N-(4-[БИС-(2-ХЛОРЭТИЛ)-АМИНО]-ФЕНИЛАЦЕТИЛ)-2-(4-ФТОРФЕНИЛ)-DL-АЛАНИН, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ Советский патент 1994 года по МПК C07C237/00 A61K31/195 

Описываемое изобретение относится к новому химическому соединению N-{ 4-[бис-(2-хлорэтил)-амино] -фенилацетил} -2-(4- фторфенил)-DL-аланину формулы I (ClCH₂CH₂)₂NCH проявляющему противоопухолевое действие.

Целью описываемого изобретения является выявление нового соединения в ряду N-ацильных производных DL-фенилаланина, обладающего усиленным противоопухолевым действием.

П р и м е р . N-{ 4-[бис-(2-хлорэтил)-амино] -фенилацетил} -2-(4-фторфенил-DL-аланин.

20,0 г (0,01 моль) 2-(4-фторфенил-DL-аланина растворяют в 100 мл 1 н. гидроокиси натрия и полученный раствор охлаждают до -5^оС. В полученный раствор при перемешивании порциями прибавляют 32,1 г (0,01 моль) хлорангидрида 4-[бис-(2-хлорэтил)-амино] -фенилуксусной кислоты и в то же время по каплям прибавляют 80 мл 1,4-диоксана. Следят за тем, чтобы среда была щелочной. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Далее, подкисляют 5 % HCl до pH 2-3. Выпадает масло, которое экстрагируют хлороформом, экстракт сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и упаривают, остаток заливают эфиром. Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и кристаллизуют из метанола. Получают 27 г (56,4 % ) целевого продукта; т. пл. 129-131^оС.

Спектр ПМР, δ м. д. , в CHCl₃: 2,13 с. [4H, N(CH₂)₂] ; 2,91 м. [2H, (CHCH₂)] ; 3,33c. [2H, CH₂(C₆H₄)] ; 3,55 м. [4H, Cl(CH₂)₂ N] ; 4,66 м. [1H, CH(C₆H₄)] ; 6,66 м. (4H, - C₆H₄ -).

Найдено, % : С 57,38; Н 5,04; N 6,17; Cl16,12.

С₂₁Н₂₃Cl₂FN₂O₃.

Вычислено, % : C 57,15; H 5,25; N 6,35; Cl 16,07.

При изучении фармакологического действия описываемого соединения основными критериями оценки противооопухолево- го и противолейкозного эффекта являются процент торможения роста опухоли (ТРО% ), процент увеличения продолжительности жизни леченных животных (УПЖ% ), процент извлеченных животных или процент торможения роста метастазов (ТРМ % ).

Противоопухолевую активность описываемого соединения определяют известным способом на следующем спектре опухолей: эпителиальные опухоли (Ca 755, LL, гепатома 22, АКАТОЛ, ОЯ, Ca РС-1, КСУ меланома В-16, гепатома Зайделя), малодифференцированные опухоли и саркомы (опухоль Эрлиха, Sa-45, Sa-180, Sa-M-1, ПРЖ), а также гемобластозы (L-1210, P-388, а, асцитная опухоль NK/Ly, LySa Плисса, плазмоцитома МОПС-406); всего 20 штаммов.

При определении антиметастатического действия при карциноме легких Льюиса, мыши декаптируются на 21 день после трансплантации опухоли и вычисляется объем метастахов исходя из отдельных метастатических узлов, по формуле объема шара: V = 0,52 Д³.

В опытах использовали 600 нелинейных крыс и 800 мышей линий С₅₇В1, ДВА, С3Н, BALB C, CBA и 200 нелинейных. Вещество вводят внутрижелудочно, ежедневно в течение 5 дней.

Сравнительное изучение эффективности описываемого соединения (фторлофенала) и лофенала - ближайшего структурного аналога, применяемого в клиниках, проводят в параллельных опытах.

Результаты опытов показывают (см. табл. 1), что фторлофенал обладает слабым и умеренным противоопухолевым действием только по отношению к опухолям, а по отношению к 13 перевиваемым опухолевым штаммам он обладает выраженной противоопухолевой активностью (ПОА). Сравнение ПОА фторлофенала и лофенала показало, что фторлофенал активнее лофенала на 18 экспериментальных опухолях и только на двух (асцитной опухоли Эрлиха и лимфосаркоме Плисса) активность лофенала незначительно выше.

Далее изучают эффективность описываемого соединения и известных фармпрепаратов: лофенала, хлорамбуцила и тиофосфамида на разных стадиях роста саркомы М-1.

Препараты вводят по следующим схемам фторлофенал - внутрижелудочно, двукратно с разрывом между введениями 4 сут, в разовых дозах 30 и 50 мг/кг; лофенал в дозах 30 и 60 мг кг и хлорамбуцил 5 и 10 мг/кг внутрижелудочно, ежедневно в течение 5 сут; тиофосфамид внутрибрюшинно, ежедневно в течение 5 сут - поздняя стадия, средний диаметр опухоли достигает 0,3-0,5 см, и на 11 сут (терминальная стадия, средний диаметр опухоли достигает 1,5-2,4 см). Каждую неделю измеряют опухоли (длину, ширину, толщину) и взвешивают животных. Для определения среднего диаметра опухоли используют формулу . Если в течение 90 сут не появились опухоли, животных считают выздоровевшими. В случае появления опухолей, животных выдерживают до их естественной смерти и определяют продолжительность жизни. Общая продолжительность эксперимента 140 сут.

Применение фторлофенала, лофенала, хлорамбуцила и тиофосфамида на ранней стадии роста саркомы М-1 не выявила преимущества ни одного препарата, по-видимому, из-за того, что противоопухолевая активность очень высока и удалось полностью вылечить значительную часть животных. Существенное преимущество описываемого соединения перед известными аналогами выявляется при лечении поздней стадии роста опухоли (см. табл. 2). Введенный в дозе 50 мг/кг фторлофенал полностью вылечивает всех животных. В течение всего эксперимента не отмечено ни одного случая рецидивного роста опухоли. Эффективность лофенала, хлорамбуцилина и тиофосфамида была значительно ниже.

Острую токсичность фторлофенала определяют путем однократного введения разных доз исследуемого вещества в желудок белым крысам и мышам с последующим наблюдением за поведением животных и регистрацией их гибели в течение 20 сут. Погибших животных вскрывают и наблюдают патологические изменения во внутренних органах. Значения ЛД₅₀ и МДП рассчитывались с использованием известного способа Литчфильда и Уилкоксона. Острая токсичность для мышей имеет следующие характеристики: МДП 300 (279-324) мг/кг, ЛД₅₀ 380 (356-401) мг/кг; ЛД₁₀₀ 500 (470-532) мг/кг.

Индекс кумуляции рассчитывают по формуле II
100 (II), где МПД₁ - максимально переносимая доза при однократном введении;
МПД - максимально переносимая доза при многократном введении;
n - число введений.

Индекс кумуляции описываемого соединения для крыс равняется 100 = 37,5; для известного 100 = 64,3. Видно, что токсическое действие заявленного соединения значительно меньше акумулируется, чем соответствующее действие лофенала. Незначительная величина кумуляции заявленного соединения позволяет предполагать, что его токсическое действие частично обратимо.

Таким образом, фторлофенал обладает следующими преимуществами перед известным препаратом: более высокими противоопухолевой активностью по отношению к 18 штаммам экспериментальных опухолей (см. табл. 1), преимуществом терапевтической эффективности при лечении поздней стадии роста саркомы М-1 (выздоровевших мышей 100 % при лечении фторлофеналом и 25 % лофеналом меньшей кумуляцией (индекс кумуляции 37,5-фторлофенала и 64,3-лофенала) и частичной обратимостью токсического эффекта, умеренным угнетающим действием на количество лейкоцитов в крови во время лечения и не проявляет побочного токсического действия на общее состояние животных. (56) Яхонтов Л. Н. , Глушков Р. Г. Синтетические лекарственные средства, М. : Медицина, 1983, с. 10.

Изобретение относится к производным аминокислот, в частности к N-{ 4-[бис-(2-хлорэтил) -амино] -фенилацетил} - 2 -(4-фторфенил)-DL -аланину, проявляющему противоопухолевое действие, и может быть использовано в медицине. Цель - создание нового более эффективного вещества указанного класса. Синтез ведут реакцией 2-(4-фторфенил)-DL-аланина с 4-[бис-(2-хлорэтил)-амино] -фенилацетилхлоридом в среде водного диоксана в присутствии гидроокиси натрия при температуре от -5 до -20 С. Выход 56,4% ; брутто-формула C₂H₂₃Cl₂FN₂O₃; т. пл. 129 - 131С. Новое соединение в дозе 20 - 100 мг/кг обладает более высокой противоопухолевой активностью по отношению к 18 штаммам экспериментальных опухолей по сравнению с лофеналом, большей эффективностью при лечении поздней стадии роста саркомы М - 1 (в 4 раза), меньшей кумуляцией и частичной обратимостью токсического эффекта ЛД₅₀ 380 мг/кг). 2 табл.

N-{ 4-[Бис-(2-хлорэтил)-амино] -фенилацетил} -2-(4-фторфенил) -DL-аланин формулы 1
(ClCH₂CH₂)₂NCH
проявляющий противоопухолевое действие.