Штамм астINомусеS GRISeUS вниигенетика-307ф, продуцент антибиотика гризина Советский патент 1981 года по МПК C12R1/04 

I

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается получения промьшшенных штаммов, продуцирукмцих кормовой антибиотик гризин.

Биологически активное вещество антибиотик гризин широко применяется в сельском хозяйстве в качестве стимулятора роста животных. На основе гризина с помощью наполнителя приготовляют кормовой препарат кормогризин. Продуцентом гризина является .культура Actinomyces griseus,

Из известных штаммов наибольшей активностью обладает штамм Ac.tinomyces griseus ВНИИгенетика-115, его активность через 48 ч ферментации составляет 9600 ед/мл 1.. Штамм ВНИИгенетика-115, как наиболее активный, рассматривается в качестве прототипа и в качестве базового образца.

Однако данные штаммы характеризуются чувствительностью к производственным фагам, а также недостаточно высокой скоростью роста и антибиоти- кообразования.

Цель изобретения - получение штамма культуры Actinomyces griseus, ус тойнивого к новым актинофагам, выделенным из фаголизатов производственных культур при производстве препарата кормогрии, а также обладающего повышенной скоростью роста и

10 антибиотикообразования, и повышенной способностью синтезировать антибиотик гризин.

Новый штамм ВНИИгенетика-307Ф получен как прототрофный ревертант арtsгининзависимого мутанта штамма Act nomyces griseus ВНИИгенетика-115 на фоне 400 мкг/мл антибиотика гризина; .

Штамм Actinomyces griseus ВНИИге20нетика-307Ф, продуцент антибиотика гризина хранится в Центральном музее npoNJbmineHHbix микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского

института генетики и селекции промьшшенных микроорганизмовjH имеет регистрационный номер ЦМПМ§ -5 2,

Морфологические и культуральные признаки. Клетки мицелия нитевидной формы, спороносцы спиральные, споры овальные размером 1,,8-0,9.MK Оболочка спор .

Картофельный агар. Через 7 сут, культивирования при образует : колонии диаметром 6-7 мм, округльш, слегка выпуклыеj гладкие, воздушный ми целий серый, четко выражена белая кайма, обратная стооона колоний светло-серая, со светлой каймой.

Соевая среда. Через 7 сут культивированная при 28 С образует колонии диаметром мм, округлые, гладкие, воздушный мицелий светло-серый. Колонии с белой каймойs обратна сторона серая, со бветлой каймой.

Масо-гептонный агар. . Через 7 сут культивирования., при 28 С образует колонии диаметром 3-5 мм, округлые, гладкие, слегка выпуклые, со слабо развить воздушным мицелием.

Среда Гаузе 1, Через 7 сут культивирования при 28°С образует колонии диаметром 7-8 мм, округлые, гладкие Слегка выпуклые, воздушный мицелий серый или светло-серый, по краям колоний белая кайма, обратная сторона колоний темно-серая, со светлой каймойS

На жидкой регламентной производственной среде 43-х часовая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно растущих гиф.

Физиологические и биохимические свойства. Источники углерода хорошо усваивают фруктозу, глйкозу, мальтйзу, ксилозу, маннит, маннозу, р мнозу, крахмал, слабо-арабинозу, сахарозу, не усваивает лактозу, сорбит и ду,льцит. Наблюдается хороший рост на клетчатке.

Источники азотаS хорошо растет на синтетических питательных средах, содержащих минеральные источники азота (азотнокислый аммоний, азотнокислый натрий). и на сложных питательных средах с органическим источ НИКОМ азота (пептон). Желатину разжижают в первые дни роста. Молоко пептонизируют на седьмые сутки роста без коагуляции,

Антагонистические свойства. Обладает широким антимикробным спектром

действия, подавляет грамположительные и грамотрицательные бактерии. Предлагаемый штамм Actlncxnyces qriseus ВНИИгенетика-307Ф устойчив к новым антинофагам Рд /70, Рд , лизирующим производственную культуру, обладает ускоренным ростом и антибиотикообразованием, за 43 ч

ферментации синтезирует в среднем

II000-12000 ед/мл антибиотика гризина. Максимальная активность штамма достигает 15000 ед/мл.

При испытании штамма ВНИИгенетика-307Ф в опытнопромьшшенных условиях на Унгенском биохимическом заводе получена активность антибиотика в культурной з дкости от 4500 до 9000 ед/мл. Средний показатель по 25 производственным операциям 6244 ед/мл

Средняя активность известного

штамма Actinomyces griseus ВНИИ-генётика-115 в производственных условиях --4000-4500 ед/мл.

Примеры использования штамма

Actinomyces griseus ВНИИ-генетикаЗрУФ для получения антибиотика гризин а.

Пример о Колонии штамма Actinofflvces gfriseus ВНИИгенетика307Ф выращивают влечение 7 сут при на картофельной агаризованной среде и затем пересеивают на косяки с зтой же средой. Культуру на

косяках выращивают в термостате в течение 7 сут при 28 С. Посевной культурой штамма засеивают колбы Эрленмейера объемом 750 мл, содержащие 50 мл ферментационной среды следующего состава, %: кукурузная мука крахмал 1,5; азотнокислый аммоний 0,5; мел 0,3; хлористый натрий 0,2; фосфат калия однозамещенный 0,02; магний серкокислый 0,05 (рН 6,8-7,3) Ферментацию проводят на круговой качалке при -240 об/мин и 28 С. Через 43.ч ферментации продуцент кормогризина Actinomyces gtlseiis штамм НИИгенетика-307Ф в лабораторных условиях синтезирует в среднем 11000Г2000 ед/мл антибиотика гризина. Содержание антибиотика в культурной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тесткультуры Вас. subtTUs 6633.

Для проверки штамма ВНИИгенетика-307Ф на устойчивость к антинофагам, выделенным из производственных Фатализатов, получают чистые культуры 5 актинофагов, обозначенные Pg 70, Pg 1 15. Размножают актинофаги двухслойным методом, внося в верхний слой среды с 0,8% агара (пропись среды приведена ниже) приблизи тельно 1-10 спор чувствительной культуры и актинофаг в количестве, достаточном для образования сливших ся негативных колоний. Через 18-20инкубации верхний слой снимают шпателем и центрифугируют 15-20 мин пр 5 тыс. об/мин. Проверку выросшей культуры .шт-амма ВНИИгенетика-307Ф на устойчивость к актинофагам прово дят на твердой питательной среде ПКА-5 следукнцего состава, %: глюкоза 1,0; кукурузный экстракт 0,5; хл .ристый натрий 0,5; хлористый кальций 0,05; агар 1,5. П р и м е р 2 . Для выращивания продуцента антибиотика гризина используют среду по примеру 1. Колбы объемом 750 мл со 100 мл среды засеивают культурой Actinomyces qrise us ВНИИгенетика-307Ф. Культуру в колбах выращивают на качалках при 240 об/мин и 28°С 24 ч. Выращенный таким образом посевной материал передают в посевной аппарат. Выращи вание посевного материала в посевны аппаратах ведут 18 ч при . Подготовленный посевной материал в количестве 10% вносят в ферментер емкостью 16 м с ферментационной срёдои по примеру 1 . Ферментацию ве76дут при . Через 45 ч ферментации получена активность антибиотика в культуральной жидкости 8100 ед/мл. Применение высокоактивного фагоустойчивого штамма Actincxnvces grtseus ВНИИгенетика-307Ф, продуцирующего антибиотик гризин, позволяет осуществить рентабельно.е крупнотон нажное производства кормового препарата кормогризина {максимально, исключить возможность фаголизисных ферментации. Кроме того, использование предлагаемого штамма в промышленных условиях позволяет снизить себестоимость Бьтускаемого продукта - препарата кормогризина, увеличив его проду|стивность - съем продукта с 1 м за единицу. Формула изобретения Штамм Actinomyces griseus ВНИИгенетика-307Ф, продуцент антибиотика гризина. Штамм хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промьшшенных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПМ5-512. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 510512, кл. С 12 К 1/00. 1976..