Способ получения сычужного фермента Советский патент 1976 года по МПК C07K14/47 C07K1/34 C12N9/00 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫЧУЖНОГО ФЕРМЕНТА

Затем из фистулы отбирают желудочный СОК, удаляют из него крупные частицы белка, например, фильтрованием через любой фильтровальный материал (марлю или хлопчатобумажную ткань) и выделяют сычужный фермент.

Выделение и очистку фермента осуществляют ультрафильтрацией через полупроницаемые мембраны со средним размером пор не более 30 м,мк при давлении 1-50 кг/ом, преимущественно 3-5 кг/см при температуре окружающей среды или при температуре, ниже 10°С, например 2°С.

Ультрафильтрацию на мембране продолжают до лочпучения над мембраной раствора с концентрацией

Первоначальный объем

Конечный объем

где С 10-30.

На практике концентрация энзиматической активности сычужного сока осуществляется путем взаимодействия сока с полупроницаемой мембраной фирмы «Амикон (США), имеющей название Диафло ПМ и УМ 20 Е и выпускаемой фирмой «Рон-Пуленк (Франция) под артикулами АН 69 и ХСБ 201.

Сок сычуга, СО-бранный через фистулу, сделанную на уровне сычуга, содержит азотированные протеиновые вещества, происходящие из секреции сычуга, такие как мукопротеины, сыворотка и другие энзимы. Максимальное содержание азотированных протеиновых веществ в жидкости, не проходящей сквозь мембрану в процессе ультрафильтрации протенновых растворов, ограничено переменным значением, зависящим от природы протеинов, степени перемешивания и т. д., и достигает 20- 30 г на 100 г жидкости.

Пример. На теленке в возрасте 25 дней устанавливают фистулу и через 10 дней после этого поят этого теленка 2500 г ультрафильтрата. Через 15-60 мин после введения фильтрата жидкость, содержащуюся в сычуге, собирают через фистулу в количестве 1800- 2600 г. Собранную жидкость фильтруют на вате и фриттованном стекле для удаления слизи и сгустков молока, и 400 г отфильтрованной жидкости помещают в .камеру для ультрафильтрации Амикон 401 (США), снабженную мембраной Диафло НМ, под давлением 4 кг/см при 2°С.

Через 6-8 час после начала ультрафильтрации объем жидкости, оставшейся под мембраной, составляет не более одной двадцатой или одной сороковой части от первоначального объема. Коагулирующая активность жидкости, оставшейся над мембраной или задержанной, в 15-30 раз больще, чем в жидкости, которая прошла ультрафильтрацию. Коагулирующая активность оставшейся

жидкости близка коагулирующей активности растворов сычужины, принятых -к употреблению (1/10000).

Коагулирующая активность раствора сывороточной закваски равна 6 800.

Через фистулу теленка было выполнено 12 отборов и только от ОДНОГО сычуга получен эквивалент одного литра сычужины, принятой к применению, т. е. в два раза больще, чем по известному способу.

Формула изобретения

Способ получения сычужного фермента, заключающийся в том, что молодому теленку в сычуг вводят фистулу и кормят его жидким молочным продуктом, затем из фистулы отбирают желудочный сок, удаляют из него крупные частицы белка, например фильтрованием, и выделяют сычужный фермент, отличающийся тем, что, с целью повыщения активности и чистоты сычужного фермента, жидкий молочный продукт перед кормлением теленка подвергают ультрафильтрации до получения продукта следующего состава (г на 100мл):

Сухое вещество5,00-5,60

Небелковый азот0,10-0,30

Зола0,45-0,50

Лактоза4,30-5,00

а выделение и очистку фермента осуществляют ультрафильтрацией через полупроницаемые мембраны со средним размером пор не более 30 ммк при давлении 1-50 кг/см преимущественно 3-5 кг/см, до получения над ,мембраной раствора с концентрацией Первоначальный объем

J.---

Конечный объем

где С 10-30.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авт. св. 255768, кл. С 07Q 7/026, 1970.