Питательная среда для выращивания микроорганизмов-продуцентов лизина Советский патент 1979 года по МПК C12K1/06 C12D13/06 

Лльбу.микмое 5-20 молоко Стабилизатор 10-30 Вода остальное С целью повьпиения содержания свободных аминокислот э питательно среде, целесообразно провести ферментный или кислотный гидролиз аль буминного молока и в питательную среду ввести полученный гидролизат Альбуминное молоко является по604HIJM продуктом молочной промышле ности и получают его из подсырной сыворотки, которую подогревают и о рабатывают коагулирующим агентом, отделяют жидкую фракцию, содержащую молочный сахар, и получают сгусик альбуминное молоко . Оно предст ляет собой концентрат, содержащий белки, представленные альбумином, глобулином, гамма-формой казеина, казеиновой пылью, не улавливаемой при фильтрации, а также минеральны вещества,витамины, биокатализаторы ферменты и пигменты, гормоны и др. Содержание общего азота субстрата 1,0-1,5% , в том числе содержание белкового азота - 0,6-1,2%. В субс рате присутствуют небелковые.азотные соединения в виде мочевины 27-32 мг%, аминокислот 23-70 мг%, мочевой кислоты - 85-99 мг%, креа на 8-11%, пуриновых оснований 20-25 мг% и продуктов распада нукле иновых кислот. Минеральные вещества представлены окисями. В их состав входят (в % от содержания золы) : калий - 31,3, натрий -9,2, кальций 20,1, магний -2,4, фосфор - 23,7. Ценность альбуминного молока опреде ляется также наличием фосфолипидов служащих передатчиками кислорода, благотворно влияющих на деятельность ферментов. Альбуминное молоко характеризуется высоким содержанием ценных компонентов (около 50%), используемых ауксотрофными культурами Продуцентами L-лизина. Подвергая альбуминное молоко гидролизу, резко повышают содержани свободных аминокислот (до 23% от со держания сухих веществ). Для приготовления кислотных гидролизатов в качестве гидролизующего агента можно использовать не только соляную кислоту, но и уксусную, фосфорную. Гидролиз 3%-ной соляной кислотой осуществляют в автоклаве при 0,15 МПа в течение 2 час при соотношении субстрата и гидролизующего агента 5:1. Гидролиз 96%-ной уксусной кислотой проводят при 0,15 МПа или 0,11 МПа в течение 2 час при соотношении субстрата и Гидролизуюшего агента 1:1 или 2:1. Гидролиз фосфорной кислотой пр воцят при ГН 0,2 и 0,11 МПа в течение 1 час. Для приготовления ферментных гидролизатов в качестве гидролизующего агента используют протеолитические ферменты производства НИИ Прикладной энзимологии или технический препарат протосубтилин ГЗх производства Вильнюсского ферментного завода и Ефремов ского биохимического завода.Гидролиз проводят в течение 4-6 час при 4548°С и рН 7,2-7,5. Концентрация . ферментного препарата составляет 0,5%. Сущность изобретения поясняется примерами. П р и м е р 1. Готовят питательную, реду следующего состава (г/л среды): Меласса (по содержанию РВ)100 АММОНИЙ фосфорнокислый25Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,5 Калий фосфорнокислый двузамещенный0, 5 Кукурузный.экстракт10Альбуминное молоко10Вода до 1- л. рН 7,2-7,5 стабилизируют мелом (10 г/л) . Ферментацию культуры Bnevibacteч um sp. 22 ЛД ведут при 31 + , асход О2. в первые 24 час - во время оста культуры - 50% насыщения, во ремя биосинтеза - 10-20% насыщения. После 60 час культивирования кульуральная жидкость содержит 35,3 г/л Ь-лизина. П р и м е р 2. Питательная среда ля выращивания продуцента L-лизина pevibactei°ium sp. 22 л имеет следующий остав (г/л среды): Меласса100 АММОНИЙ сернокислый 25 Калий фосфорнокислый однозамешенный 0,5 Калий фосфорнокислый двузамешенный 0,5 Кукурузный экстракт 10 Гидролизат альбуминного молока 30%-ной уксусной кислотой 5 Мел10 Водадо 1 л. Условия культивирования аналоичны примеру 1. . В конце ферментации в культуальной жидкости накапливается 7,8 г/л L-лизина. П р и м е р 3. Для выращивания родуцента L-лизина Bnevibactentum p.22 ЛД используют питательную среду следующего состава (г/л среМеласса150АММОНИЙ сернокислый 3