Способ получения антилимфоцитарного глобулина Советский патент 1976 года по МПК A61K38/16 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИЛИМФОЦИТАРНОГО ГЛОБУЛИНА

1

Изобретение относится к медицине и касается получения нммунологически активно143 препарата из сыворотки крови имк1унизированных животных.

Известен способ получения антилимфоцитарного глобулина 11утем имк{унизации жи вотного взвесью лимфоцитов.

Однако полученнь1Й этим способом анти: лимфоштарный глобулин не обладает антимикробной активностью. .

С целью придания препарату антимикробных свойств предложено иммунизацию осуществлять многократно лимфоидными клетками и микробным антигеном в любой последовательности.

Способ заключается в проведении следующих операций.

Первую внутримышечную инъекцию проъоаят в 4-8 точек смесью, состоящей из ;лимфоцитсяв вилочковой железы человека, полного адъюванта Фрейнда, корпускулярной поливакцины из группы гноеродных микробов и стафилококкового анатоксина.

Через суток проводят вторую инъекцию, состоящую в последовательном и

раздельном введении взвеси лимфоцитов и корпускулярной поливакцины внутривенно и стафилококкового анатоксина - подкожно

Через интервалы в 3-4 суток проводят третью и четвертую инъекции по схеме, аналогичной второй инъекции, но с возрастающими дозами поливакцины.

Через 3-4 суток проводят заключительную инъекцию, состоящую в последовательном введении живой корпускулярной поливакцины (по Составу представляющей смесь штаммов тех же микробов, что и в убитой поливакцине, вводимой в предыдущих операциях иммунизации) -.внутривенно .н. стафилококкового анатоксина - подкожно. проводят последовательно операции выделения сыворотки, освобождение сыворотки от .гетероагглютининов адсорбцией эритроцитами, .освобождение от балластных белков риванольным фракционированием высушивание полупродукта путем сублимаци влаги из замороженного состояния, растворение сухого препарата в дистнллнровв ной вол.. Пгчпара7 пол гчают rrjT8M описанной вы-. aie илчмунизйции кроликов, бараноВа коз, СБИней, пошак&й и крунного рогатого скота,. П р и м е р. По хучение препарата из сьгаорогки кроЕя кроликов, весом 2j5-3 5 Прйготавпиваю-т адьювашь-ую смесь: Oj2 г сухой купьтурь) БЦЖ растирают до порошка, добавляют кш ланолина и поср тщательного перемешивания цо.бавляют 4,0 мл вазелинового маспа и снова перемеши- ваю-г до состсякий гомогенной массы (пол-аый аеыовакт Фрейнда}/Затем приготавднвают вакцнш. Вшсаынз готовят по спосоfjy Т, Б. Горшеьа о использованием бакте jyJ - jt- - Vf E-UiC JTiLI V iiV ilVrfrfltJV ..l-Ji-tai-r-av-Ji -«ьл-ч. ,;ошидной ЖИДКОСТИ, убшаюшей мирробы, на 1041 л- -шуаммов; выдеяеккьлх у бопыгых из крови, зева отделяемого ран и т. д. Для приготовь пения riornmaKJiaiibi берут jno 10 штаммов стафилококкойг кишечных8 синегнойных па дочек и протея (всего 4О штаммов). Взвесь суточшэтх агаровых культур перечисленных микробов в бактерицидной гкидкости. содержащей SOO млн, мнкробньзх клеток в 1 мл (по оптическок-: у стандарту), выдер жлвают в -л-ерыостате 7 2 часа. После это-го вшшн}- проверягот ни стерильность и токсичность. Вакцййы готовят отдельно из каяшого пгтамма жеткробов п з готовом виде смешивают в равньзк объемах. . АктигеннО-адъКгвайТную смесь .готовят следуюги.им образом. .А-.ц-ьювги)ТГ берут из расчета О,3 мл на 1кг веса хроликов. к адъюванту постепенно примешивают антигенный материал в следующей последовательности (из расчета на 1 кг веса тепа кролика); взвесь лимфощ тов Oj25 МП (1GO млн. кпеток), поливакцкна 0,25 МП (125 млн. микробных тел), стафилококк.овы.й анатоксин 0,2 Ш1 (2 ЕС) Смешива от- до гшлучеша-я гомогенной массы, Иммуниаацию кролика проводят по схеме Затеи производят тотальную эксфузню i-iS i tJlVi J.ApWXlOiJ /jWl.-ii i s.j f. L «iiiJiij 41- 4XJ.i.-v .j -1ФОВК и отделение сьшороткн. В полученной cfciBopoTKe определяют титры всех иммунах антител. Затем освобождают сывороту от гетероагглютининов путем их адсорбии эритроцитами, тромбоцитами и белками лазмы крови человека. Очищенную сыворотку вновь исследуют а содержание антител к антигенам. При этом титр антител к эритроцитам е должен превышать 1:16, к тромбоцитамг :2, антитела к плазменным белкам крови еловека должны быть полностью ибйг)рй изованы.. Процесс заканчивают освобождением имунной сыворотки от балластных белков пособом риванольного фракционирования. ., ., оодентраций белка в готовом препарате %, при этом титры спедафических антител .л. л f rrf r tfrvtrt-rf f ffrrVf jaU lTJrT аходятся в следующих пределах: Активность антител к лимфоцитам1:2О48 Активность антител к стафилококку1:64О Активность антител к стафилококковому токсину 6 ед. Активность антител к кишечной палочке Активность .антител 1:64О к синегнойной полочке Активность антител : 1:6401. протею Полученный препарат оказывает активное иммунодепрессивное действие, одновременно обеспечивает (противоинфекционную защиту реципиента по типу пассивного иммунитета. Формула изобретения Способ получения антйлимфоцитарного глобулина путем иммунизации животного, отбора крови и выделения целевого продукта, отличающийся тем; что, с целью придания препарату антимикробных свойств, иммунизацию осуществляют мне--:f V- т V гократно лимфоидными клетками и микробньгм антигеном в любой последовательности. .