Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12, 13эпокси -трихотеценов Советский патент 1979 года по МПК A23K1/00 G01N33/02 

Изобретение относится к методам токсикологических исследований зернофуража и ко.мбикормов.

Известен способ обнаружения в кормах МИКОТОКСИНОВ из группы 13,13-эпокси- -трихотеценов путем получения фракций из экстракта исследуемого образца, очистку их колоночной хроматографией и качественное определение микотоксинов с помощью тонкослойной хроматографии 1.

Недостатком известного способа является то, что он позволяет только качественное определение в пробе корма микотоксинов из группы 12,13-эпокси- -трихотецснов и не позволяет определить их количество в исследуемом субстрате.

Целью изобретения является повышение точности онределения количества микотоксинов из группы 12,13-эиокси- -трихотеценов в пробе корма.

Поставлепная цель достигается тем, что в способе обнаружения в кормах мпкотоксинов из группы Г2,13-эпокси-Д--трихотеценов включаюп.1ем нанесение исследуемой пробы корма на пластинкх с селикагелем и последующую ее хроматографию, после ее проведения на пластинку наносят агаризированную питательную среду для культвировання Candivda pseudotropicalis 44 nk, по характеру роста которой судят о количестве МИКОТОКСИНОВ в корме.

Способ осуществляется следующим образо.м.

На пластинку с тонким закреп.1енным слоем силикагеля с нанесенным экстрактом испытуемой пробы корма после хроматографии наносят агаризированную питательную среду, поверхность которой засевают суспензией клеток щтамма дрожжей Candida, pseudotropicalis 44 nk, чувствительного к микотоксинам из группы 12,13-эпокси-А -трихотецепов. Пластинку выдерживают 18- 20 ч при , после чего учитывают характер роста дрожжей. Зона подавления роста дрожжей с центром в точке, Rf которой равен Rf вещества свидетеля -(на каждую пластинку наносят 5-50 мкп растворрв МИКОТОКСИНОВ из группы 12,13-эпокси-Д -трихотеценов в качестве контроля) свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма микотоксг.нов из группы 12,13-эпокси-Д -трихотеценов. Количество каждого микотоксппа (X) в испытуемом образце корма определяютя по формуле V А-В,

где: А - наименьшее количество (в мкг) микотоксина из группы 12,13-эпоксп-Д -трпхотеценов, которое вызывает образование зоны задержки роста дрожжей; Б - вес испытуемой пробы корма; В - объем экстракта испытуемой пробы, мкл; Г - наименьшее количество экстракта (в мкл), которое дает збну задержки роста дрожжей. Пример. 50 г сухого измельченного испытуемого корма 3-кратно экстрагируют nq 10 мин в смесителе 200 мл смеси хлороформа и ацетона 1:1. Экстракты сливают в одну посуду, выпаривают до объема 5 мл и наносят в количестве от 5 до 50 мкл на хроматографические пластинки. а) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 4,15-диацетокси-8- 3-метилбутирилокси -12,13-эпокситрихотецена-3-ол (микотоксина Т-2) в ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируют в системе этилацетат-толуол 3:1, высушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с 20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией клеток штамма Candida pseudotrpicals 44 nk. Пластинки выдерживают во влажной камере при -f20°C, 18- 20 ч, после чего учитывают характер роста 44 ПК. Наличие зоны подавления рост с центром в точке, которой равен Rf зоны, вызванной вешеством-свидетелем, указывает на наличие в испытуемом образце корма микотоксина Т-2. Количество микоток-. сина Т-2 в испытуемом образце корма вычисляют по вышеприведенной формуле (А 0,2 мкг, Б 50 г, В 5000 мкл, Г 5 мкл): X 0, мкл 4 мкг/г SO г . JHKJI b) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 3,4-дигидрокси-8- 3-метилбутирилокси -12,13-эпокси15-ацетокси-Д -трихотецена-3-ол (микотоксина НТ-2) в. ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируютв системе этилацетаттолуол 3:1, высушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с 20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией к.четок штамма Candida pseudotro icaiis 44 k. Пластинки выдерживают во влажной камере при +28°С 18 ч, ujcjie чего учитывают характер роста Candida psendotropicalis 44 nk. Наличие зоны подавления роста Candida p.seudofropicalis 44 nk с центром к точке, К1 которой равен Rf зоны, вызванной веществом-свидетелем, свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма .микотоксина НТ-2. Количество микотоксина НТ-2 в испытуемом образце вычисляют по вьппеприведенной формуле (А 0,35 мкг, Б 50 г, В 500 мкг, Г 20 мкл): X O ALcr i J O«/M мкг/г SO г-20 Способ прост и экономичен и позволяет определять микотоксины в концентрациях ,0 мкг/г и выше Точность метода 20%. Формула изобретения Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12,13-эпокси- -трихотеценов путем тонкослойной хроматографии, включающий нанесение экстра.кта исследуемой пробы кор.ма на пластинку с силикагелем и последующую ее хроматографию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения количества микотоксинов, после хроматографии на пластинку наносят агари:зованную питательную среду для культивирования с по.мощью штамма Candida pseudotropicalis 44 пк, по характеру роста которой судят о количестве микотоксинов в корме. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 389446, кл. А 23 К 1/00, 1973.