Способ консервирования лейкоцитов крови Советский патент 1979 года по МПК A01N1/00 

40О выдерживается ЗО мин при комнатной температуре, поспе чего суспен аию кпеток разливают в попиэтипеновые амиупы по 1,5-2,0 мп и замораживают по двухэтапной программе: на первом этапе - со скоростью 2-4° С в 1 мин до -15 с тепловой остановкой при этой температуре в течение 10 мин; на втором этапе - со скоростью 40О С в 1 мин до -196 С.. Замороженный материал хранят в жидком азоте в течение суток, а затем размораживают в водяном термостате при 42 С. Определение -показателей сохранности клеток проводят сразу же и через 3 ч после размораживания проб. В течение этого времени пробы хранят в холодильнике при . В качестве основных показателей сохранности лейкоцитов поо пе низкотемпературной консервации применяют следующие тестьг: определение жизнеспособности клеток методом су- правительного окрашивания эозином (по Шреку): в эксперименте сразу после отогрева -05, через 3 ч -92, подсчет общего количества клеток с вычислением процента морфологически Сохранившихся клеток: в эксперименте сразу после отогрева -9О%, через 3 ч -00%, Определение в среде замораживания уровня активности кислой рибонуклеазы- {)ермента-маркера лизосом, характеризующего степень интактности лизосомальной мембраны и повреждения клетки: в эксперименте до замораживания -0,17, через 3ч. Влияние применения ПЭО-40О и дексаметазона на показатели сохранности лейкоцитов при низкотемпературном консервировании и средние величины показателей из 5 опытов приведены в таблице.