Способ получения рибофлавина (витамина В2) из дрожжей Советский патент 1940 года по МПК A61K31/525 A61K35/72 

Известно уже использование дрожжей в качестве исходлого- сырья для получения как жирорастворимых, так и водс растворимых витаминов, с применением автолиза для, высвобождения заключающихся в теле дрожжевой клетки растворимых веществ с целью последующего экстрагирОВания последнйх подходящими pafcTBiopHiteЛ ЯМИ.

Предлагаемый способ одновременного получения из дрожжей жирорастворимого провитамина Д (эргост рина) и водораст|вори1мого витамина В2 (рибофлавина) преследует цель возможно полного использования исходного сырья в направлении значительного повышения выходов конечных продуктов и выделения последних, вместе с тем, в соверщенно чистом виде.

Непременным условием достижения этой цели является применение автолиза дрожжей для освобождения рибофлавина, Kolropbiui, извест но из лите ратуры, находится в дрожжах на 800/0 в состоянии связанном при ПОМОЩИ фосфорной кислоты с высокомолекулярной протеиновой субстанцией. Автолиз дрожжей ведет к нарушению этой связи и к освобождению рибофлавЕна, вследствие чего выхода получаются в 5-10 раз больше, чем при применении обычных иностранных способов, например, по Куну и Kappeipy.

Одной из особенностей предлагаемого способа является применение для адсорбции рибофлавина асканита, адсорбирующей земли (месторождения Озургетского района Грузинской ССР), которая, после соответствующего активирования может, как оказалось, вполне заменить фуллерову землю и другие обычно применяемые для адсорбции флавинов глины (франко«ит, флюоредин и др.).

Технологический процесс получения из дрожжей эргостерина с повышенным, против обычного, выходом (в 1,25 раза) и одновременного получения из отходов рибофлавина (витаMHHias Во) осуществляется следующим образом.

Свежие хлебопекарские дрожжи автолизкруют в коТЛе с мешалкой при 37° в продОоТжение 12 часов (до получения не более 45-50/о гидролмзированного белка). На 100 кг дрожжей при этом прибавляют 100 кг воды -J5 кг толуола (антисептик) + 0,4 кг уксусной кислоты (буфер) -|0,01 кг сернистого натрия (активатор автолйтических процессов). По окончанШ автолиза массу нагревают до 80°, быстро охлаждают путем добавления равного объема холодной воды и отстаивают при 5-10° в продолжение 8 суток (лучшее извлечение достигается, после декантирования, повторным прибавлением новой порции воды и энергичным взбалтыванием), после чего нижний густой дрожжевой слой направляют в сушилку для получения эргостерина (провитамин а Д), верхний же прозрачный водянистый слой используют для получения рибофлавина.

Для этого отдекантированную, после отстаивания, водную вытяжку (собранную от I -го-2-го отстаивания), подкисленную серной или соляной кислотой до PII 2,5-3,0, отстаивают в продолжение одних - двух суток, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат взбалтывают на шюттельаппарате в продолжение 2 часов с асканитом, активированным путем кипячения в растворе серной кислОТы, с последуюш,им отмыванием дестиллированной водой (до легкого помутнения от ВаСЬ), для адсорбции рибофлавина. Асканит отделяют на нутч-фильтре, промывают М/юоо соляной кислотой, высушивают на фильтре и повторно (3 раза) взбалтывают в шюттель-аппарате, с пятикратным количеством элюируюш;ей смеси, состояшей 1 ч. пиридина, 1 ч. метанола, 1 ч. 20/о-й уксусной, кислоты и 3 ч. воды; после каждого взбалтывания жидкость отсасывают от асканита на нутч-фильтре. Соединенные элюаты упаривают под вакуумом при 45° досуха и остаток растворяют в двукратном количестве (по весу) дестиллированной воды, после чего осаждают 25/о-м раствором уксуснокислого свинца, дают отстояться иа холоду И| обрабатывают сероводородом до полноты осаждения сульфида свинца, который отсасывают досуха на нутч-фильтре и извлекают из него 10-кратной обработкой горячей водой

флавин, каждый раз взбалтывая при подогревании в продолжение 10 . с последующим отсасыванием на нутче до исчезновения в алюате зеленой флюоресценции. Собранные вместе элюаты подкисляют соляной кислотой до Р„ 1,0-2,0 и вторично адсорбируют рибофлавин активированным асканитом, отсасывают на утче, промывают N/100 соляной кислотой и высушивают при: комнатной температуре. Из асканииного адсорбата извлекают рибофлавин так же, как и в первый раз, повторным взбалтыванием с несколько измененной элюируюш;ей смесью (пиридина 1 ч., метанола 2 ч. и воды.2 ч.) с отсасыванием на нутче, собранные элюаты выпаривают при 45° под вакуумом досуха и остаток растворяют в дестиллированной воде при нагревании, после чего прибавляют на холоду этиловый спирт до концентрации , дают отстояться в продолжение ночи, выпавший осадок отфильтровывают, выпаривают спирт под вакуумом и сухой остаток растворяют в дестиллированной воде. Водный раствор рибофлавина подкисляют бинормальной серной кислотой до РН 1,5-2,0, добавляют lOVo раствора азотнокислого серебра до концентрации последнего IVo, выпавший осадок, содержащий загрязнения, отфильтровывают, фильтрат нейтрализуют до РН 7,0 аммиаком и вновь прибавляют lOVo-й раствор AgNOs до цолноты осаждения оранжево-красной серебряной соли рибофлавина, которую отсасывают на нутч-фильтре досуха, промывают водой, извлекают рибофлавин горячим 2/о-м раствором уксусной кислоты до полного разрушения серебряной соли, после чего серебро удаляют сероводородом, а раствор флавина упаривают до небольшого (примерно 20 см) объема и разбавляют этИоЧОвым спиртом до общей концентрации этот раствор, по выстаивании в продолжение одних суток на холоду, фильтруют, спирт отгоняют и сухой остаток растворяют в минимальном количестве горячей бинормальной уксусной кислоты, из которой, по охлаждении, выпадают кристаллы рибофлавина, который еще раз перекристаллизовывают из этилового 80°-го спирта. Выход из 100 кг дрожжей 40 мг рибофлавина с температурой плавлеиия 272° и активностью 5-10 YВ процесс получения рибофлавина могут быть введены следующие изменения и усовершенствования:

1.При первом осаждении серебром в кислой среде добавляют азотнокислого серебра до 0,Ь°/о концентраци:и1 и дальше ход очистки приводят согласно описанному.

2.После извлечения рибофлавина горячей уксусной клслотой и удаления серебра сероводородом осадок сульфида серебра промьшают, при взбалтывании, горячей водой, фильтруют и фильтрат присоединяют к общему уксуснокислому фильтрату. Эти фильтраты не упаривают в вакууме и остаток не растворяют в вО /о-м эти-, ловом спирте, но рибофлавин адсорбируют сульфидом свинца. Эту операцию производят путем добавления уксуснокислого свинца к фильтрату, доведенному до Р,, 7 до полноты осаждения, а затем через тот же раствор пропускают сероводород, тоже до полноты осаждения. Из отсосанного осадка сульфида свинца рибофлавин извлекают горячей водой.

3.После извлечения рибофлавина водой из сульфида свинца прозрачные водные фильтраты упаривают, примерно, до 200 с.адз (если исходных дрожжей было 100 кг), горячими фильтруют и ставят на кристаллизацию. Полученные кристаллы еще раз перекристаллизовывают из минимального количества горячей воды. Выход из 100 кг дрожжей 106 лг рибофлавина с температурой плавления 276° и нормальной активностью 5-10 тСледует обратить внимание «а тот факт, что дрожжевой фильтрат после адсорбции рибофлавина асканитом и фильтрат после адсорбции рибофлавина сульфидом свинца представляют собой довольно чистый и богатый источник витамина Bj.

Предмет изобретения.

1.Способ получения рибофлавина (виггамина Вг) из дрожжей путем гидролизирования последних отличающийся тем, что, но отделении служащей для получения эргостерина густой части гидролнзата, ншдкую часть последнего применяют для получения рибофлавина, который выделяют обычными Способами.

2.В способе но п. 1 применение в качестве адсорбента рибофлавина асканита, активированного путем кипячения в 20/о-м растворе серной кислоты с последующим отмыванием последней.