75 до 125/Ы , а ширина от ЗО до GSfU при среднем размере 95jU х 47/lj . Коиидиоспорь, пузырьки и фиалщдь глаакостеняые и слабо-коричневые. Длина конидноспоризменяется от 38 идо но может достигать 85 . Кк ширина составляет вплоть ао 5 fU , Пузырьки изменяются от неполностью сферических до полусферических н на концах могут выравниваться. Диаметр пузьфьков обьтно составляет от 8м до 10 , а в среднем 9, 6 rtj . Стеригма типа бисера, а вторичная стеркгма часто парная. Форма первичной стеригмы близка к клинообразной. на изменяется от 3,2уи до 6,3ш,состав лйя в среднем 4,4Дj . В самом широком месте они имеют .- Вторичная стеркгма имеет форму удлиненной бутылки, В своем самом широком месте они дос тигают 3,4/и, сужаясь к одному концу до 8нирины 1 р . Их длина изменяется от 4/7 fu до 7,9/11 J. составляя в среднем 6,2 |tj 1 Кокидкн мелкоскладчатые, сферлмеские, с цветом от желтого до зеленого и кзг геняются в диаметре от 1,6 до 4,6, составляя в среднем 2,5/и ,. Клейстоте Щ1Й с| еркческий, тонкостенный и каменя. ет цвет от прозрачного в начальиьзй пер1год до T«MHo-nypnypHort) в период окончательного развития. Его диаметр наменяетсй от 185|г)до 320 ш , соста&ляя в среднем 2ОО jU , Аски прозрачные, от сферических до овальных и могут измельчаться развитием клейстотецил. Сферические fflCKH siMefOT диаметр 12,6 ;U . Средний размер овальных асков равен 14. 11, I т ваменяется от 1.2,6jH цо 17,4т по ЯНШ5в И ОТ Q,5p до 12,6 по ширине. АсЕСЮПОры гладкостегшые, оранжевые н -украшены двумя параллельными эквато риальными гребешками, которые не разрушаются и имеют ширину 0,8Я , Если гребешок аква1чзриальный, то он проходи через дяи шуюось линзообразной ас кос-- поры, дяйна которой составляет от 4,3i до 3,1/U f а ширина - от 2, до 3,5/ujB среднем размер ее равен 3,2 /U. Есяи гребешки периферийные, то аскоспора кажется сферической, а тело имбв1 яиамвтр5 равный длине линзообраз ного вида. Агар с сояодовым экстршстом. При выраншБашш при 25 С культура растет быстфо, досшгая диаметра 5 см за десять диви и вплоть до 7 см за время 6 4 т трех до четырех недель. Колонии баратистые, желто-аеленого цвета. На седьмой день нал поверхностью и в нижнем поясе появляк 1х:я беспорядочные небольшие белые пучки клеток. Эти пучки клеток с возрастом становятся тускл0 жeлlы ffl. Городатая периферия колонии состоит из желтовато-коричневых нитей. Обычно поверх иость имеет умеренный оливково-аеленый цвет, Конвдиальное и аскогенное состояния, с небольшими исключениями аналопмны при росте на агаре Чапека, Пузырьки более мелкие с диаметром, изменяющимCS от 6, до 11, в среднем 8,7у1(. С4)ерические аски имеют диаметр 11,0 ишрику от 9,5/и до 10,Зр. Средний размер аскоспор 4,0д) х 3,2fU . Указанный штамм можно выращивать на питательных средах, содержапшх ис«точнкки углерода, например сахарозу, глюкозу, мальтозу, глкцерол источники азота, например знзимат1-гческий пщро лизат казеина, мука хлопковых семян, жгадкость от вымачивания зерна, минеральные соли и микроэлементы. Выполнение предложенного способа иллюстрируется следуюпщм примером. Пример. Для получения посевного материала штамгт Aspeid« EU9 niduEons 8112 инкубируют на среде следующего состава (в %); томатная паста - 2, детская овсянка - 2, , деионизировапная вода - 94 при 25 С в течении 7 дней, и смь вагот споровый ма- териад говяжьей сывороткой. Полученной суспензией засевшот50 мл вегетативной среды следующего состава (в %) : глюкоза - 1,0, рол ™ 1,О,-иука хлопкового семени 2,5, углекис. кальций « 0,1, вода - 95,4 н инкубируют в колбе Эрленмейера на 25О мл при 25 С в течение 48 часов на качалке (250 об/мин). Дня яолу€ения больиюго количества посевного материала 1О мл вышеописанной инкубированной вегетативной среды используют для засева 200 мл вегетаTifflHofl растительной среды второй стадии, имеющей I-OT же состав, что и вегетативной среды. Среду второй стадии инкубиру от в 2-литровой хш-фокогорлой колбе Эрленмейера при 25 С в течение 48 часов на встряза1Батвле(250 o6/MHii), Иикубкрован 1ую вегетативную среду ступени (800 кет), приготовленну как описано выше, испа ьзуют для 56 засева lOO л стерильной ферментационной среды следующего состава (в %): Сахароза2,О Мальтоза1,0 Солодовый экстракт1,0 Патока0,5 Жидкость от вымачивания зернаО,5 Энзиматический гидролизат казеина 0,5 Вода 94,5 После стерилизации в автоклаве при 12О С в течение ЗО минут под давлением рН среды составляет 7,1, ЗасеянHyjo ферментационную среду подвергают ферментированию в 165-литровом фермен таре в течение 5 дней при 25 С. Ферментационную среду аэрируют Стерильным воздухом со скоростью 4О об/мин и пере мешивают обычными мешалками со скоростью 2 5О об/мин. -. После ферментации культуральную жид кость (2ОО л) отфильтровывают через фильтр из диатомовой земли, Ог делеиный мицелий экстрагируют метанолом (ЮОл) Метанольный экстракт концентрируют под ,мом до объема примерно 50 л. Кон центрированный Метанольный экстракт под кисляют до рН 3,5-4,0 добавкой соляно кислоты. Полученный раствор дважды экс трагируют 0,5 объемами хлороформа. Хло роформовые экстракты объединяют и концентрируют до объема примерно 1 л. Часть этого хлороформного концентрата (25О мл) добавлят-уг к ацетонитрилу (1ОО мл). Полученный раствор прсх жльтровывают, а фильтрат концентрируют под вакуумом до объема примерно 150 мл. Концентри: еванный экстракт помещают в силикагелевую колонку (5,5X54 см). Колонку элюируют смесью ацетонитрил : вода (97:3) со скоростью 5 мл/мин, собирая фракции объемом около 10 мл. Элюирование контролируют силикагелевой тонкослойной хроматографией с использованием системы растворителей бензол: метанол (7:3). Наличие антибиотического комплекса контролируют биоавтографией ; с использованием Candjiа a b eulffe .Фра ции 136-190 содержат антибиотическую смесь. Эти фракции объединяют и выпа-. ривают под вакуумом с получением 453 мг антибиотического комплекса. Выделение антибиотика А-22О82 про изводят следующим образом. Часть антибиотической смеси, содержащей антибиотик и другие второстепенные факторы (200 мг) и полученной как опи-, сано выше, подвергают хроматографичес-кому разделению на силикагелевой колонке (1,5 X 6,0 см). Колонку элюируют смесью апетонитрил: вода (95:5) со скоростью 1 мл/мин, собирая 5 мл фракции. Фракции контролируют как описано выше. Фракш1и 1-3, содержавшие антибиотик А-22О82, объединяют и конц( рируют под вакуумом до масла. Это масло вновь подвергают хроматографическо- му разделению на сияикагелевой. колонке (1,5 X 12 см), элюируют смесью ацетонитрил : вода (97:3). Фракции 15-20, содержавшие антибиотик А, объединяют и концентрируют под вакуумом до масла. Это масло растворяют в 2 мл раствора метанола в диэтиловом эфире. Образовавшийся осадок отделяют фильтрацией и высушивают с получением 35 мг антибиотика А-22О82. Антибиотик А 22082, обладающий противогрибковой активностью, имеет: Эмпирическую формулуC52Hg,N70,g-H20, Элементарный состав, %: С 56,24 И 7-, 54 N 8,84 О 27,39 молекулярный вес 11ОО CO-ID -44°(С 0,5, ) 5 -15б(С 0,5, ). Максимальные частоты поглощения в ультрафиолетовом спектре (в кислом и нейтральном метаноле): 225, 275, 284. В основном ме-таноле - 245 и 290 нм. Максимальные частоты поглощения в инфракрасном спектре ( КВг ): 2,97 (сильный), 3,ЗО(слабый), 3,36 (выступ), 3,39 (средний), 3,47 (слабый), 5,97 (сильный) 6.06(сильный), 6,45 (средний) 6,53 (средний), 6,83 (средний), 7,78 (слабый) 8,ОО (слабый) 9.07(слабый), 11,65 (слабый). Спектр ндерно-магнитного резонанса.. 176,1; 174,3; 173,4; 172,7; 172,4; 169,8; 158,4; 132,8; 13О,9; 129,6; 129,0; 116,2; 77,0; 75,7; 74,4; 71,3; 70,9; 69,6; 68,3; 62,4; 58,7; 56,9; 56,1; 52,9; 39,О; 38,5; 36,9; 35,2; 33,9; 32,е 32,6; ЗО,7; ЗО,4; ЗО,2; 8,2; 27,О; 26,5; 23,6; 2О,1; 19,6; 14,4 н 11,3. Т 0,35 при тонкослойной хроматорафии на силикагеле с использованием истемы растворителей бензол :метанол
(7:3) и биоавто графин Cand i do( «зйЬ cot Its для контроля.
Антибиотик А-22082 - белое аморфное вещество, растворимое в метаноле, этаноле, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, этилацетате и в водных растворах с рН выше 7,0; не растворимо в диэтиловом и тетралейном эфирах.
Антибиотик А 22082 обладает противо грибковой активностью. Эту активность
Исследуемый организм
CandidO aRbicotts 0,625
TricVzophvjloti menlagroph |tes 0,078 Candidoj irop-icoiEis3,12
Противогрибковая активность антибиотика A-22082 дополнительно показана опытами п vivo . При введении двух доз антибиотика мышам, зараженным Candida atbicaU6|6buia обеспечена зажита против C.OiElsicoirts. Мерой защитного действия является величина BD5O {эффективная доза в мг/кг, защищающая 50% мышей). Величины ED 5о антибиотика против Canciidor аЕЬдсаоа. на мышах составляли 30 мк/кг (интраперитональное введение) и 5О мг/кг (подкожное введение).
При введеюги антибиотика А-22082 интраперитонально или подкожно мышам в количестве 1ОО мг/кг дважды в день в течение трех дней (общее количество 600 мг/кг) не было обнаружено признаков острой токсичности.
измеряют с помощью обычной диск-диффузионной методики. (б-миллиметровые тампоны погружают в растворы, содержащие антибиотик, помещают на агаровые пластины, засеянные испытуемым организмом). В таблице приведена минимальная ингибирующая концентрация (МИК) на Тшск, при которой антибиотик А 22082 ингибирует перечисленные орга. низмы.
МИК (мкг/диск)
Также не было признаков острой токсичности при введении антибиотика А-22082 интраперитонально мышам в количестве 200 мг/кг трижды в течение 24 часов (всего бОО мг/кг).
Формула изобретения
Способ получения полипептидного антибиотического комплекса, обладающего противогрибковой активностью, отличающийся тем, что штамм АерегgiEEus niduEaviS 8112 выращиваЮТ В аэробных условиях Нс- питательной среде содержащей источники углерода, азота iT MiiHepajibHH© соли с последующим вьщелешгем целевого продукта и,раздечением его на компоненты.
