Способ обработки биологических образцов для криоультратомии Советский патент 1977 года по МПК G01N1/38 G01N33/48 G01N1/42 

Изобретение относится к области медици ны и может найти применение в криобиологии для изучения функциональной анатомии ультраструктуры клеток и ткшюйо Известен способ обработки биологичес ких образцов для криоультратомии путем фиксации образца, пропитки его желат1ШОЙ9 капсулироваиия в желатине, обработки криопротектором и замораживания l, Однако известный способ является дли- тельным и не обеспечивает получение ультратонких срезов. Целью изобретения является уменьшение артефактов при резке срезов. Эта цель достигается тем, что в качест ве криопротектора используют полиэтиленок сид-40О и обрабатывают образец вначале 50-бО/о-ным его раствором и затем чистым полиэтилеиоксидом-4ОО при комнатной температуре с гюслед аощим охлаждением со скоростью 1 град/мин до температуры -З -10 С, а затем со скоростью 900- 1ООО гпад/сок до i шоратуры -120 - 150°С. Способ осуществляют следующим образом. Перед началом обработки тдань реисут на образцы объемом не более 1 мм . Затем с целью сохранения морфологической и химической структуры Т1сади ее фиксируют. Для фиксации применяют глутаральде гид или четырехокись осмии в зависимости от дели исследования. После этого промывают в фосфатном буфере в течение 11-12 час при температуре 2-4 С, Затем образец пропитывают в 2-2, растворе желаТШ1Ы в течение 1-1,5 час при температуре 36-37°С и заключают в 2-2,5%-ный раствор желатины при температуре 2-4 С. Затем образец обрабатывают полиэткленоксидом-400 в 50-60°/i)-HOM растворе в течение 15--2О имн при комнатной температуре, затем в 100°о-ном растворе полиэти- леноксида--4ОО в течение 25-ЗО мин при той же температуре. Затем образец примораживают к съемному столу п;л:ем медленного охлаждения со скоростью 1 град/мил до температуры -5 -j -10 Cj а, начиная с этой температуры, ск:.-рэсть зам-.:1;1-1живапия розко увеличивают

до 900-1000 грац/сек и таким образом обрааеп охлаждают до температуры -1204

С.

Пример. Биологическую ткань (ро- гбвипу глаза человека) перед началом об работки режут на образцы объемом 1 мм. Затем образец фиксируют глутаральдегидом (5%нный раствор в 0,1 М фосфатном бу(Ьеое в течение 1 час при температуре 13 С). Затем образец пропитывают в 2%ном растворе желатины в течение 1 час при температуре 37 С и заключают в 2%-«ый раствор желатины при температуре + 3°С. После этого образец обрабатывают полиэтиленоксидом-4ОО в 50%-ном растворе в течение 15 мин прта комнатной температуре, затем в 100%-ном растворе полиэтиленоксида-400 в течение 30 мин при. той же температуре. После этого образец примораживают к съемному столику путем медленного) охлаждения со скоростью 1 град/мин до-температуры -5°С, а, начиная с этой температуры скорость замораживания резко увеличивается до 1000 град/сек и таким образом образец охлаждают до

.

Предлагаемый: способ обработки биологических образцов полиэтиленоксидом-400 при двухэтахшом режиме охлаждения обеспечивает повышение эластических, свойств

образца, вследствие чехо получают ультратонкие высококачественные серийные срезы необходимой:толщины, что необходимо для выполнения качественного электронно-микгроскопического исследования.

Формула изобретения

Cnocf;6 обработки биологических образ- цов для риоультратомин путем i фиксации образца, пропитки его желатиной, капсулирования в желатине, обработки криохфотек- тором и замораживания, отличающийся тем, что, с целью уменьшения артефактов при резке срезов, в качестве криопротектора используют полизтиленоксид 400 и обрабатывают образец вначале 5060%-ным его раствором и затем чистым полиэтиленоксидом-4О О при комнатной темн пературе с последующим охлаждением со скорость® 1 град/мин до температуры ((nLOJTC, а затем со скоростью 900-1000 град/сек до температуры f-120) f-150fc.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

l.Reed zeetched co-nnective iT5sue -3Til-Rev.CoTinective Tissue Ке5.уоЕ.б,лУ4- ЬопсЮп РТЗ.р.гзТ-зоз.