Способ получения ингибиторов сахаразы Советский патент 1977 года по МПК C12N9/26 A61K38/55 C12R1/45 

1

Изобретение относится к медицине и может быть применено в качестве терапевтических средств при ожирении, гиперлнпемии, диабете.

Известен способ получения ингибиторов глюкозидаз (в том числе и ингибитора сахаразы) из фильтрата кулыуральной жидкости Actinoplan. сееп SE с последующим выделением целевого продукта 1.

Однако такой способ не обеспечивает высокой активности ингибирования сахаразы.

С целью повышения активности ингибирования сахаразы по предлагаемому способу вьщеленш га целевой продукт подвергают гидролизу, при этом гидролиз осуществляют водным раствором кислоты или )3-амилазой.

Превращение И1т1битора амилазы в ингибитор сахаразы осуществляют путем отщепления нетормозящих частиц молекулы (больщей частью моно, ди- или трисахариды) из молекул ингабитора. Это отщеш1е1ше осуществляют ферментно - гидролитическим или химически - гидролитическим расщеплением, предпочтительно проводят гидролиз в кислой среде при высоких температурах. Для этого 1-40%-ные растворы, предпочтительно 2-20%-ные, в юокоспособных ингебиторов в 0,1-5N, предпоч

штельно 0,5-2N, минеральных 1сислотах, предпочтительно HCI и I HZ S04 гидролизуют не более 6 ч, предпочтительно не более 4ч, при 60-110° С, предпочтительно при 80-100° С. .

Изолирование тормозящего сахаразу компонента из гидролизатов осуществляют предпочтительно посредством адсорбции на активном угле после предварительной нейтрализации гидролизата и доследующей фракционирующей десорбции ингибитора с угля водными спиртами или водным ацетоном. Есгш гидролизаты имеют очень темный пзет, их до адсорбции ишибитора;сахаразы на угле обесцвечивают аквшным углем при кислых значениях рН 1-3.

Способность торможения лучших препаратов Ш1гибитора составляет 15(ХЮ SiE/r,

Гидролиз осуц сгЕляют также энзимашчески Э-а№1лазой.

Ингибиторы могут быть, использованы как терапевтические средства при ожирении, пшерлипемии (атериосклероз), диабете, предиабете, кариесе.

Дозировка: 100-10000 SiE/r один или несколько раз в де1сь через рот перед и/или во время и/или после еды.

Формы изготовлега1я: таблетки, драже, капсулы, раствор, суспензия, гранулы, жевательная резинка, зубная паста и как добавка к содержащим сахарозу пищевым и/или вкусовым продуктам.

Прнмер1.5г И1пт1битора a fflлaзы из актинопланаценового штамма SE 50 с 10 10 AiE/r и 220 растворяют в 50 мл 0,05 М буфера из ацетата натрия срН 4,5, добавляют 25 мг -амилазы из ячменя и инкубируют при 35° С. По истечении 3 ч расп1епление заканчивают. Инкубацио1шую смесь, размещивая, вкапывают непосредственно в сухой спирт, белый хлопьевидньш осадок отсасьшают на нутче, промывают зтанолом и эфиром, каждым два раза и сущат в вакууме.

Вьиод 2,5 г с 4,6 10 Ai Е/г и 700SiE/r.

П р и м е р 2. 100 г ингабитора амилазы из штамма SE 50 разбавляют в 500 мп 2 N H2S04 и гидролизуют 4 ч при 100° С, После охлаждения черно - коричневый раствор посредством 10 N КОН устанавливают рН 2 и для обесцвечивания 2 раза добавляют 4 г активного угля, каждьш раз размешивают около 10 мин и отсасьшают наиутче. Уголь выкидывают и светло - желтый филырат нейтрализуют 10 N КОН (рНб,6)„ Для адсорбции на угле активных в отношении тopмoжe шя часпщ. добавляют 20 г акт тированного угля. После 10 мин разк гщивания отсасывают на нутче, и фильтрат еще раз адсорбируют 10 г активирова шого угля. Остаток угля объединяют, фильтрат выбрасывают. Объедине1шые остатки угля с целью удаления остаточных солей и глюкозы промывают 1Ю нутче 2 л дистиллированной воды и 2 л 2,5%-ного этанола и затем 3 раза десорбируют 10%-ным и затем 15%-ным этанолом каждьш раз 750 мл. Для десорбщш размешивают каждьга раз 10 мкн, отсасывают на нутче и добавляют свежее десорбщюнное средство. Соответствующие фильтраты из 10%-ной или 15%-ной десорбщш объединяют, в ротационном вьшарителе сгущают приблизительно до 20 мл и лиофилизируют.

Выход прибгшзительно 2 г 10%-ной фракции и 1,2 г 15%-ной фракщш.

Специфическая активность 10%-ной фракции 9000SiE/r, 0,2-Ш AiE/r, активность 15%-ной фракции 15000 Si Е/г, 0,5- 10 AiE/r.

П р и м е р 3. 200 г изолированного из актинопланаценового штамма SE 82 ингибитора амилазы (6 10 А1Е/г, 160 SiE/r) растворяют в 10 мл 0,75 N HCI. Исходный раствор имеет активность 120 10 AiE/л при 3200 SiE/л. Этот раствор инкубируют в течение 30 мин при 100° С в водяной бане, затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гидролизате составляет 8- Ю AiE/л, а ингибитора сахаразы - 21000 SiE/л.

П р и м е р 4. 200 г изолированного из актинопланаценового штамма SB 18 ингибитора амилазы (4-10 А1Е/г, 310 SiE/r) растворяют в 10 мл 0,75 N HCI. Исходный раствор имеет активность 80- 10 AiE/л и 6200 SiE/л. Этот раствор инкубируют 30 мин при 100° С в водяной бане, затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гадролизате составляет Ю- 10 AiE/л, а ингибитора сахаразы - 28000 SiE/n.

..

Формула изобретения

1.Способ получения ингибиторов сахаразы путем выраищвания штамма i Actinoplanaceen SE 50, SE 82 или SB 18 на питательной среде с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности ишибирования сахаразы, вьщеленный целевой продукт подвергают гидролизу.

2.Способ по ц. 1,отличающийся тем, что гидролиз осуществляют водным раствором кислоты.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что гадролиз осуществляют (З-амилазой.

HcT04tmKH информации, принятые во внимание при экспертизе;

1. Заявка ФРГ Р2064092.0, 1970.