Способ получения свободных пептидов Советский патент 1976 года по МПК C07C103/52 

(54) СПОСОБ ГЮЛУЧЕНИЯ СВОБОДНЫХ ПЕПТИДОВ

О р и м е р 3. Тнроаил-лейцип-валълN « адвтвмидометип иистеинилнглвцнн,

1,7 г метшювого эфира карбобензсяссиО-бенаил-тирозвл-лейшш-валвл- S -ацетатидометил-иистеинил-глвиина pacreopsooT 4,7 мл 4 и. раствора бромистого водоода в уксусной кислоте, добавл5аот 0,31 мл оды, выдерживают два дня при комнатной емпературе, разбавляют эфиром, отфиль-говывают осадок, растворяют в воде, нейрализуют 25%-ным аммиаком, отфильтровывают осадок, сушат и получают 0,98 г (81%) продукта.

Найдено, %: С 53,8} Н 7.3; N 13,4,

.

Вычислено,%: С 54,0; Н 7,05; N13,5.

Аминокислотный состав: тирозин 0,93 (1), лейцин 1,00 (1), валин 1,01 (1), цистеин 0,80 (1), глицин 0,98-(1).

П р и м е р 4, Бис-(тирозил-лейцилпалил)-цистинил-бис-глицин,

К раствору 5,0 г метилсдаого эфира бис-(карбобензоксн-0-бензил-тирозил-лейцил-валил)-цистинил-бис-глицина в 40 мп 4 Н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 2,5 мл воды и проводят те же операции, что и в примере 3 Получают 2,9 г (84%) продукта.

Аминокислотный состав: тирозин 0,95 (1), лейцин 1,00 (1), валин 0,97 (1), цистеин 0,91 (1), глицин 1,02 (1).

Пример 5. Бис(аспарагинил-глутаминил-гистидил-лейцил)-цистинип-бис-глицин.

К раствору 2,5 г бис-(карбобензоксиаспарагинил-глутаминил-гистидил-лейцил)цистинил-бис-глицина диметилового эфира в 8 мл 4 Н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 0,5 мл воды, выдерживают 3 дня при комнатной тем цературе, разбавляют эфиром, отфильтровьгеают кристаллы, растворяют их в воде, обрабатывают раствор ионообменной смолой ИРА-410 в ОН-форме, упаривают, отфильтровьтают кристаллы, промьгоают их эфиром, сушат и получают 1,81 г (90%) продукта.

Аминокислотный состав: аспарагиновая кислота 0,97 (1), глутамнновая кислота 1,00 (1), гистидин 1,05 (1), лейцинО,99

(1), цистин 0,90 (1), глицин 1,10 (1). П р и м е р 6. А-цепь инсулина человека.

. К раствору 3,5 г метилового эфира карбобензокси 0-бензил-тирозил-глутаминил--лейцил- -трет-бутип-глутамип-аспарагинил-тирозил- S -аиетамидометилцистеинил-аспарагина в 10 мл 4,9 н, раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 0,5 мл воды, выдерживают три дня при комнатной температуре, разбавляют эфиром, .тpo ывaгот осадок, раствсфяют его в воде, овра батьдаают ионообменной смолой в ОН-фор ме в получают 2,25 г (90%) тирозилg -глутаминил-лейцил-глутам ил-аспарагинил-тирозил- S -адетамидометил-цистеинил аспарагина.

Амин(жислый состав: аспарагинсшая . кислота 1,96 (2), глутаминовая кислота 10 2,ОО (2), лейцин 1,00 (1), тирозин 1,8 (2). цистин 0,93 (1).

Карбобензокси-изолейцил- ;S -ацетами дометил-цистеинил-серил-лейцил-тирозил15 -глутаминил-лейцил-глутамил-аспарагинилт-тирозил- S. -ацетамидометил-аистеинил-аспарагин получают из 1,98 г вещества, полученного выше, и 0,98 г гидразида карбобензокси-изолейцил- S -аиетамидо20 метил-цистеинил-серил-лейцина азидным методом. Выход 1,6 г (62%), т.пл. выше 30(ЭОС, .310( С -, диметилсульфоксид) Найде1Й,%: С 53,00; Н 6,5; N13,5 С77Н,„Ц,0,,3,,.

2ft

Вычислено,%: С 53,2; Н 6,4; N 13,7.

Аминокислотный состав: аспарагиновая кислота 1,86 (2), глутаминовая кислота 2,00 (2), серии О,9 (1), цистин 0,93 (1), изолейцин 0,94 (1), лейцин 2,00

90 (2), тирозин 1,7О (2).

Из 1,5 г синтезированного продукта и 1,0 г гидразида карбобензокси-глицил- . изолейдилвалил- Т -трет-бутил-глутамилглутаминил-дикло-цистинил-треонил-серинаазидным методом получают защищенный пептид, который. обрабатывают последовательно йодом в диметилформамиде и бромистым водородом в трифторуксусной кислоте, подвергают окислительному сульфитолизу, фильтруют через колонку с Сефа- дексом ДЭАЗ и получают 1,95 г (89%) тетрасульфоната А-цепи инсулина человека, (,1, вода).

Ацннокислотный состав: аспарагиновая кислота 1,92 (2), треонин 0,93 (1), серин 1,81 (2), глутаминовая кислота 4,00 (4), глицин 1,00 (1), цистин 1,92 (2), валин 0,96 (1), изолейцин 1,91 (2),лейцин 2,03 (2), тирозин 1,81 (2).

Полученный продукт - индивидуальное вещество по данным электрофореза, при

этом его подвижность точно совпадает с

подвижностью тетрасупьфоната А-цепи, выделенного из природного инсулина.

Формула изобретения

Способ получения свободных пептидЪв рзаимодействнем метиловых или этилоных

513026

бб

эфиров кирбобензокси-пептидов с бромис-левого продукта н расилфеии.. ,ш

тым водородом в уксусной кислоте, от-базы, реакцию проводят в растворе б;,имиличаюшийся тем, что, с цельюстого водорода с добавлением 4-Ь об. v,,

упрощения процесса, увеличения выхода це-воды.