Способ определения липидного состава биологических жидкостей Советский патент 1976 года по МПК G01N33/16 

За 1-2 час до начала хроматографии в банки наливают систему растворителе для разделения лииидов в одной и фосфолипидов в другой банке. Систему растворителей наливают в банки в таком количестве, чтобы пластины погрузились на 0,5 см. Исследуемый экстракт крови растворяют в 0,2 мл гексана и по 0,05мл (соответствует 0,05 мл исследуемой крови) наносят на пластины, отступая 1,5-2,0 см от нижнего и бокового краев пластины. Интервал между пробами 2 см. Из одной и той же пробы экстракт наносят на 2 пластины - для разделения липидов на одной и фосфолипидов на другой. После нанесения проб пластины помещают в банки с системой растворителей. Высота подъема растворителей по адсорбенту 10 см. Время хроматографии липидов 20- 25 мин, фосфолипидов 40-45 мин.

По окончании хроматографии пластины подсушивают при комнатной температуре под вытяжкой до полного испарения с адсорбента растворителя и опрыскивают 27о-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты по 5 мл красителя на одну пластину. Затем пластины помещают в сушильный шкаф на 10 мин при 90-99°С для проявления окраски. После охлаждения пластин проводят количественное определение жира в хроматографических пятнах денстометром путем измерения оптической плотности пятна и фона вокруг него. Затем из плотности фона вычитают оптическую плотность пятна, полученную разность умножают на коэффициент пересчета и узнают количество жира в липидном спектре исследуемой крови. Коэффициент пересчета выводят по данным калибровки стандартного раствора холестерина.

Формула изобретения

1. Способ определения липидного состава биологических жидкостей путем экстракции

липидов и хлороформметаноловой смесью и разделения экстракта на сорбционной смеси хроматографически в закрепленном тонком слое, отличающийся тем, что, с целью уменьшения количества анализируемого субстрата и ускорения анализа, липиды экстрагируют хлороформметаноловой смесью из цельной крови в соотношении 50:1, а количественный денситометрический анализ проводят непосредственно на хроматотраммах.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя, к сорбционной смеси добавляют 2%-ный раствор крахмала.