Способ получения глюкоамилазы Советский патент 1981 года по МПК C12D13/10 

t

Изобретение .относится к микробиологической промьалленности, а именно к спосо&ам получения ферментного препарата глюкоз лазы, используемой при ферментативном раси5еплении крахмала S спиртовой и крахмалопаточной промышленности.

Известен способ получения глюкоалдалазы, предусматривающий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролиз кукурузной муки солодом или бактериальноЯ ct амилазой, разделение полученного гидролизата на два потока, один из которых используют на стадии ферментации, а другой разбавляют до содержания сухих веществ 6-7% и используют для выращивания посевного материала, культивирование грибов Aspergillus awamori 466 на питательной среде, содержащей гидролизат кукурузной муки .

Недостатком известного способа является длительность процесса получения фермента (280-320 ч).

Цель изобретения - ускорение процесса.

Указанная цель достигается тем, что выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде.

одержащей кр.ахмал, азотнокислый агний, однозамещенный фосфорнокисый калий, хлористый калий, серноислое железо и солодовые ростки,

в течение 22-24 ч при температуре 28-30°С,гидролиз кукурузной муки ведут в течение 30-40 мин при 5860°С, при этом в питательную среду обавляют диаммоний1 осфат .

диаммонийфосфат добавляют в две стадии: на первой стадии - в количестве 0,2-0,4% к объему среды после гидролиза кукурузной муки, а на второй - 0,1-0,2% через 20-24 ч после

начала культивирования.

Предлагаемый способ состоит в следующем .

Посевной материал культуры AspergJHus awamori 466 готовят на жидкой

питательной среде, содержащей картофельный крахмал, азотнокислый натрий , фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки.

Выращивание осуществляют в течение 20-24 ч при 28-30°С.

Подготовленную жидкую посевную культуру передают на стадию культивирования в инокулятор. Для культивирования посевной культуры в инокуляторе и далее для ферментации в про изводственных условиях жидкую питательную среду готовят следующим образом. Кукурузную муку смешивают с. водой в соотношении 1:3, разваривают при 148-154°С под давлением 0,3-0,4 мПа в течение 15-20 мин,охлаждают до 60° и осахаривают солодовым молоком или бактериальной о -амилазой в течение 30-40 мин при 58-60°С до образования эритродекстринов. От полученного сус ла, концентрация сухих веществ в котором составляет 18-20%, делают об.ъе среды и разбавляют его водой до концентрации сухих веществ 6-7% а в оставшуюся среду добавляют диаммонийфосфат в количестве 0,3% к объему ср ды. Обе полученные среды подкисляют серной кислотой до рН 4,8, стерилизуют острым паром при давлении 0,10,12 мПа в течение 30-40 мин, охлаждают и направляют соответственно на стадию культивирования посевного материала и на стадию ферментации. Продолжительность культивирования посевного материала в инокуляторе со ставляет 22-24 ч при 28-30°С, непрерывном перемешивании и аэрации ст рильным воздухйм, подаваемым в количестве 16 м на 1 мсрады в час. Фер ментацию осуществляют на высококонцентрированном сусле при 35°С, непре рывном перемешивании и аэрации стерильным воздухом (30-40 м на 1 м среды в час). Через 20-24 ч от начала процесса ферментации в среду BBOJдят оставшуюся часть диаммонийфосфат (0,15%) для ускорения биосинтеза глю коамилазы. Продолжительность ферментации - 72-108 ч. Готовая культура имеет активность не менее 170 ед/мл, При м ё р. Посевной материал Aspergit us awamori 466 выраи1,ивают на питательной среде следующего состава ,%: Крахмал картофельный 6 NaNO-.,0,91 КН2РО,0,1 ,05 MgS040,05 FeS040,01 Солодовые ростки3,0 Остальное Выращивание осуществляют в течение 24 ч при 30°С. Для культивирования производственной стащии посевного материала и ферментации готовят производственную питательную среду. Для .этого кукурузную муку смешивают с водой при 45°С в соотношении 1:3 полученную массу разваривают при 14в°С, давлении 0,4 мПа в течение 15 мин. Разваренную массу охлаждают до 60°С,, затем осахаривают солодовым молоком в течение 30 мин до крас но-бурой окраски водной пробы,что указывает на образование эритродекст ринов. Часть сусла разбавляют водой до концентрации сухих веществ 6%, подкисляют серной КИСЛОТОЙ до рН 4,8, стерилизуют острым паром при 121°С, в течение 30-40 мин охламодают до 30°С и используют в качестве питательной среды для получения посевного материала в инокуляторе. В высококонцентрированное сусло вводят 0,3% к объему диаммонийфосфата, подкисляют среду серной кислотой до рН 4,8 стерилизуют при 121°С, в течение 30-40 мин, охлаждают до 35°С и направляют на ферментацию. Ферментацию проводят при 35°С,давлении 0,03 мПа и аэрации стерильным воздухом в количестве 30-40 м на 1 м среды в час при непрерывном перемешивании турбинной мешалкой с 150170 об/мин. Через 24 ч после начала ферментации для ускорения биосинтеза глюкоамилазы в среду вновь вводят диаммонийфосфат в количестве 0,15%. Продолжительность ферментации составляет 184 ч, а активность полученной глюкоамилазы - 183 ед/мл. Предлагаемый способ позволяет на несколько суток сократить процесс культивирования продуцента глюкоамилазы с сохранением высокого уровня активности фермента. Формула изобретения 1.Способ получения глюкоамилазы, предусматривающий выращивание посевного материала, приготовление питательной среды путем гидролиза кукурузной муки солодом или бактериальной о -амилазой, разделение полученного гидролизата на два потока, один из которых используют на стадии ферментации , а другой разбавляют до содержания сухих веществ 6-7% и используют для выращивания посевного материала, и культивирование грибов Aspergilfus awamori 466 на питательной среде, содержащей гидролизат кукурузной муки, отличающийс я тем, что, с целью ускорения процесса, выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, содержащей крахмал, азотнокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, хлористый калий, сернокислое железо и солодовые ростки, в течение 22-24 ч при температуре 28-30°С, гидролиз кукурузной муки ведут в течение 30-40 г/шн при 5860°С, при этом в питательную среду добавляют диаммонийфосфат. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что диаммонийфосфат добавляют в две стадии, на первой из которых в питательную среду в коли58001856

честве 0,2-0,4% после гидролиза ку-Источники информации,

курузной муки, а на второй стадии -принятые во внимание при экспертизе 0,1-0,2% к объему среды через 20-1, Патент США № 3988204,

24 ч после начала культивирования.кл, 195-15, опублик. 197,