Способ консервирования митохондрий Советский патент 1976 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к областа биологии.

Известен способ консервирования митохондрий путем помещения суспензии митохондрий в замораживающую среду в присутствии криопротектора.

Однако этот способ обеспечивает недостаточно высокий уровень функциональной активности митохондриий.

Целью изобретения является улучшение сохранности функциональной активности митохондрий.

Это достигается тем, что замораживание ведут в присутствии полиэтиленоксида - 400 вначале со скоростью 1-1,5 град/мин до 77 К и оттаивают со скоростью 300--400 град/мин.

Способ осущес1БЛяют следующим образом.

Свежую печень измельчают ножницами в холодной среде выделения. Навеску измельченной печени заливают девятикратным объемом среды выделения и гомогенизируют в стеклянно-тефлоновом гомогенизаторе в течение 30-40 сек. Гомогенат центрифугируют при 600 g в течение 10 NfflH, супернатант - при 6000 g в течение 15 мин. Осадок митохондрий суспендируют в 2 мл среды выделения (из расчета на 4-5 г печени). Затем в суспензию добавляют по каплям 2 мл 2%-ного раствора полиэтиленоксида -400 (ПЭО-400), приготовленного на срецс выделения, и оставляют стоять на льлу до I час. По истечении этого срока мл суспензии, налитой в стеклянную ампулу, замораживают медленно в парах азота с температурой -25 С со средней скоростью 1-1,5 град/мин. Температуру суспензии регистрируют с помощью терMonapbj и самопищущего потенциометра. В момсш завершения криста.плчзаиии основной массы свободной воды суспензии образец 11ог 1ужакуг в жидкий азот. В таком виде суспензию можно хранить необходимое время.

Опогревание суспен.зин митохондрии осуществляют в вол.яиой бане с те.мнературой 37 С. со скоростью 200-300 rpajj/мин.

Сразу же после оттаивания ампулу с митохондриями ставят на лед. Функциональное состояние митохондрий оце1 ивают в 1 мл среды инкубации (0,25 М сахароза, 20 мл KCt , 10 мм . 20 мм триС-НСЕ ,рН 7,4) добавлением в нее 0,1 мл суспензии. Дыхание измеряют полярографпчески.

После режима замораживания и быстрого отогревания митохондрии печени крысы сохраняхп высокий уровень функциональной активности. 3 Формула изобретения Способ консервирования митохондрий путем помещения суспензии митохондрий в замораживающую среду в присутствии криопротектора, о т л и чающийся тем, что, с целью улучшения сохран-j 4 ности функциональной активности митохондрий, замораживание ведут в присутствии полиэтиленоксида -400 вначале со скоростью 1-1,5 град/мин до 77 К и оттаивают со скоростью 300-400 град/мин.