Способ получения 2,3-диокси-бензоилсерина Советский патент 1978 года по МПК C12D13/00 

Изобретение относится к области микробиологической промвшлеикости и каса-ч ется получения биологически активных соединений. Известен способ получения-2,3-аиоксибензоилсерина путем культивирования urraMMa.scher ichia на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные © последующим выделением целевого продукта 1 . Недостатком данного способа является низкий выход целевого продукта (75мг/л Цепью изобретения является повышени выхода целевого продукта. Это достигается путем культивировани штаммаК Ee8si€g2a pneumonipeSp Д В С № 1015 на питательной среде, содержащей г/л: хлористый аммоний 0,9-1,2; двузамешенный фосфорнокислый натрий 2,,5}, однозамещенный фосфорнокислый калий Nl,O-2,p| сернокислый магний 0,08-0,12; сернокислую медь О,014 О,016; сахарозу 4,О-6,0. ШтаммК&еб5 е е pnuurrtonideSp, две № 1О15 - продуцент 2,3-диоксибензоилсерйна выделен из фекалий ребенка и хранится в коллекции Львовского НИИ эпидемиологии и микробиологии под номером 1015 и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами. Культурально-морфологические признаки. Величина клеток двухсуточной культу-, ры на мясопептонном бульоне - 1,0-2,0 мк. Преобладающая форма клеток - эллипсовидная. Клетки неподвижны, имеют четко выраженную капсулу, размеры .которой составляют 4-5 мкм. Размножаются клетки делением. Окраска по Граму отрицательная. Среда Эндо. Колонии круглые, гладкие, слизистые, выпуклые, с ровными краями; диаметр колонии односуточной культуры 1,5-3,0 мм. Фиэиолого-биохимические признаки. Раэлагаеу глюкозу с образованием кислоты н газа; мальтозу, лактозу, маннит, сахарозу, ксилозу, рамнозу, араби- нозу, инозит, глицерин, рафинозу, рибозу галактозу, адонит, целлобиозу, Салицинс образованием кислоты} дульиит не уо ваивает| разлагает мочевину и цитрат натрия. Реакция Фогео-Проскауэра полож тельная; реакция с метилротом отрицательная; сероводород и инпол не образует желатину не разжижает. Относится к капсульному серологичео кому типу 8. Сущность изобретения поясняется следующим конкреи ным примером выполнения. Пример. Для получения 2, ксибензоилсерина 1фи помощи КЕ.рпеито щаё SP, две № 1О15 готовят среду, содержащую, г/л 5 1,0; KHjPO« 1,5; , 3,, Си SOi4 0,015; сахарозы 5,0 г/л; дистиллированной воды - до 1 л. Квалификация реактивов - чда. Стерилизацию среды проводят автоклавнрованием при 0,5 атм в течение 30 мнн. Раствор сахарозы стерилизуют отдельно от других компонентов среды. После автоклавирования раствора сахарозы и остальных компонентгьв среды смешивают, контролируют рН среды (6,9-7,1). КультиБироаанне бактерий проводят в ферментере, узль которог) выполнены вз иержввею щей стали, в который заливают 1 л среды. Засев среды проводят односуточной культурой K.poeumonk3€ sp. две №. 1О15, выращенной на мясопептонном бз«гьоке, в течение 18-20 час в количестве 10 мл. Пр.; культивировании бакт ий в ферментере через среду продуваю стерильный воздух txr компрессора со скоростью 1 л/мин; культуру перемешивают; при скорости оборотов мешалки 6ОО об/мин. Культивирование ведут при 35-37 С. Биомассу контролируют нефелометрически. Накопление 2,3-аиоксибензоилсерина в среде определяют количеств венно при помощи реакции Арно (10 г молибдата натрия и 10 г нитрата натрия на 100 мл дистиллированной воды). Для этой цели отбирают 5-10 мл кул туральной жидкости, центрифугируют при 10-12 тыс. об/мин; 3-5 мл супернатанта подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 1-2, вносят О,О8-0,12мл реактива Арно, после чего раствсф подщелачивают до рН 9-1О крепкой щелочью (3-5 капель 5N Ы оОН) до появления стойкой красной окраски. Рас-пвор фотометрируют при 515 нм на СФ-4. Количество 2,3-диоксибензоилсерина рассчитывают по калибровочной кривой. Данный способ позволяет за 10-18 час культивирования получить 0,3-0,4 г/л 2,3«-дноксибензоилсерина. Формула изобретения Способ получения 2,3-диоксибензоилсерина путем культивирования культуры продуцента на питательной среде, соде(. жащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выдел&нием целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода, культивируют штамм KPebsieffoi ptieumoTOacsp,ABCv№ 1015 на питательной сре4ё, содержащей, г/л; хлористый аммоний 0,9-1,2; двузамешенный фосфорнокислый натрий 2,5-3,5| однозамещенный фосфорнокислый калий 1,0-2,0;.сернокислый магний 0,08-0,12| сернокйслую медь 0,014-0,016; саха- розу 4,0-6,0. Источники информации, принятые во внимание при эксгЕвр.тийе: f Biochemica and bfbp jf5ica6 Resea commun/cations voC 25, № 4, 1966, p.p. 454-461.