Аммонийная соль этилового эфира -аминоизобутилфосфонил5 -аденилата для ингибирования ферментов биосинтеза белка в клетке и способ ее получения Советский патент 1979 года по МПК C07H19/207 A61K38/55 

иэобутилфосфоновой кислоты и взаимодействием последнего с солью адено зин-5-монофосфата и третичного амина. . Описываемый рпоссб получени-я аммо нийной соли этилового эфира Л -амиггоизобутилфосфонил-5,-аденилата заключается в Юм, что активированный фосгёнОМ этиловый эфир Л -аминоизобутилфосфоновой кислоты подвергают йэаиМодействию с солью аденозин-5- -монофосфата и третичного амлиа. Пример. Смешанный ангидрид мбйЬэтилового эфира oi -аминойзобутил фрсфоновой кг1слрты и аденозин-5-фос фата. Всуспензй 6 0,09 г (0,5 .ммоля) моноэтилового эфира со -аминоизобутил фосфоновой кислоты в б мл абсолютног дйоксана пропускают фосген до полного растворения эфира (3-5 MIJH) , реакционную смесь упаривают в вакууме досуха . и повторяют операции, раст ВОрения в диоксане (3 мл) и упаривания в вакууме трижды. Раствор остатка в 3 мл аб солютного диметилформамя да прибавляют при перемешиваниик раствору 0,315 г (0,45 ммоля) три-н -о тиламмЬниевой соли аденозин-5-фосфата в 3 мл абсолютного диметилформамида. Спустя 2 ч при. 20-22С реакционную смесь упаривают в,Вакуум при 40-42С остаток растирают с эфиром, образрвавшийся осадок отфильтровывают и вейествО внделяю Гпрепаративной хроматографией (йoc:koдящая, бумага ФН-18, система изопропаН9л:.25%-ный аМмиак: вода - 7:1:2; . полосу -0,43 элюйруют водойпри 4-4, и элюат лиофилизуют). Выход аммонийной соли сметланного ангвдрйда .мбнбэтилового.эфираoi -аминойзббутилфосфоновой кислоты и аденозин-5 фосф;ата .45%, ТГ 0,43 (сиетема см. вьре), (бумага ФН-18, OjiDS М ацета натрия, рн 4,1 напряжение 4000 В) , 260 Р ХРОматогр&ммах и электрофорегрЖмйах пог лощающее в УФ-свете рятно окрашивается нингидрином. Продуктами гидрсзниза вещества ( 1н. нсе , . 5 мин) Являются аденозин-5-фбсфат и моноэтиловый эфир di -аминоизрбутил фосфоновой кислоты. Вещество окисляе ся перйодатом, что свидетельствует о охранении цис-гликольной группиров1Ш, а УФ-спектр его соответствует стектру незамещенного по ядру аденозина. Вещество тормозит реакции пирофрсфатнргр обмена и аминоацйлйрова ния тР1К, катализируемые валйл-тРЯК -синтетазой из Е., со64 В , в концентр циях порядка 10 - 10 м. (KI 2,,210 для реакций аденозинтрифосф та (АТФ) - пирофосфатного ФФ{ обмена и аминоацилирования тРНК соответстве но), что близко сродству валиладенилата, основного промежуточного соединения ферментативной реакции. 8- 4 П р и м е р 2. Ингибирование ваил-тРНК-синтетазы аммонийной солью тилового эфира Л -аминоизобутилфосфонил-5-аденилата. Валил-иРНК-синтетазу получают и чищают известными методами. При определении активности ферNieHTa используют АТФ Ыа-доль, С -L-валин (125 Кюри/моль), Р -пирофосфат натрия, активированный уголь, Ь -меркаптоэтанол ко1Ф1ерческой чистоты, которые применяют без предварительной очистки. Ингибирование реакций аминоацилирования тРЯК и обмена проводят в стандартных условиях при 37-37,5с в течение 15 мин. 50 мкл (, ) раствора этилового эфира сС-аминоизобутнлфосфонМл-5 аденилата вносят в йнг убационную пробу непосредственно перед добавлением фермента.Инкубационная проба содержит в пересчете на 1 мл: 40 мкмолей ш ис-НСЕ. .(рН 7,8) ,5 мкмолей ацетата магния, :72 мкмоляхлористого аммония,6 мкмолей, р-меркаптоэтанола,2 мкмоля ,:АТФ, 4 мкмоля . с -Ь-валина, 0,3мг тРНК и 0,005 мг фермента. Скорость ацилирования тРНК определяют известными методами. АТФ-ФФ обмена определяют в стандартной инкубационной смеси, содержащей:в пересчете на 1 мп:100 мкмолей /r jwHCIL. (рН 8,0), 5 М1 молей ацетата магНИ51, 72. мкмоля хлористого аМмония, б мкмолей/5-меркаптоэтанола, 2 мкмолй L-валйна, 2 мкмоля Р -пирофосфата; натрия и О, 02 .мг .. ДнаЛИЗ пробпроводят извёстными-методамй. Получают константы ингибирования для АТФ7ФФ. Kf (М) 2,7-10 а для аминрацилирования Kj(M) 8,2-10 1ормула изобретения 1. Аммонийная соль этилового эфира -сб -аминоизобутилфосфонил-5 -аденилата общей формулы СНз (JО вII Сн- Сн-р0--Р--0--СЙ2I iJ-o, КНг ОСгКя ога Иг н UH5NHj uujnjVJiUi (И га для ингибирования ферментов биосинтеза белка в клетке. 2. Спосрб получения соединений по л:. 1, 6 т л и ч а ю щ и и с я теь., что акти вированный фосгеном в органическом p cTBOpfHTeJie этиловый эфир ей -гминоизобутилфосфоновой кислоты подвергают взаимодействию с солью аденозин-5-монофосфата и третичного амина.

56625586

Источники информации, принятые во2. Гуляев Н. Н., Туницкая Л. В.

внимание при экспертизе Баранова Л. А., Нестерова М. В.,

/f,-WyfS and L.S Smon/TheSanthe-Муртузаев И. М., Северин Е.С., Исспе

t оо л.. У MethyEphosphonate andдование структуры активного центра каS-AdenyPyE ChEorometh9Ephosphonate,J.Or..талитяческой субеданицы гистонкиназы,

Chem.30,(l965). Биохимия, 41 7 (1976) с. 1241