Способ получения альбумина Советский патент 1978 года по МПК A61K38/38 

1

Изобретение относится к получению лекарственных препаратов.

Известен способ получения сывороточного альбумина из растворов, содержащих альбумин, путем нагревания очищаемого раствора ае менее 20 мин при температуре 45-75°С в присутствии каприлат-иона 0,0075-0,02 М концентрации и рН 4,8-5,7 отделения осадка коагулированных белков центрифугированием, осветления и концентрирования очищенного альбумина известными приемами 1.

Однако известный способ является трудоемким, а получаемый продукт содержит примеси.

С целью упрощения технологии производства альбумина и выделения примесей по предлагаемому способу перед термокоагуляцией раствор концентрируют, например, осаждая альбумин, добавлением трихлоруксусной кислоты до концентрации от 3 до моль/л в присутствии этилового спирта концентрацией от 40 до 60°/о, растворяют в воде осадок альбумина, примеси удаляют в присутствии этанола концентрацией от 55 до 75% путем добавления трихлоруксусной кислоты, и после удаления осадка доводят рН до 6,5-7,0 для осаждения альбумина, затем растворяют его в воде.

Для термокоагуляции в присутствии каприлата натрия, составляющего 15% от содержания протеинов, рН устанавливают в пределах 4,85-4,95, при 20% рН - 4,95-5,05, а при 30% рН доводят до 5,15.

С целью удаления больщей части примесей гемоглобина перед концентрированием добавляют углеводород, содержащий галогенпроизводные, например, хлороформ в присутствии этанола.

Способ получения очищенного альбумина, в частности альбумина человека, из раствора очищаемого альбумина, содержащего чужеродные или денатурированные протеины, заключается в том, что осуществляют термокоагуляцию нежелательных элементов путем нагревания раствора в присутствии каприловой кислоты до температуры 52-64°С, предпочтительно между 56-60°С. Термокоагуляцию проводят, например, 1 ч в присутствии каприлата натрия, составляющего 15-30% от содержания протеинов в растворе, при рН между 4,8-5,25. Каприловую кислоту вводят в виде каприлата натрия, но можно вводить и в чистом виде. Величина рН тем больще, чем больще содержание каприлата по отношению к протеинам. Термокоагуляция позволяет устранить больщую часть гемоглобина и осадить денатурированныи альоумин, а также чужеродные протеины. Если исходный раствор плазматического происхождения, то предлагаемым способом получают очищенный альбумин, пригодный для непосредственного применения. Если же исходный раствор содержит чужеродные примеси, например из плаценты, плацентарной крови или. гемолизной крови, то перед термокоагуляцией удаляют большую часть гемоглобина, ферментов, таких как щелочные фосфатазы, путем осаждения протеинов с помощью кислоты, например трихлоруксусной или полифосфорными кислотами, а также удаляют наполнители различных групп. Гемоглобин удаляют в присутствии этанола в концентрации 60% с добавлением галогенированного углеводорода, такого как хлороформ. Ферменты (такие как фосфатазы) удаляют после удаления гемоглобина в присутствии этанола в концентрации до 60%, например 25%, с добавлением трихлоруксусной кислоты Концентрация кислоты может быть в пределах от 3 до lOlCT моль/л, предпочтительно 4,210 моль/л. Кислоту добавляют в протеиновый раствор lipH температуре ниже 0°С, предпочтительно (-5) - (-10)°С, до полного осаждения протеинов. В некоторых случаях трихлоруксусную кислоту можно заменить полифосфорной. Удаление наполнителей различных групп осуществляют при концентрации этанола выще 55%, например 75%, и концентрации протеинов преимущественно меньшей или равной 10 г/л, добавляя трихлоруксусную кислоту в раствор при температуре ниже 0°С, например (-5) - (-10) °С. Концентрация трихлоруксусной кислоты 8-10 моль/л. Полученный осадок удаляют. На этой же стадии удаляют также щелочные фосфатазы, если они присутствуют. Пример. Из 7 т плаценты получают известным способом плавающий на ее поверхности глобулин путем осаждения его этанолом. Для увеличения гемоглобина верхний слой, сотхержащий 58 г протеинов на 1 кг плаценты, добавляют 25%-ный этанол и хлороформ так, чтобы весь объем ( 17000 л) содержал 0,6% хлороформа; рН доводят до 6,0-6,1. Верхний слой в этих условиях поддерживают при температуре 24°С. В результате образуется осадок, который отделяют и выбрасывают, удаляя большую часть гемоглобина. Объем верхнего слоя уменьшается до 16000 л (в этот момент выход протеинов 8 г/кг). Для удаления ферментов в верхний слой (16000 л) добавляют 25%-ный этанол .и трихлоруксусную кислоту концентрации 4,2-10- моль/л; температуру до добавления понижают до -80°С. Получают осадок около 1000 кг (выход протеинов 4 г/л), который удаляют, применяя герметичные центрифуги с непрерывным выбросом осадка. Верхний слой уменьшается до 15000 л. Таким образом удаляют или денатурируют щелочные фосфатазы и другие фер.менты, такие как трансамилазы. Осадок снова растворяют в воде и объем доводят до 1800 л водой. Затем производят осветление. Для этого повторно растворенный осадок наполняют кремниевым порошком (аэросил) в концентрации 0,2%. Образуется осадок 50 кг, который отделяют центрифугированием. Осветленный плавающий сверху раствор соответствует выходу протеинов около 6,5 г/кг. При удалении групповых наполнителей осветленный раствор разбавляют смесью 75%-ного этанола и трихлоруксусной кислоты Концентрацией около 8-10 моль/л. Содержание протеинов 10 г/л. Температуру поддерживают около -7°С. В результате групповые наполнители выпадают в осадок 10 кг, котор-ый удаляют. На этом этапе удаляют также остаточные ферменты. Далее верхний слой, содержащий около 8 г протеинов на 1 л, фильтруют, рН доводят до 6,5-7, температуру поддерживают между -5 и -10°С. Образуется осадок альбумина 140 кг, который центрифугируют, а верхний плавающий слой удаляют. Очищают альбумин путем повторного растворения осадка в воде, получают объем 280 л, выход протеинов 5 г/кг. После диализа в дистиллированной воде доводят содержание протеинов до 20 г/л, добавляют в раствор каприлат натрия крнцентрацией 2,41-10 моль/л и доводят (при помощи уксусного тампона) рН до 5,0-5,05. Этот раствор выдерживают при температуре 60°С около часа. Оставшиеся протеины, кроме альбумина, коагулируют и выводятся в осадок с последними следами гемоглобина, также как денатурированная часть альбумина. В растворе остается лищь практически чистый альбумин. Затем верхний слой доводят до 1750 л и фильтруют. Разбавленный раствор альбумина концентрируют, добавляя 40%-ный этанол при рН 4,8-4,9 и температуре -8°С. Получают осадок, который собирают и повторно растворяют. Новый раствор диализуют, обрабатывают глиноземным гелем, концентрируют в вакууме, после чего проводят стерилизирующую фильтрацию и получают 95 л концентрированного практически чистого альбумина с содержанием 200 г/л. На этой последней стадии выход протеинов 2,7 г/кг. Полученный альбумин можно применять для терапевтических целей в медицине. Формула изобретения 1. Способ получения альбумина из раствора альбумина, содержащего чужеродные и денатурированные протеины, путем нагревания раствора, подлежащего очистке, при температуре между 52°С и 64°С включительно в присутствии каприлата натрия при рН между 4,8 и 5,25 включительно, сепарации с помощью центрифугирования из осадка коагулированных протеинов, осветления и концентрации очищенного альбумина известными методами, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологии производства и выделения примесей, перед термокоагуляцией раствор концентрируют, например, осаждая альбумин добавлением трихлоруксусной кислоты до концентрации от 3 до 10-Ю моль/л в присутствии этилового

спирта в концентрации от 40 до , растворяют в воде осадок альбумина, затем примеси удаляют в присутствии этанола в концентрации от 55 до 75% путем добавления трихлоруксусной кислоты и после удаления осадка доводят рН до 6,5-7,0 для осаждения альбумина, затем растворяют осадок в воде.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для термокоагуляции в присутствии каприлата натрия, составляющего 15% от содержания протеинов, рН устанавливают в пределах 4,85-

4,95, при рН - 4,95-5,05, а при SQo/o рН доводят до 5,15.

3. Способ по п. I, отличающийся тем, что, с целью удаления большей части примесей гемоглобина, перед этапом концентрирования добавляют углеводород, содержащий галогенпроизводные, например, хлороформ в присутствии этанола.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент США № 2765299, кл. 260-122, 1956.