Способ выделения фермента целлюлозы из содержащего его раствора Советский патент 1978 года по МПК C07G7/28 C12D13/10 

(54) СПОСОБ шадвЛБНИЯ ФЕРМЕЙТА ЦВЛЛЮЛАЗЫ ИЗ СОДЕРЖАЩЕГО ЕГО РАСТВОРА Перед выделением фермента рН ферадентного раствора доводят соляной Кислотой до 3,0-6,0, затем раствор охлаикдают до 5-15°С, в охлажденный раствор задают измельченную целлюлозу с величиной частиц 10-100 мк в количестве 0,1-10 г на каждые 50 еди ниц активности фермента. Суспензию перемешивают в течение О,2-2 ч и отфильтровывают . Сырой сорбат высушивакт в потоке теплого воздуха и изме чают. Полученный препарат обладает стабильностью при хранении. Целлюлоз является субстратом, на который действует фермент, поэтому в процессе гидролитического действия фермента с бент полностью разрушается, а освобо дившийся фермент атакует новые порци субстрата, добавленные в реакционную смесь. Пример. Продуцент целлюлазы Тп «chodefwioi vifide выраедивают на питательной среде следу{оа1его состава, %: Стекловичный жом 5 Сульфат аммония I Однозс№1ещенный фосг фориокислый калий 0,2 ВодаОстальное Культивирование проводят при постоянном переманивании и аэрации в те чение б суток при 28-30с. По окончании ферментации отделяют мицелий фильтрацией. В Фильтрат культурально жидкости при добавляют 15%-ную соляную кислоту в количестве 0,5 л на 1 м После перемешивания рН фильт рата составляет 4,5. Затем фильтрат охлаждают до и добавляют 20 кг измельченной до величины частиц 100 целлюлозы. Суспензию перемешивают в течение 20 мин механической мешгшкой и фильтруют через капроновую ткань. Полученный сорбат высушивают на ленточной сушилке при . Выход фермента в данном случае составил 95100%. Активность полученного по предлагаемому способу препарата при хранении его в течение года при 20с не изменялась. Предлагаемый способ позволяет довести выход ферментного препарата до 95-100%, исключить использование органических растворителей и нейтральных солей на осаждение фермента, использовать в качестве сорбента отходы целлюлозно-бумажной промышленности, повысить степень очистки ферментного препарата и стабильность его при хранении, а также значительно снизить его себестоимость. Формула изобретения 1.Способ вьаделения фермента целлюлазы из содержащего его раствора, например культуральной жидкости, предусматривающий осаждение фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и его стабильности при хранении, раствор, содержавши фермент, перед осаждением охлаждают и осаждение фермента осуществляют на сорбент, представляющий собой измельченную целлюлозу, полученную суспензию фильтруют и отделенный при этом сорбат сушат. 2.Способ по П.1, отличающийся тем f что раствор охлг1ждают до 5-15 С. 3.Способ по П.1, отличающийся тем, что сорбент вводят в количестве 0,1-10 г на каждше 50 единиц активности фермента. 4.Сорбент по П.1, отличающийся тем, что величина частиц целлюлозы составляет 10-100 мк. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. Авторское свидетельство СССР 495347, кл. С 12 D 13/10, 30.07.73.