Способ определения гистамина Советский патент 1977 года по МПК G01N33/16 

40°С и в таком виде оставляют в холодной камере на 1-6 суток. При продолжении анализа пробирки оттаивают. Процедуру замораживания и оттаивания повторяют еще раз, после чего к 2 мл плазмы или к осадкам лейкоцитов добавляют бидистиллированную воду до 4 мл, тщательно перемешивают и прибавляют 0,5 мл 5 н. едкого натрия. Смесь насыщают хлористым натрием и добавляют 10 мл гептилового спирта. После перемешивания на качалке в течение 30 мин пробирки центрифугируют при 1600 q в течение 10 мин, 8 мл органической фазы переносят в другую пробирку с 3 мл 0,1 н. соляной кислоты, встряхивают в течение 20 мин и центрифугируют при 36 в течение 10 мин. К 2 мл водной фазы с гистамином добавляют 0,4 мл 1 н. едкого натрия, содержимое пробирки тщательно встряхивают и добавляют 0,1 мл свелсеприготовленного 1%-ного раствора о-фталевого альдегида в абсолютном метиловом спирте. После тщательного перемешивания выжидают в течение 4 мин. Затем добавляют 0,2 мл 3 н. раствора соляной кислоты.

Флуориметрирование проводят при максимуме спектра возбуждения 360 им и сканировании спектра флуоресценции (максимум при 450 нм). При работе с флуоресцентным спектрофотометром nitachi MPF - 2А используются щели прибора величиной соответственно 10 и 20 нм, чувствительность 2, дополнительное шунтирование фильтром УИ-39. Одновременно анализу подвергают 4 мл бидистиллированной воды и два образца с 0,5 мкг гистамина в 0,1 н. растворе соляной кислоты. Однако в одном из них при реакции конденсации меняют очередность добавления

3 н. соляной кислоты и о-фталевого альдегида, так как в кислой среде реакция конденсации гистамина с о-фталевым альдегидом не происходит. Неспецифическую флуоресценцию реактивов вычитают. В наших условиях она не превышает интенсивности свечения 0,01 мкг гистамина с о-фталевым альдегидом в кювете.

Подсчет количества лейкоцитов в лимфоцитарном и гранулоцитарном слоях венозной крови, с учетом гемограммы и числа лейкоцитов капиллярной крови, позволяет полученный результат перевести на концентрацию резервного гистамина в мкг/10 лейкоцитов

лимфоцитарной или гранулоцитарной фракции венозной крови, а также концентрацию гистамина в отдельных фракциях капиллярной крови.

Предлагаемый способ определения гистамина повышает точность и надежность результатов, уменьшает возможность ошибок при экстрагировании вещества, упрощает процедуру исследования, требует меньших затрат труда и лабораторного оборудования, дает

возможность судить о содержании свободного и резервного гистамина в отдельных фракциях венозной и капиллярной крови.

Формула изобретения

Снособ определения гистамина в различных фракциях крови путем ее экстракции, перевода в водную фазу, конденсации с о-фталевым альдегидом и спектрофлуориметрирования, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения стабильности результатов, гистамин из крови экстрагируют гептиловым спиртом.