Производные нуклеозидов,обладающие антиметаболической активностью Советский патент 1977 года по МПК C07H19/167 A61K31/7076 A61P35/00 

едкого натра в водном растворе получают 3карбоксамидное производное (выход 77%), которое обработкой небольшим избытком горячего водного раствора едкого натра переводят в 3-карбоксипроизводное (выход 89%). Производные предлагаемых нуклеозидов обладают выраженными антиметаболическими свойствами. Для доказательства фармакологического эффекта мышам (линии BDFL) внутрибрюшинно вводят лейкемические клетки, после чего - испытуемое соединение (мг/кг от веса тела животного). Часть животных после введения лейкемических клеток используют в качестве контроля. Фармакологический эффект оценивают по величине соотношения Т/С, где Т - продолжительность жизни подопытных животных, а С - контрольных животных. Результаты изучения сведены в таблицу. Пример 1. Получение 4-ацетамидо-З-цианопиразоло (3,4-d) пиримидина. Суспензию из 20 г сухого (1 ч/110°С при 0,5 торр) 4-амино-З-цианопиразоло (3,4-d)пиримидина в смеси 100 мл уксусного ангидрида сухого пиридина (высушенного над едким калием) энергично перемешивают и доводят за 5 мин до температуры кипения. Смесь энергично перемешивают при температуре кипения, с обратным холодильником, в течение 35 мин (растворение протекает за 20 мин). Затем раствор охлаждают до комнатной температуры (ледяная баня) и упаривают под вакуумом, получая темное пастообразное твердое вещество. При отсутствии особых указаний все упарки осуществляют под вакуумом при 35°С. Приливают 10 мл метанола и раствор оставляют на полчаса и опять упаривают под вакуумом. Полученное в остатке твердое вещество перетирают со смесью льда с водой (всего 60 г) в течение 15 мин и отфильтровывают. Темно-окрашенный «пирог промываюг холодной водой при 0°С (2X20 мл). Затем влажное твердое вещество растворяют в 850 мл кипящей воды, обрабатывают 3 г активированного угля и фильтруют горячим. Фильтрат охлаждают до 0°С и отфильтровывают рыжевато-коричневое твердое вещество. Твердое вещество растворяют в минимальном количестве 1,25 н. раствора едкого натра, необходимого для растворения, т. е. около 75 мл, обрабатывают 2 г активированного угля и фильтруют. Фильтрат охлаждают до 0°С и, перемешивая, доводят рН до 5 приливанием по каплям уксусной кислоты. Отфильтровывают белый осадок, промывают холодной (0°С) водой (2X15 мл) и после сушки под вакуумом (25°С, 0,5 мм рт. ст.) получают 13,4 г (53%) 4-ацетамидо-З-цианопиразоло (3,4-ё)пиридина, т. пл. выше 360°С. Небольшой образец дважды перекристаллизовывают из воды, получают белые кристаллические иглы (кристаллы в форме иглы) с т. пл. свыше 360°С. Найдено, %: С 47,38; Н 2,93; N 41,49. CsHsNeO. Вычислено, %: С 47,40; Н 2,99; N 41,58. Пример 2. Получение 4-адетамидо-Зциано - 1 - (2,3,5-три-О-ацетил - р - D - рибофуранозил) -пиразоло (3,4-d) пиримидина. Все операции по получению этого соединения осуществляют в исправном противогазе из-за обильного выделения цианистого водорода. Тщательно измельчают 10,4 г (51,3 ммоль) полученного в примере 1 4-ацетамидо3-цианопиразола (3,4-d) пиримидина и 3,41 г (52,3 ммоль) цианистого калия, сушат раздельно (8 ч при 110°С/0,5 торр) и затем помещают в сухую колбу, содержащую 384 мл нитрометана (высушенного через 4Амолекулярное сито в течение 2 дней). Смесь нагревают до температуры кипения при энергичном перемешивании и затем в один прием вносят 14,:8 г (50,3 ммоль) кристаллического 2,3,5 - три-О - ацетил-В-рибофуранозилхлорида (т. пл. 46-50°С). Продолжают энергично перемешивать при нагревании в течение 2 ч и затем смесь упаривают под вакуумом до коричневого сиропа, содержащего некоторое количество суспендированного твердого вещества. Сироп растворяют в 300 мл этилацетата и промывают последовательно 100 мл воды, 4 раза по 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и затем 2 раза по 20 мл насыщенного раствора поваренной соли. Раствор сушат над безводным сульфатом натрия и пропускают через силикагель (5 см X X 7 см). Слой силикагеля промывают 2 раза по 20 мл этилацетата, фильтраты объединяют и упаривают под вакуумом, получают

20 г светло-коричневого пенистого вещества (губки).

Растворяьот его в 15 мл хлороформа и помещают на верху колонки (37 X 6,5 см) сухого силикагеля (607 г) и элюируют смесью хлороформа-ацетона-метанола (44 : 5 : 1), собирают фракции по 20 мл. Фракции 10- 34 содержат легкоподвижный компонент (соломенно-желтая пена, 12,9 г, 56%), 34-45 фракции содержат 3,4 г смеси (преимущественно легкоподвпжный компонент) и фракции 46-50 содержат 730 мг медленно текущего компонента, при ПМР-анализе которого оказывается, что это смесь двух соединений (далее не анализируется). Легкоподвижный главный компонент имеет структуру 4-ацетамидо3-циано -1-(2,3.5-О) - ацетил - D - рибофуранозил)-пиразоло(3,4-ё)пиримидина (на основе установленных физикохимических данных).

Пример 3. Получение 3-метилформимидата, моногидрата метилового эфира 4-амиHO-1-(|3-D - рибофуранозил) - пиразоло(3,4-б) гипимидин-З-фоомимидовой кислоты.

Растворяют 10 мг металлического натрия в 10 мл сухого метанола (перегнанного с применением гидрида кальция) и затем вносят хроматографически однородный 4-ацетамидо-3-циацо-1-(2,3,5-три-О-ацетил - р- - D-рибофуранозил) - пиразоло(3,4 - д)пиримидин (3,89 г в виде сухой цены) губчатого материала, полученного в примере 2. Тут же происходит растворение, и через 70 мин реакция заканчивается. Доводят реакционную смесь до пН 7 добавлением небольщих порций Дауэкс 50 (в Н+-форме, промытой безводным метанолом). Раствор быстро фальтруют для удаления ионообменной смолы и упаривают под вакуумом.

Остаток перетирают с изопропанолом (3 раза по 10 мл) и получают светло-желтый порошок (2,44 г), перекристаллизовывают из метанола, получают 2.2 г (выход 82%) 3-метилформимидата в виде соломенно-желтого порощка с т. пл. 127-131°С. Образец перекристаллизовывают из метанола - воды для анализа (блестящие гроздья) т. пл. 132°С, образует очень вязкий расплав, пузырящийся при Г45°С.

Найдено. %: С 42,1; Н 5,4; N 24,7.

C,nH,c.N,O5-H.O.

Вычислено, %; С 42,1; Н 5,3; N 24,55.

Неочищенный светло-коричневый губчатый продукт, образующийся при получении (пример 2) 4-ацетамидо-3-пиано-1-(2,3,5-три-Оацетил-p-D - рибофуранозил) - пиразол (3,4-d) пиримидина (после пропускания раствора через слой силикагеля и последующей упарки) можно обработать, как указано выще, и получить продукт с общим выходом в пересчете на загруженный 4-ацетамидо-З-цианопиразоло (3.4-d)пиримидин порядка 50-60%.

Пример 4. Получение 3-карбоксамидинового производного, 4-амино-1-(р-О-рибофуранозил) - пиразоло(3,4 - d) пиримидин-3карбоксамидина.

Метод 1. Полученный в примере 3 (1,5 г) 3-метилформимидат вносят в стальной реактор с 10 мл жидкого аммиака, реактор закрывают и оставляют на 40 ч при комнатной температуре. Затем аммиаку дают испариться, а остаток суспендируют в 10 мл кипящей воды. В кипящую смесь приливают метанол, пока раствор не станет прозрачным, затем раствор упаривают до объема 10 мл и оставляют кристаллизоваться при комнатной температуре. Отфильтровывают, осадок на фильтре промывают небольщим количеством холодного метанола при 0°С, получают 1,1 г (выход 77%) производного 3-карбоксамидина с т. пл. 188-189°С. После перекристаллизации образца из метанола получают игольчатые кристаллы ст. пл. 189-190°С.

Найдено, %; С 42,7; Н 5,0; N 31,6.

CuH.NyOa.

Вычислено. %: С 42,7; Н 4,9; N 31,7.

Метод 2. Описанным выще способом обрабатывают 980 мг полученного из примера 2 соединения (пены или губчатого вещества), представляюп его собой хроматографический

гомогенный 4-ацетамидо-3-циано-1-(2,3,5-тоиО-апетил-р-В-рибофурапозил) - пиразоле(3,4d)пиримидина. После отгонки аммиака твердый остаток перетирают с 13 мл смеси этанола-изопропанола (1:2) и перекристаллизовывают из метанола и воды. Получают 500 мг (выход 76%) производного З-карбоксамидина п лва приема, т. пл. 188-190°С.

Пример 5. Получение 3-карбоксамидокгимного производного, гемигидрата 4-амиио -(р - D - рибофуранозил) - пиpaзoлo-(3,4-d) пиРимидин-3-карбоксамидоксима.

Растворяют 1,5 г (4,17 моль) полученного в примере 3 7-метилформимидата в 25 мл метанола при температуре кипения и вносят

г (15 моль) кристаллического гидроксиламина. Растворение заканчивается через полчаса и из раствора начинает выделяться другое твердое вещество, не производное 3-метилформимида. Суспензию нагревают в общей

сложности 2 ч при температуре кипения с обратным холодильником, охлаждают до 0°С, отфильтровывают, осадок на фильтре промывают 2 раза по 5 мл холодного метанола (0°С). Получают 1.34 г мелкокоисталлического продукта с т. пл. 151-152°С (пенится). При перекристаллизации из метанола - воды (40 мл, 1:1) Получают 1.21 г (выход 86%) чистого карбоксамидоксимного производного, т. пл. 242-244°С (чистый или прозрачный

).

Найдено. % Г 39.8; Н 4,9: N 29,2. r,,H,-,N70,-0.5 Н.О. Вычислено, %: 39,55: Н 4,8: N 29,3. Пример 6. Получение 3-карбоксамидразонового производного, гемигидрата 4-амино1-((3-О-рибофуранозил)-пиразоло (3,4 - д)пир1тмчдин-3-карбокся тидпазона.

В суспензию 1,5 г (4.16 ммоль) полученного в примере 3 3-метилформимидата в 30 мл

метанола поиливают 2,5 мл (42,5 ммоль)

7

85%-ного гидразингидрата. Смесь нагревают, пока раствор не станет прозрачным, после чего оставляют на 18 ч при 25°С. Отфильтровывают выпавшие соломенно-желтые иглы и промывают их небольшими количествами метанола, получают 1,26 г 3-карбоксамидразонового производного с т. пл. 218-220°С. Вторую порцию (100 мл) с т. пл. 208-210°С получают из надосадочной жидкости (маточника). Кристаллы объединяют и перекристаллизовывают из 10 мл воды и получают 1Д2 г (выход 81,2%) чистого производного 3-карбоксамидразона с т. пл. 220-221С.

Пример 1. Получение производного 3тиокарбоксамида, 4-амино-1-(р-В-рибофуранозил)-пиразоло(3,4-д) пиримидин - 3 - тиокарбоксамида.

Растворяют 140 мг (6,4 ммоль) металлического натра в 45 мл безводного метанола и затем через раствор пропускают безводный сероводород при перемешивании магнитной мешалкой в течение 5 мин.

В перемешиваемый раствор кислого сернистого натрия вносят 2,3 т (6,4 ммоль) полученного в примере 3 3-метилформимидата в один прием, через 3 мин образуется прозрачный раствор, затем выпадает желтый осадок. Смесь перемешивают в течение 2 ч при 25°С, охлаждают до 0°С, отфильтровывают, осадок на фильтре промывают 2 раза по 7 мл холодного метанола. Твердое вещество (т. пл. 132-135°С, сильно пузырится, без запаха) растворяют в 400 мл смеси этанола - воды (1:1). Раствор упаривают до 200 мл, затем охлаждают до комнатной температуры. Отфильтровывают выпавший осадок и промывают последовательно 2 раза по 5 мл холодного метанола и 10 мл безводного эфира. Получают 1,69 г (выход 81,3%) светло-желтого твердого веш;ества - производного 3-тиокарбоксамида (т. пл. 250-251,5°С, сильное разложение, неприятный запах). Небольшой образец перекристаллизовывают из смеси метанола - воды (т пл. 252-253°С, при разложении по описанному выше).

Найдено, %: С 40,6; Н 4.6; N 25,4.

CnHuNfiO S.

Вычислено, %: С 40,5; Н 4,3; N 25,6.

Пример 8. Получение 3-цианопроизводного моногидрата 4-амино-3-циано-1-(р-Врибофуранозил) - пиpaзoлo(3,4-d)пиримидина.

Растворяют 1 г (3,06 ммоль) полученного в поимеое 7 сухого (высушенного в течение 1 ч при 25°С/0,5 торр) производного 3-тиокарбоксамида в 70 мл теплого (50°С) диметилформамида. В полученный раствор вносят 0,84 г (3,10 ммоль) хлористой ртути (2) и 1 мл (7,24 ммоль) триэтиламина и смесь перемеативают в течение 3 ч при комнатной температуре. Раствор фильтруют через фильтр с диатомовой землей для отделения образовавшейся черной сернистой ртути. «Пирог промывают сухим диметилформамидом (10 мл), чбъсдиняю голомецнр-желтьте фильтрати и

8

упаривают под вакуумом. Остаток перетирают с 10 мл метанола (0°С) и получают 800 мг соломенно-желтого твердого вешества. Его суспендируют в 20 мл кипящего метанола,, затем в горячую суспензию по каплям приливают воду (до образования раствора). Растворитель отгоняют нагреванием до начала кристаллизации (конечный объем 15 мл). При быстром перемешивании при охлаждении до 0 0°С получают 580 мг (выход 61%) 3-цианопроизводпого в виде белого твердого вещества с т. пл. 235-238°С (разложение). При повторной кристаллизации с обработкой активированным углем получают 500 мг (выход 42.6%) чистого 3-цианопроизводного (т. пл. 238- 240°С, спекается при потемнении при 225°С).

Найдено, %: С 42,8; Н 4,8; N 27,2.

С„Н,2:НбО4-Н2О.

Вычислено, %: С 42,6; Н 4,5; N 27,1.

Пример 9. Получение З-каобоксамидного производного 4-амино-1-(р-В-рибофуранoзил)-пиpaзoлo(3,4-d) пиримидин - 3 - карбоксамида.

Готовят суспензию 2 г (5,57 ммоль) полученного в примере 3 ю/клеозида 3-метилформимидата в 30 мл воды и ппиливают 1 мл Н. едкого натра. Смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре и отфильтровывают суспендипованное вещество (после охлаждения до 0°С). Извлекают 3карбоксамидное производное в виде твердого вещества, которое промывают 2 раза по 10 мл воды (0°С), и сушат под вакуумом (25°С/ /0,5 торр), получают 1.78 г З-кяпбокгамидного производного, т. пл. 262-265°С. При перекристаллизации из 230 мл воды получают аналитически чистый продукт в количестве Ь43 г (выход 74,5%) с т. пл. 270-27ГС (бурпый расплав, пузырится).

Найдено, %: С 42,6; Н 4,7; N 27,1.

СиНмМбОз.

Вычислено, %: С 42,6; Н 4,5; N 27,1.

Пример 10. Получение 3-карбоновой кислоты.

Полученное в примере 9 3-карбоксамидное производное (730 мг; и/или 2,14 ммоль) растворяют в 10 мл воды, содержащей 2 мл 1,25 к. едкого натра. Раствор нагревают в течение 18 ч при температуре кипения с обратным холодильником до прекращения выделения аммиака. Прозрачный раствор подкисляют добавлением 2,45 мл 1,02 Н. соляной кислоты. Тут же образуется студенистый осадок, который при дальнейшем перемешивании превращается в белое твердое вещество. Слспензию поодолжают перемешивать в течение 1 ч при 0°С и отфильтровывают осадок. Его промывают 2 раза по 5 мл холодной воды (0°С) и затем растворяют в 60 мл горя ей воды. Оставляют постепенно охлаждаться до 0°С, происходит кристаллизация. Получают 590 мг (выход 89% вещества в виде белых игл с т. пл. 296°С (спекается, потемнение при 240°С). При перекристаллизации небольшого образца }тз вол,ьт получают аналитически чи910

стый образец производного З-карбомовой кис-где R - карбоксамидин-, карбокси-, карблоты (или 3-карбоксильного производного),оксаммд-, метилформимидат-, тиокарбоксакоторый темнеет при 245°С, спекается примид-, карбоксамидоксим-, карбоксамидразон305°С,. т. пл. выше 360°С.или цианорадикал,

Найдено, %: С 42,4; Н 4,3; N 22,4.5 обладающие антиметаболической активноCiiHisNsOe.стью.

Вычислено, %: С 42,45; Н 4,2; N 22,5.Источники информации,

™ принятые во внимание при экспертизе

Ф о р м } л а и 3 о б р е т е и и я

Производные нуклеозидов общей фор- 0 1. Кочетков Н. К., Торгов И. В., Ботвиник, мулыМ. М. Химия природных, соединений. М.,

584011