Способ получения пектолитических ферментных препаратов из растворов Советский патент 1976 года по МПК C12D13/10 

i

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к ферментной, а именно для получения пектолитических ферментных препаратов из растворов.

Известен сносоо получения пектолитических ферментных препаратов из растворов, предусматривающий подкисленне раствора, смешивание его с органическим растворителем, разделение Полученной -суспензии «а твердую и жидкую фазы 1. Полученную твердую фазу высушивают и -используют в промышленности. Недостатком известного способа является невозможность раздельного получения препаратов, преимущественно содерл ащих пектинэстеразу и полигалактуроназы.

С целью выделения препаратов с преимущественным содержанием пектинэстеразы и лолигалактуроназы в предлагаемом способе подкисление ра.створа осуществляют до рП 2,0- 3,0, а -смешивание с органическим растворителем ведут до рН смеси 3,5-4,0 для преимущественного осаждения -пектинэстеразы, -при этом в жидкую фазу вводят стабилизатор и затем смешивают ее с органическим растворителем до достижения рЫ смеси 4,5-6,0, и полученный осадок, преимущественно содержащий полигалактуроназу, отделяют от жидкости.

Ферментный раствор, например Концентрат культуральной жидкости, подкисляют до рН 2,0-3,и, например, цитратфосфатным буфером, охлаждают до О-4-С, добавляют предварительно охлажденный органический раст-воритель, такой как ацетон, пропанол, этаиол, до достил ения рН смеси с),5-4,0, смесь выдерживают в течение 2-10 мин, лолученную суспензию разделяют на твердую и жидкую фазы.

Твердую -промывают органическим растворителем, сушат и измельчают, -получая -при этом препарат, преимущественно содержащий пектинэстеразу («0% от исходного количества

в растворе), другие же ферменты, входящие в раствор, такие, как полигалактуроназы, переходят в осадок до 20%.

В жидкую фазу добавляют водный раствор стабилизатора, например содержащий иоиы аммония, алюминия и титана в количестве 2- 7% На 1 л, перемешивают в течение 3-10 мин, добавляют органический растворитель до достижения рН смеси 4,5-6,5. Полученный осадок отделяют, высушивают и измельчают.

Пример. Берут концентрированнную культуральную жидко-сть, полученную при выращивании Aspergillus foefidus, имеющую рП

4,0, добавляют цитратфосфатный буфер до рН 3,0, охлаждают до 0°С, перемешивают, добавляют охлажденный ацетон до рН смеси 3,5, выдерживают в течение 5 мин и -полученный осадок отделяют центрифугированием, высушивают и измельчают.

Полученный Препарат -содержит 80% пектинэстеразы и 20% остальных ферментов пектолитического комплекса (полигалактуроназ) от исходного содержания их в культуральной жидкости.

К, фугату, Полученному при центрифугировании, добавляют стабилизатор, содержащий смесь сульфата аммония, сульфата аммония и фосфорнокислого титана, в количестве 3%, а затем ацетоН до рН 4,7, смесь выдерживают в течение 5 мин, полученный осадок отделяют; промывают органическим растворителем и высушивают.

Получают ферментный препарат, содержаш,ий 80% эндополигалактуроиазы и 20% остальных ферментов пектолитического комплекса от исходного содержания ферментов в растворе.

Формула изобретения

Способ получения -нектолитических ферментных Препаратов из растворов, например культуральной жидкости, нредусматриваюпщй подкисление раствора, сменшвпиие его с орга-ни ческим растворителем, разделение полученпой при этом суспензии па твердую и жидкую фазы, отличающийся тем, что, с целью выделения препаратов с преимущественным содержанием пектинэстеразы и полигалактуро«азы, подкисление раствора осуществляют до рН 2,0-3,0, а смешивание с органическим рас творителем ведут до рН смеси 3,5-4,0 для

преимущественного осаждения -пектинэстеразы, при этом в жидкую фазу вводят стабилиза тор и затем смешивают ее с органическим растворителем до достижения рН смеси 4,5-6,0 и полученный осадок, преимущественно содержащий полигалактуроназу, отделяют от жидкости.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе заявки: 1. Авторское свидетельство № 343991,

02.08.1972 т., класс С 12D 13/10 (прототип).