жстрагируют водную фазу сперва 5мл метилекхлоридд и потом 10мл сложного уксусного эфира. Водную фазу расслаивают 20 мл сложного уксусного эфира, подкисляют ее 2 н. соляной кислотой до рН 2,0 и после насыщения ее поваренной солью и разделения фаз экстрагируют еще два раза, употребляя по 10мл сложного уксусиого эфира. Три вытяжки сложного уксусного эфира промывают 10мл насыщенного раствора поваренной соли, сушат сульфатом натрия и фильтруют через колонну (диаметр 16мм, высота 10см) 5 г сйликагеля. Дополнительно промьтают при помощи 20 мл сложного уксусного эфира и концентрируют соединенные фильтраты до 2,3--3,0г. С помощью 50 МП простого эфира-петролейного эфира (1:1) осаждают 3 - пропионмлоксиметил - 7 цианацетидаминоцеф - 3 ем - 41 карбоновую кислоту из концентрированного раствора и перекристаллизовывают ее из тетрагидрофурана-сложного уксусного эфира, т. пл. 146-150°С. При тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (67:10:23), коэффициент Rf составляет 0,35 (7 цианацеталаминоцефалоспорановая Ю1слота; Rf

O,26).. .

Пример 8. В .растворе 8,84 г 7 - (фенил - а цианацетиламино) цефалоСпорановой кислоты в 190 мл 10%-ного фосфатного буфера с рН 6,7 g суспендируют 3,23 г 1 « метил - 5 - меркаптотетразола. Прибавляя затем при интенсивном перемешивании 80мл 10%-него раствора К2НР04, доводят значение рН до 6,5 и смесь нагревают в атмосфере азота в течение 7 ч при 60 С. Смесь ю охлаждают и экстрагируют дважды подряд 1 л и 0,5 л уксусного эфира. Органичесю1е фазы npQмывают два раза, применяя по 20 мл буфера с рН 6,5, и выбрасьтают. Соединенные водные фазы расслаивают 1,5л уксусного эфира и доводят 4н. j5 соляной кислотой (приблизительно 37 мл) при интенсивном перемешивании до рН 2,6. Образующийся при этом бурый осадок удаляют путем фильтрации Фазы отделяют, водный раствор насьпцают поваренной солью .и дополнительно экстрагируют 20

1л, а потом 0,5 л уксусного эфира. После двухкратного встряхивания органических фаз, применяя по 70 мл насьпценного раствора поваренной соли, их высушивают над сульфатом натрия и сгущаю в вакууме до объема прибзтизительно 25 100 мл. К.этому раствору прибавляня небольшими порвдями при хорошем перемешивании 100 мл гексана и оставляют его эатвм.стоять нескодакочасда при низкой температу|Ж. ,ФИ11ЬТру. на нутче, и остаток промывают cav1leei iб ;/: ЙЗ Ййf V;зф фa и зо гексана (1:1). Фильтра BfiiiEp cJits Ji рётаток (8,5 г) адсорбируют на ацетовного paetfioiia на 50 г нейтрального силикагеля. Сухой адсорбент помещают в колонну 450 г нейтрального силикагеля (диаметр 5,75, высота 41 см) и элюяруют смесью 35

2об.ч,.хлороформа и 1 об. ч..ацето«а. Первый 1 л элюата выбрасьшают, следующие фракции содержат продукт реакции. Эти фракции ,вьшаривают в вакууме досуха, остаток растворяют в 40об. ч. ацетона, добавляют 10 об. ч..м1етанола и затем пере- 40 водят прибавлением 1,3 об. Ч..З.М метанолЬного раствора натрий - а зтилгексаната в кристал лическую натриевую соль 7 - (а - фенил - а

- ииаиацетиламино) - 3 - (1 - метилтетразолил - 5 илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 - карбоновой 45 кислоты. При тонкослойной хроматографии на силикагеле RfsjA 0.44; Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоте (9:1), расстояние 16 см, составляет 0,53. .

Пример 9. В растворе 207 мг 7 - (о - фенил а - 11ианацетш1амино) - цефалоспорановой кислоты в 4,5 мл фосфатного буфера (10%-ного) с рН 6 суспендируют 86 мг 2 - метил - 1,3,4 - тиадиазолинт - 5 - тиона. Приливая затем 2,7 мл 10%-ного 55 раствора К2НРО4, доводят при интенсивном перемешивании до значения рН 6,5 и нагревают в атмосфере азота в течение 7 ч при 60° С. Смесь охлаждают и экстрагируют дважды по 40 мл уксусног о эфира., .60

Органические фазы промывают, применяя по 3 мл буфера эначе1шя рН 6,5, и выбрасывают. К соединенным водным фазам при;швают 50 мл уксусного эфира и доводят при интенсивном перемешива1ши 4 н, соляной кислотой рН до 2,6. Образующийся при этом бурый осадок удаляют путем фильтрации. Фазы отделяют, водный раствор насыщают поваренной солью и дополнительно экстрагируют 30 мл, а потом 20 мл уксусного эфира. После двухкратного встряхивания органических фаз с 5 мл насыщенного раствора поваренной сопи их высушивают над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в смеси хлороформ-ацетон (1:1), фильтруют через колонну 20 г силикагеля (диаметр: высота 1:9), фильтрзаот и выпаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в небольшом количестве ацетона и переводят 3 М метанолышгм раствором натрий а этилгексаната в натриевую соль 7 - (а - фенил - а цианацетйламино) - 3 - (2 - метил - 1, 3, 4 тиадиазол 5 - илтио) - метилцеф - 3 - ем - 4 карбонойой кислоты. .

При то.якос31вййой:Жро у1а;т(Эграф.ии на силикагеле RfsjA STvfif в сложном уксусном эфире-ледяной у1 сурн6й кислоте (9:1), расстояние 15см, составляет 0,51. Дпя сравнения: для 7 бромацетилцефалойпорановой кислоты O,51, Rf в сложном уксусном эфире-ледяной уксусной кислоте (9:1), расстояние 15 см, составляет 0,69.

Пример 10. В.растворе 675мг7- (а-пхлорфенил - а - цианацетиламино) - цефалоспорановой кислоты в 15мл фосфатного .буфера (lO -Horo) с рН 6,7 прибавляют 228 мг 1 - метил 5 - меркаптотетразола. Затем добавлением 5,6мл 10%-ного раствора KjHPO при интенсивном перемешивании доводят рН до 6,5 и нагревают в атмосфере азота в течяние 7ч до 60° С. Охлаждают и смесь экстрагируют 80 и 40 мл уксусного эфира. Органические фазы промьтают, применяя два раза по 5 мл буфера (рН 6,5), и выбрасывают. Соединенные водные фазы расслаивают 100мл уксусного эфира и доводят при интенсивном перемешивании 2 н. соляной кислотой рН до 2,6. Образующийся при этом бурый осадок удаляют с помощью фильтрации. Фазы отделяют, водный раствор насьоцают поваренной солью и дополнительно экстрагируют 80 и затем 4р 1ИЛ уксусного эфира. Органические фазы встряхивают два раза, применяя по 10 мл

50 насьпценного раствора поваренной соли, затем сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме до объема приблизительно 10 мл. К.этому раствору прибавляют небольшими порциями при хорошем перемешивании 10 мл гексана и выдерживают несколько часов при низких температурах. Фильтруют на нутче и остаток промывают смесью уксусного эфира и гексана (1:1). Фильтрат выбрасьшают. Остаток адсорбируют из ацетонного раствора на 4 г нейтрального силикагеля. Сухой адрорбент помещают на колонну 40 г нейтрального