Способ получения штаммов продуцентов лизина Советский патент 1978 года по МПК C12K1/02 C12D13/06 

руюшего Ь -лизин с экономическим коэффициентом по треонину, равным не менее 50, независимым о г концен граций изолейцина и валина, соотношение которы равно (1 - 16) : 1, и с удельной скоростью роста в указанных условиях 0,2 0,33 ч -1. Новый штамм получают в непрерывной культуре на минеральной среде с яоба&лением необходимых органических компонентов при лимитации феонина и-избытке кислорода, соотношении изолайщина и вал на равно 0,25 : 1, скорости разбавления ,околр 0,1 ч после повышения усгано-( вившетюся в равновесном состоянии ( eieadv - eiafce ) уровня биомассы, а образовавшиеся селектанты изолируют на комплексную агариаованную среду, например мясо-пепгонный агар, и затем испытывают на минфальной среде , с добавлением необходимых органических компонентов при соотноиюнин изолейцина и валина.равном (1-16):1, Изолированные культуры показывают более высокий выход биомассы на единицу субстрата U -треонина (1 г клеточного сухого вещества на 1 г треонина), а также постоянную скорость роста при уве личении сод жания изолейцина по отношению к валину, в частности штамм-селектант M.dEuiaw CUS , проиоходяаций oT.gEulam CUsT-3, в условиях непрерывного культивирования при изменении в соотношения иэолейцина и валина равном (1-16) : 1 обес печивает выход биомассы на единицу суб страта-треонина на уровне 50, а скорост роста 0,2 - 0,33 ч . Штамм образует ка комплексных средах по крайней мере ЗО-4О г/л U -лизина в периодическом процессе и 25 г/л в непрерывном. Пример. 24-часовую культуру M.Sutat«lCUsT-3, выращенную на скошенном мясном агаре, смывают дио тиллированной водой и помещают в фи колбы емкостью 45О мл со 1ОО мл питательной среды. iB 1 л питательной среды содержится 2 г сахарозы; 5ОО мг казактнокислот (без витаминов, фирма.) Л со )} 2,72 г ; 7,16 г Na.HPO. ; 0,535 г NH д се ; 0, Mg СР 0,О5 г FeCKg ; О,ОО4 г MnCg ; 6,5 м la -метионина; ЗО мг U -треонина; 20 м L-валина; 20 мг L -изолейцина;1О мг ii - пантотената; 20 мл L - лейцина; 10О мкг ферриоксамина В ; 20 мкг биотина, Среду стерилизуют ари 12О С в течение 2О мин, рН до стерилизации 6,8, рН после стерилизации 6,9 - 7,0. Культура в колбах инкубируется при 28 С на качалке, делающей 15О об/мин. Через 2О ч путем измерения оптической плотности определяют концентрацию клеток спектрофотометрическим методом при длине волны 56О нм, которая должна соста&лять 15СХ-2ОО мг/л по сухому весу. Затем 25О мл культуры помещают в сосуд с рабочим объемом 250 мл, на дне которого находитсг стеклянный фильтр Q4- Teiite . Через культуральную жидкость пропускают воздух. Дополнительную питательную среду подают в культуральную жидкость с помотцью насоса со скоростью 25 мл/ч. Эта среда имеет тот же состав, что и посевная, но отличается концентрацией следующих аминокислот: 10 мг U метионина, 2О мг U -треонина, 8О мг U -валина, 2О мг L -ЙЕолейдина. для определения концентрации клеток отбирают через каждые 12 ч, Siecid -state характеризуется следующими параметрами: биомасса (по сухому весу) 15О-2ОО мг/л; температура 28 ± 1°С; рН 7,р - 7,2; скорость разбавления О,1 ч } акация 25О мл/мин (1:1). Увеличение концентрации биомассы до 25О-ЗОО мг (по сухому весу) указывает на накопление селектантов. Sieadlv eloite с новым уровнем биомассы сохраняется в течение 1О-12 дней, чем приступают к изол5щии нового штамма. Для изоляции и дальнейшего изучения свойств нового штамма используют комплексную агаризованыую среду и жидкую минеральную среду без или с добавлением необходимых аминокислот. Новый штамм M Rutam4CUsT-3 по . своим основным генетическим свойствам (потребность в биотине,гомосерине, изолейцине и валине) подобен родительскому штамму. Инокулят культуры на минеральной среде с необходимыми органическими компонентами, по составу соотвегсгвук щей среде, использованной в хемостате, 24 ч роста в количестве 5% переносят в серию колб, содержащих 1ОО мл среды. Состав среды в этих колбах в основном соответствует составу среды в хемостате, за исключением концентрации следующих аминокислот: 5О мг I -метио- 559 ннна; 10 мг L -треонина 20,40,80,16О и 32О мг U -изопейцнна;, 2О мг Ь -валина. Таким образом, схзогношение конценгрг ций иэолейцина и валина в различных ва риангах сред равно (1-16):1. Осорость роста ju при любом соотношении изопейцина к валяна равна 0,33 ч . Выход биомассы на единицу субстрататреонина повышается от ЗО по 5О и остается постоянным в указанных условиях. Перечиоленные новые свойства штамма являются наследственно закрепленными и стабипьно сохраняются гфн а есевах культур. Формула изобретения Спосх б получения штаммовMicracoccus tuiamicue - продуцентов лизина, предуема тривающий их культивирование в питательной среде и последующий отбор, отличающийся тем, что, с целью получения штаммов, обеспечивающих в режиме непрерывной ферментации более 9 высокий выход биомассы на единицу су страта, а также постоянную скорость роота при различных соотношениях в питатель ной среде изолейцина и валина, исходный штамм культивируют в непрерывном процессе в питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли и органические добавки при лимитации треонина, избытке кколорода в соотношении изолейцина и валина равном 1 : 4 и скорости разбавления О,1 ч -1 , а затем после повьииения уотановившегося в заданном режиме ферментации уровня биомассы осуществляют отбор накопившихся салектантов путем изолирования их на комплексной агаризованной среде и последующего испь1тания на минеральной среде с гюбавлением н&обходимых органических компонентов при -...... соотношении изолейцина и валина равном (1 - 16) : 1. Источники информации, принягые во внимание при экспертизе: 1, Авторское свидетельство СССР № 17494О, кл. С 12D 13/06, 1976.