Способ прогнозирования течения первичной артериальной гипертонии Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

00

00

о м Изобрет&иие относится к медицине ri isMGHHo к лабораторной диагностике (j -.южет быть применено для прогнойирования течения первичной артериальной гипертонии. Дель изобрете1П-1я - повышение точное ги способа. Способ осуществляют следующим об,; ; :; п lyv У больлого натощак берут кровь из ;зеь-ы И- определяют в ней активност ЦК vrix р омо КС ид а 3 ы, к о нце н тр ацию мо . кислоты, серотонина и гистами Опоеделение цитохромоксидазы в фгрмо.нньпч элементах крови произт одят tTai.cTHbiM методо. Г1| обирку с 3,75 мл смеси кислот ;ос1оя1аей КЗ 2,5%-ного водного растр,--,-)л: укгусчой кислоты И 2%--ного вод:::1гч 1 pyiCTBCjia, винной кислсть в про- 1-::г-:1,-г--; ::+, берут 0,15 мл крови из n:;;jj.ri:a, лпремешивают до пЪлного гемо |,;;:,-, у: )1,;фу1-р;рущт при 1:00 об/ми v: ei- e-iW: 20 мкн. Нядосадочную жтщтгг ть удаляют, оставляя 1 мл ее. По ;к7ляют 3 мл физиологического рас т-:;) -(Сгт-яхнвагпт, вновь центрифуги г-уог лО м:г-; ч отсасмзают всю надоса;;.- 1|уго я1-ы,; ;о1;ть, К осадку добазляют J -(Л ;Ьосфгтно1 о буфера (рН 7,4) -- О , мл сггйртового раствора .О.-паф;ч:1.г(;ч, Пробиртк энергично встряхивают. Г: а:;;т.тиЛ-ио ставят контроль (1 ,5 мл фос.;фчт11ого + 0,2 мл гУ -пафто.1га и 1г;м3.в;/о пробирку (1,5 мл фосфатртог Зуфег 1 : г-1Л физиологического рас-вооа} , Все: пробирки ставят s термосгат ка i О мин при . Затем вовсе. лробирки,, кроме нулевой пробгл, доба . №ч димeтштиapaфeнилeндVlaминa {,1 г сгого вещества раст-воряют в 00 мл спирта) и ставят на 20 мин ;з термостат , Затем охла/кдаюти в опытпые пробы добавляют 9 мл 96 -нс5го спиртаJ в контрольную - 6,3 мл спирт в нулеоую - 6,5 мл и оставляют стоят на ч Затем центрифугируют 20 мин при 1500 об/мин. Результат смотрят па ФЭРС-М, при длине волны 656, кювете 1,0. на правом барабане. За едини цу активности фермента приниманзт его кислородный эквивалент, начисленнЕ м по количеству молей образующегося в реакции красителя и умноженньй на 10 для удобства расчетов. Результат рассчитывают по формуле X (экстин172 п,ия опыта. - дкстинция контроля) хбЗб. Например: X (О , 180-0,070) х 636 -- 69,9 ед. Определение ко:п1ептрации в крови молочной кислоты npoBoiiMT Рзвестным методом. Ход определения: в пентрифуж1;ые пробирки наип-{вают 2 мл 2%-иой трихлоруксусной кис.юты и 0,4 яп крови, перемешивают и п;е Г1-рифз/гиру:.от 10 мин. Берут 1 мл центрифугата, прибавляют 0,5 мл 20%-ной CuSO, , 5 мл , 0,5 г окиси.кальция (прокаленгюй). тщательно перемешивают стеклянной палочкой до появления хчзлубого окрашивания, оставляют стоять я течение 30 ми1, затем центрифугируют, Далее в охлажденные в ледяной бане )тробиркп помещают 0,5 м.т пеитрифугата, 2 капли 5%-пой CuSO, 3 Mji химичесгсм чистой концентрировангкэй К, SO (для пробы Соваля) , тщательно перемеп.Иваю . В контроль берут ; капли 5%-ной CuSO. , 6 мл -1 Затем ставят проби экп на 5 :-iHH i;. кипян1ую водяную баню, потог-; - в леjisTijyio и добавляю .- IK 2. кап.ан (в роль i капли) параочс1-тдифе1 Г1.1та. ме11:и,ают палочкой,, пачипая с Koiy рольной пробь. Пробиррси (длают 3 при па 30 мип после чого - в кипящую баню па 90 с (;;Стряхивают в бапе) и опять охпал дают на .пь..у. Ка.чориметрируют на ФЗК-56 з кюветах 5 мм при зе.ггенсМ фильтре. (Содержание мсхггочной кислоты г аходят по стандартной кривой в мг%, построенной по растворг.м мо.чочной кислоты с известной концентрап.ией. , перевода результата в млмоль/л /-нокают результат на коэффициент 0,111. Определение серотонина и гнета-. мина проводят следующим образом. У больного натощак из вены берут 5 мл крови и определяют в ней концентрацию серотонина известным методом. К 5 мл крови добавляют 5 мл 10%-пого раствора трихлоруксусной кислоты, тгцательно перемешивают и центрифугируют в течение 30 мин при 1500 об./мин-. Центрифугат фильтруют и разделяют на две равные части, одна из которых использ-уется для определения концентрации серотонина, другая - гистамина. Для определегшя серотонина фильтрат подщелачивают 0,5 мл 5%-ного NaOH, добавляют 0,5 мл боратного 3 буфера с рН 10, 1,5 г NaCl, 15 мл и-бутанола и встряхивают 10 мин. 3a тем отделяют органическую фазу и экстрагируют из нее серотонин путем встряхивания 5 мл 0,05 М фосфатного буфера с рН 7,0 и 15 мл к-гептана. Встряхивают 10 мин,, отделяют нижнюю фазу (водную) и доба.ЕЛЯют 0,1 мл 0,1 М раствора нингйдрина. Ставят в водяную баню при на 30 мин. Флюориметрируют через 1 ч после бани на ЭФ-ЗМ (длина волны 385 ммк Количество серотонина в опытных пробах рассчитывают по стандартному раствору серотонина, в рабочем раст воре которого содержится 1 мкг в 1 мл ВОДЬ (2 пробирки: в одной 0,5 в другой 1,0 мл раствора серотонина Доводят до 5 мл фосфатным буфером с рН 7,0, добавляют 0,1 мл 0,1 М раствора нингйдрина, и дальше все, как в опыте. Концентрацию серотонин . в крови рассчитывают по формуле 0,5 мкг хО X 6,17 С X 2,5 где 0,5 - количество серотонина,мкг ,в стандартной пробе; О опыт; С - стандарт;. 6,17 - коэффициент пересчета из MKr/NDi в мкмоль/л; 2,5 - количество взятой в опыт крови. Например, при флюориметрировании опытной пробы флюоресценция равна 34, стандарта - ДО. X -Mlll; L.Jl 1,05 мкмоль/л. 4о-.2,5, Для определения гистамина фильтрат помещают в широкую пробирку со шлифтом, добавляют 1,5 г КаС1,0,5м 5 H.NaOH, 10 мл бутанола. Встряхивают 5 мин и центрифугируют 5 мин при 2000 об./мин. Из пробирки пасте ровской пипеткой удаляют нижний сло (водная фаза). В бутаноловую фазу прибавляют 5 мл 0,1 H.NaOH, насьпцен ной NaCl. Встряхивают 1-2 мин и центрифугируют 5 мин при 2000 об. /ми Бутаноловую фазу (верхнюю) отсасывают и переносят в другую такую же пробирку, содержащую 4,5 мл 0,1 и, НС1 и 15 мл гептана. Встряхивают 1-2 мин и центрифугируют 5 мин при 2000 об./мин. Нижнюю фазу от, сасывают и. переносят в обычную пробирку. Добавляют 0,8 мл 1 н. NaOH. 7 0,2 мл 1%-ного ОФА (орто-фталиевый диальдегид - на метаноле). После добавления ОФА раствор стоит точно 3,5 мин. Затем прибавляют 0,4 мл 3 н. НС1 и 2,1 мл 0,1 н. НС1, доводя общий объем до 8 мл. Через 3-5 мин пробы Флюориметрируют. Количество гистамина в пробах рассчитывают по стандартному раствору гистамина с заведомо известной концентрацией. Для этого готовят сначала маточный раствор гистамина, содержащий 100 мкг в 1 мл воды, затем рабочий- раствор с содержанием 1 мкг гистамина в 1 мл. Последний разводят в пять раз, получая разведение 0,2 мкг/мл. Из полученного раствора готовят две стандартные пробы. Первая: 5 мл стандартного раствора, содержащего 0,2 мкг/мл+0,8 мл 1 H.NaOH + 0,2 мл 1%-ного ОФА, далее - как в опыте. Вторая: 2,5 мл стандартного раст вора, содержащего 0,2 мкг/мл +2,5 мл 0,1 н. НС1 + 0,8 МП 1 н. NaOH + + 0,2 мл 1%-ного ОФА, далее - как в опыте. Опытные стандартные пробы через 3-5 мин Флюориметрируют на ЭФ-ЗМ с фильтрами ФК-1 (385 ) и В - 2 (550 ммк) - боковые. Концентрацию гистамина в крови рассчитывают по формуле 0,5 хО х8,99 С X 2., 5 где О - опыт; С - стандарт; 2,5 - количество крови, мл; 0,5 - количество гистамина, мкг, о в стандартной пробе; 8,99 - коэффициент пересчета из мкг/мл в мкмоль/л. Например, при флюлориметррфовании опытной пробы флюоресценция равна 41 , стандарта - 52. - 0.5x41 х8,99 1 ,42 мкмоль/л. 52 X 2,5 Тип гемодинамики определяют по соотношению минутного объема крови и периферического сопротивления, которое получают известным методом на основании величины систолического и диастолического давления и частоты пульса. Выявляют три типа гемодинамики: гиперкинетический, гипокинетический смешаиньй. Определение типа

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ПЕРВКЧНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТО HHt-J путем определения типа гемодинамики, отличающийся тем, что, с целью повышения1точности способа, в крови определяют содержание цитохромоксидазы, молочной кислоты, серотонина и гистамина, определяют соотношение содержания цитохромоксидазы к молочной кислоте, серотонина к гистамину и при уровне первого показателя ниже, а второго выше нормы на фоне смешанного типа гемодинамики прогнозируют прогрессирование гипертонической болезни, а при уровне одного из показателей соотношений i в пределах нормы на фоне гипер- или гипокинетического типа гемодинамики прогнозируют выздоровление. е