Способ получения трихотецина Советский патент 1976 года по МПК A01N15/00 

1

Изобретение относится к микробиологической Промышленности и может быть использовано для получения препаратов, используемых в борьбе с болезнями воздельюаемых растений и леса,

Известно производство препарата трихо- цетина, используюшее дефицитное и дорогостоящее пищевое сырье ijИзвестен способ получения трихоцетина, при котором посевной материал выращивают на предварительно отобранном и сваренном пшене. Для биосинтеза используют посевную среду, содержащую сахарозу, аммоний сернокисльй, калий фосфорнокисльш двухзамещенный, хлористый калий, кукурузный экстракт, молочную кислоту. Для ферментации в среду, кроме перечисленных компонентов вводят глицерин 2.

Этот способ, однако, требует сложного приготовления посевного материала, использования Б посевной и ферментационной средах дефицитного и дорогостоящего пищевого сырья, кроме того, процесс ферментации длителен.

Целью изобретения является упрощение приготовления посевного материала, удешевление сред и сокращение срока ферментации.

Поставленная цель достигается тем, что сухой посевной материал готовят на сухих хлопьях геркулеса , инокупят выращдваю на среде из гидролизных дролсжей, а ферментацию веду-т на среде, содержащей кукурузную муку, хлористый магний, мел, глицерин, азотнокислый аммоний и двухзамещеный фосфорнокисльш калий.

Пример. Сухой посевной материал в виде конидий гриба Trictiothecium гоьеит Ь- получают путем выращивания на хлопьях геркулеса. Для этого 1О-15 г хлопьев геркулеса, просеянных через сито с ячейками 4 мм, помещают в флаконы емкостью 250 мл и дважды стерилизуют с интервалом в 24 час при 1 атм D течение 1 час. Затем флаконы с хлопьями геркулеса засевают 5 мл жидкой культуры гриба (вегетативньш мицелий), предварительно выращенный на среде, содержащей,%: сахарозы 0,75-1,5; кукурузного экстракта 0,751,5; -0,05-0,2 ( NH, 0,02-0,15 в течение 30-36 час на качалке со скоростью вращения 160-220 об/мин После засева флаконы тщательно встряхивают и помещают в термостат с температурой 26-27 С на пять-семь суток до получения ярко-оранжевых пыляншх хлопьев сплошь покрытых конидиями гриба. Затем флаконы с конидиями гриба сушат в вакуум-сушильном щкафу при 25-27 С и остаточном давлении 8-10 мм рт.ст. в течение одних-полутора суток. Полученным сухим посевным материалом засевают колбы емкостью 750 мл, содержащих по 200 мл жидкой питательной среды. В каждую колбу вносят по одной бактериологической ложечке посевного материала. Жидкая питательная среда, используемая в колбах, содержит 0,5-1,2% гидролизных дрожжей в 1 л водопроводной воды, рН 5,2-5,4, стери лизована при 1 атм в течение 1 час. Выращивают гриб в колбах на указанной среде в течение 30-36 час на качалке с 160220 об/мин при 26-27°С. Выращенным вегетативным мицелием (ин кулятом) засевают ферментационные колбы емкостью 75О мл, содержащие 200 мл жид кой питательной среды, следующего состава, %: кукурузной муки 0,7-2 глицерина, 0,752, КН.РОл 0,15-0,25, ,01-0,04, 0,02-0,1, мела 0,015-0,4. Используемую в ферментационных колбах питательную среду готовят следующим образом: все перечисленные выше компоненты среды растворяют в водопроводной воде, устанавливают рН 5,7-5,9 и стерилизуют при 1 атм в течение 1 час. Колбы засевают из расчета 5% вегетативного мицелия к объему ферментационной среды. Гртлб выращивают на качалке с 16058 22О об/мин при 26-27°С в течение 7296 час, Активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием в качестве тест-культуры Yusaiiитп TnoTniEiiorme. При использовании штамма активность культуральной жидкости при выращивании на предлагаемых средах достигает 450-600 мкг/мл, в то время как при выращивании на средах, взятых за прототип, она составляет 250-360 мкг/мл. Формула изобретения Способ получения трихотецина, включаюпий выращивание гриба Trichofhecium roseurn L. на жидкой питательной среде, содержащей глицерин и фосфорнокисльш калий, отличающийся тем, что, с целью упрощения приготовления сухого посевного материала, удешевления питательной среды и сокращения срока ферментации, сухой материал готовят на хлопьях геркулеса, инокулят вь ращивают на гидролизных дрожжах с концентрацией 0,5-1,2%, а в ферментационную среду вводят 0,7-2,0% кукурузной муки, 0,02-0,1% азотнокислого аммония, 0,01-0,04% хлористого магния и 0,0150,04% мела. Источники информации, прнятые во внимание при экспертизе; l.JbLoc,ktm . У , 1949, 44, 1-4 (прототип). 2. Лабораторно-производственный регламент получения трихотецина. Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова, биологический факультет, 1969г. (аналог).