Штамм вниигенетика-115-продуцент кормогризина Советский патент 1976 года по МПК C12K1/00 C12D9/20 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается гюлучетшя npoMijin ленных штаммов, продуцирующих кормовой антабиотик гризин.

Кормовой антибиотик гризин является отсчественным продуктом и широко применяется в (ССР в сельском хозяйстве в качестве стимулятора роста животньсх. Микробиологический синтез данного антибиотика является еди тетвенным методом его получения.

В настоящее время в npoMbiuineiiiio . ,о. водстве кормогризина в СССР используется производственный штамм ВНИИгенетика-- 1552. Основным недостатком используемого штамма ВПИИенетика 1552 является его ч вствительность к производственным фагам Рд 56 и Рд 5. ILitnuJc лабораторных микробиологических исслелоблщй СЕЙ де те льсти у ют о том, что на штамме BHllMreiieтика--1552 актинофаги Рд56 и Рд 57 с Б1,сокой эффективностью развиваются как на твердой, так и в жидкой питательной средах, достигая титра для обоих фагов порядка 110° - 1-10 фаговых частиц на 1 мл. Чувствительность штамма BWIHreнетика-1552 к фагам Рд 56 и Рд 57 бььла пр1гчиной с;т.-.:. сЬ;и i ;; :г:ч-;; ;;;:йЛ1од:1В:,iinxcH з iipouei:- .;:; , ;I-;T:.I; ;1;:еп:;л;1т; кормогриз.па.

I ):,:п:;(1 co3JuJi:Ji:i тзко-м ытал1 1а--про;г)це1Па; ;;1,,)-, On; yciOH-iiffl к JiKTU4ecKn;v-;y пенстамю bdiOH i 6 и Pn : на: бс;сс часто вст; гчаюь: 1хся и ;iv:i ;; :Bi:;:cT4,, . оолала.: иовь:11:гнкъ1м )р(}внем 2K i-p;i(VTH. пре;1лаг;1}от гювый lUTaMNf ВННИгенетик:;-). :твляю1аийс;. мутантом фа; огувствительнотч: 1ьггл:л1а В)iillrc легика--i 552, в pc:jV::bv;iTe :e.ieKiiiiu пс npii:5iiaK) устойчивост к: фа1П;ч: Рд 56 и lipu обработке спор игтамма РП:М. ::с п V: р:.:: i-npoM inTpcjc-rvaH;i;iv HanpC;;d: /:, ч. inoiTvces qriseus йНИНгснетик:;-И -п1 олуцент jiuia Хранится в кпзес K-.MbTV Р;:.;-енст11ка. рег 1стрщи1онньш нсУл:;- S - IfiHii-iM устойчив к aixтингчЬагал; Рд 5 ;; Q 57 и (.i,i Ui;pyc) а тибношк .; ;ч J ir ;Ci -I voO;i ;; Мл.

NlintboJKii ; . клетки л11:циЛ1;н нтецилнон a;t;-v,ib с:;;1Г пос 1Ь- спирялыллс. споры овзлькые Пй-;л;; Ч;;,; ; .;. 1 .. х О.- i мк.

К л b г V р а л Ъ г. Ы S и ф я З к ; л о ; 1 ч е с к и с

п 1)Н J ;i ак н : на картофельной среле образует колонии лмалгетрс:- . округлые, слегка выпукл.le. rna:;Ki;c. o:i лпп.Л ч-ицелии :счП О-je; ui. в цеН ре

КОЛОНИЙ Ьолее свеиО)й. Четко Зп1раж5.на белая , Обратная сторона колонии серая со шгпюй xwмпй. № соевой среде образует колонии ш-таме-|юм9--10мм, округлой формы, гладкие, воздушный мицелий светло-серый. Колонии с белой кадмой, обратная сторона колошти озрая, со ::ветлой каймой. На мясо-пегггонном агаре обгзазует колокии диаметром 5-6 мм, округлые, глагские. слегкя выпуклые, со слабо развитым возцтиоагм р,жце лием. На, синтетической среде (СР- Г; сбразуе-КОЛ015ИИ диаметром 8-9 мм, округлые, гладкие, слегка вьшуклые, зоздушньш. «рьй. а, краям колонии светло-серая кайма, ооойпий ci-л рона колонии темно-серая, со светлой каймой, ш х идкой регламентной производсгве -шой среде 8-часовая культура образует крупные сплетеж я мицелия из свободно растущих гиф.

Биохимические свойства: отношение к са сарам - очень слабо сбраж шает араоико;;/, хорошо cSpaxoiBaei ксилозу, рамнозу, рафи:,-;озу. макнит. маннозу. фруктозу.

Клетчатка: растет па KiieiMLuKc.

Желатина: разжижает а nepBbie гши рсстн..

Молоко: пентонкзирует на сегтыиь:с сутки uocxr без коя.гу15ящш,

,j i ujineHHi. :. iicTCn HK:i;ii а:к) I; : xoroin:) пасте i Ли сипгетически: питательных прелах, оодсржапшх

4ff1Hc;Ta-7,.i Ч ) Я:1мТЯ И ЦЯ ,TX ПутЯ тьньгх средах с орга Ш-ескимн источниками азота , i т е. i . : . /- V -: г : к к е - в о и с т в э : по;wвиi cт :-пя 4ГП ож1теЛ1) и рамотпилятепьные

итамм ВНИИ-гене-ж:кз- П5 ттри ферме ггаиик г глубинньо-. условиях ч ьолбах Эпленмейера НЕ K;i4ajiKax с: /2, оЬ/мин lipn температуре 28 С ш гльментной чукуруз ю-крахмальной среде на -- 5х;рмен:а11И/1 синтезирует 9t)00 ед/мл антибио|кя ii устойчив к тнтккофагам.

Пр15:верку степени «{)агоустойчивости отобранмых мутантов CK-yTjtecrBjrKWi ш твердой и в жид1сой шггательной г;ре,аах, Иссдедуемуьс культур-/ принимали K3J устойчивую к фагам Рд 56 и Рд 57, при вы-севе т газон с данной культЗТэой фагов в : iU -i lO ч.|м.т. . колонии не обргзовьшшшсь. .Табораторный анализ показал, qTo

-ттличис: ; лсяо/укго ш алВуш ВтИИгене-ги- i--l . ЛД -:(lJt.L;M MyVlHTHOtvi iillaMMe ВНИИгегйТ1;ка- ; I j ditTniiOcyarK i6 к Pg 57 практически не разиивалксо .-сак иа ширдой, хак и н

Актинофагр I Время взятий трои

Изучение мехаroiзка сЬагоустокчи iс глтамма ВНИИгеиешка 115 показалоадсор&5рует фаг Рд .6, а механизм -:

тамк ;М1ИЙ Адсорбция фагов Рд 56 и Рд57 на штаммах Актинофаги штамм ВНИИгенетика 1552

Рд56

75 70 Рд 57

Культуральные и физиологические свойства

Картофельная среда (картофельный отвар +2% агара-агара, рН 6,9 - 7,1) 5-е сутки роста

Соевая среда (соевая мука 2%, глюкоза 1%, хлористый натрий 0,5%, агар-агар 2%, рН 6,9-7,1) 5-е сутки роста

среда (СР- 1), ;

MgSO,,0,05

К2МР040,05

NaCI0,05

KCI0,1

СаСОз0,50

глюкоза2

Агар-агар 2% fpH 6,8-7,0} 5-е сутки роста

Мясо-пептонный агар (МПА) рН 6,8-7,0 .

Жидкая регламентная производственная среда, 48 ч роста

Морфология

Спороносцы

Споры

Размер спор

Мицелий

Биохимические свойства

Инверсия сахарозы

Восстановление нитратов

Молоко

Разжижение желатины Рост на клетчатке Отношение к источникам азота и ВНИНгенстика 115

70

Ко.юнни л.наМ.троь-; 5 5 MNI, округлые, слегка выпуклые, глш1,кие, 1;озду 1.1лый светло-cepbiii, но краям колошги слапая споруляция, обратная стоЕхзна кологши коричневато-серая с белой каймой

Колоь:ии диаметром 13 мм, округлые, со слабой споруляцией, )Ш1Ш.1Й мицелин белого изета, обратная сторона колонии

светло ceiJah

возл}пгнык /лиислик светло -серык, по краям колонии оелый. обратная сторона колонии светло-серая с белой каймой

Колонии диаметром 5-6 , ок;Пгль е, слегка ттаук.1Ь):. желтоватого ш;ста со слаборазнлтр); :и::;душ гт м мицелием

lii.i,--l,2-l,.b;iH;; RlriCBJUUlOH форМЬ Ю11;-1ки MTiUE

He инвертирзе 1

He восстанавливает

Пептонизкрует иа 7--е сутки роста без

коагуляцпк

Разжижает в первые .ани роста

Хорошо растет иа сингетических питательш средах, coдepжaIItиx минеральные источники азота, и на сложных питателытых средах с оргатшческими источниками азота. Т а б л и ц а ВНИИгенстика 1552 игтлмм В1{ 1Игенетика- 115

OfHomesffle к источнмкалг члери,чс. аибо сораясиаае ярябинг ::: сбраживает .:/, nur/niTiv г г/

МаШЮЗу, Ф пук .

Акта г о н ; ;; г : ; , , : ; - , : ; цавлнет гпам1ш;;о ки1ельььк и : я:,;су-пи|; бактерии.

Пример ист1ользсяак1г fiTap ;:; л qriseus ВНИИгсжгИТчй .чл;- i:, -:-

ГРИЗИНИ:

Колонии EUrrdMMa

жтика-115 bui/аыив и 28° С sia кapтoф. Un jь

нерегевали на - лLI

выращивал и i

28 L,

Проверку выросшей культуры на усздкчизостг к фагам Рд 56 и PQ 57 проводили иа таердо ; питательной среде следуюш.ег;. сос.ааа, / пептон 0,5, )уз1-а1Ш зкстразст 0,05, агар i.j.

Проверку на устомивость к данным фагсии и ;-кидкой питательной среде провод-иш на регламеь-: ной ферментационной кукурузно--кргамальнои среде, состав которой тиветен геяжг;

ripoispcc йьгпаии;Бяикя :-roi;C3i-:oi4; .

СОСТОЙ из дну-, ,-::ь.дГ: П....:-. .-- :-.:pu:...T

ванне продуцента Б колбе соъемон V5u мл ы. iuO wui iViOjiOHHori opobKiVi- i;.,. у;;иц,- :-;у;-крахмал 1,5, аь миачная сг:п;тра U;b. 1,;ея ;.-.::. ристый яатркй 0,2; фссфйт oj г к, заме: цен кый 0,02; (молоко 100 i и, р) . . Посевн1Й м атеонал гзьфащкваш-я и -очсш;:. ,-; к:

: а 1 t . .. .

мер MlsljUrt t) нофагам g be

ГОИЗИИ Б КОЛИ

г:1 о р ф i: формы. liUGuQi

Олзмеооь 1,2л 1 1 J U I I и е I,

IIИМИ)lib ILT

1 Ji iiIHM

1IIr J rj

iс„. .-

1 u 1с рИ Я jl

, делающей 1:20 об/ГУМ н при темнерат;,:.е 2ёС, ОУ- культуральной жи.гкости иередавЕиш в .;й1лй1,йктг1уч ф рмегпащ окную среду с;;с дующе: с;

,;(: Hl- и.г:.; уК V иУ iJ i: iVKii ..-..KpcJ IHH,: L ; -,

iiv V: -iH4i aji ,й iHToa OJi. «ejiO.J. .xjiOpvscrbiK iia; )ий 0 2.. фосфат пдн&эа У Ц,еннш 0.01, ма; ий Жрнокисльш 0,05 (рН б.,3),

гомента1мю npoBOiWjEH в колбах Эр;.1енмейера объЕко.-; / 5Г| г,п, содержащих 50 кп ферментадаонной средь-, па KpjiOBoft )сачшже. %ie.r afoiyeH ilQ :jo/MiiHi 3 ;-ечение ;-8 ч при . i,,.

Содер)сагше антиб|-:отика а культуральной ;кид.гсостк опреде.пяли. гу«;тодом Д1 ффузии в агар с

:;-;-: Гт-.к) тег- Вас. sjbtilis 6633

:; .зо : :1риведе;тх;1 viAKbt :LO и-нямике ш;:,; ;: ;U:in.fl аьняэиоткка (e,iJi: vijM mraMMaivtt ВНИИгечс ,1ий . : - S и ВНИКгенетика--11 5. Ферлжнтадкк м;со5 / и:йС1 ни .мально--1сукурузной регла.;xi:THoii спсде и кплПях Эрленмейера im качалка

; лыс, слегка в.лнук.чые, -ж темно-серый , в uei-Tpe .а.. b-iLja ;e ia белая кайма . с( ;:зе1.иой каиXI све лои кап ;ри.зует колок;; да;:ХИ1;. С-сгк ду;1Д ЫМ мице : ; ) (1пра:;уе V: лые. ; а;ЕСи:

слегка выпуклые; воздушный мицелий серьй, по краям колонии светло-серая кайма, обратная сторона колонии темно-серая со светлой каймой; На жидкой регламентной производственной среде 48-часовая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно растущих гиф.

Биохимические свойства , отношение к сахарам - очень слабо сбраживает арабинозу, хорош сбраживает ксилозу, рамнозу, рафинозу, маннит, маннозу, фруктозу.

Клетчатка: хорошо растет на клетчатке.

Желатина: разжижает в первые дни роста.

Молоко: пептонизирует на седьмые сутки роста без коагуляции.

10

Отно 1кние к источникам азота: хорошо растет на синтетических питательных средах, содержанхих минеральные источники азота, и на сложных питательньк средах с органическими источниками азота.

.Антагонистические свойства: подавляет грамположительные и грамотри 1ательные бактерии.

Штамм ВНИИгештика-115 при ферментации в глубинных условиях в колбах Эрленмейера на качалках с 220 об/мин при температуре 28 С на регламентной кукурузно-крахмальной среде на 48 ч ферментации синтезирует 9600 ед/мл антибиотика гризина и устойчив к актинофагам.