Способ определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы Советский патент 1979 года по МПК G01N33/16 

Изобретение относится к области медицины и может .быть иснользовано в качестве средства для раннего определения патологических изменений в организме.

Известен способ определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы путем взаимодействия в буферной среде лактата и никотинамидаденин-нуклеотида до пирувата 1. Однако известный способ не обеспечивает в 1сокой точности определения изоэнзимов 4. .Целью изобретения является повышение точности определения изоэнзимов 4 и 5.

Эта цель достигается тем, что взаимодействие ведут в буферной среде при значении рН в пределах от 6,0 до 6,5.

Кроме того, в качестве буферной среды применяют раствор триэтаноламина и NaOH.

Определение лактатдегидрогепазы (ЛДГ) имеет больн.юе значение исследовании жидкостей тела. Если эти энзимы у здоровых людей задерживаются главным образом в тканях то при патологическом росте ткани, при лейкемии и других заболеваний их обнаруживают в большой концентрации в сыворотке или другой жидкости тела (например, влагалиихной).

При исследовании сыворотки или плазмы исследуемую пробу при помощи буферного раствора триэтаноЛамин - NaOH доводят до значения рН 6,3-6,4. При этих значениях рН изоэнзимы ШДГ 4 и 5 легко определяются. Наличие лактатдегидрогеназы 5 является показанием присутствия карцином, поэтому точное и чувствительное определение может быть использовано для раннего определениях карцином.

При исследовании влагалищной жидкости, значение рН которой paESHO 4, проводят определение при помощи буферного раствора триэтаноламин - NaOH, рН устанавливают в пределах от 6,3 до 6,4.

Влагалишную жидкость исслед юг нри помощи тампонов или ленты, на которые наносят следуюн 1ий состав, мл:

Триэтаноламин - NaOH-буфер рН7,0

Na-лактат (натриевая соль

D, Z - молочной кислоты) 67,5

Фенозимметосульфат0,1

Н и к от и н а м и да де н и н динуклеотид 1,5 . Нитроголубойхлортетразол 0,5 Вводят тампон во влагалище, при этом жидкость влагалищавступает в реакцию с изо эндйвдагли- -ЛДГ/ имеющимися во влагаjiHl4f.npH чении рН 6,0-6,5, предпочтител)ко ..&,.;4. i . ,|ПрЧ У«тсуви /ЛДП feo влагалищной жид.-.кости пйдтвёрждается тем, что спустя 5- 10 мин тампон окращивается в синий цвет. Состав для проведения исследования наносят на носитель, например тампон, любым известным способом, затем высушивают и хранят его в светозащищенном месте до применения. Состав можно наносить также на хлопчатобумажную ленту в форме щнура. Тампоны с составом могут быть применены не только врачом, а каждая женщина может провести исследование сама. Так окраишвание тампона в синий цвет после 15-ЗО-минутного пребывания во влагалище, свидетельствует об опасноСтйТ1атОЛйГичёского изменения и является сигналом для посещения врача. Для сохранения тампона до посещения врача, необходимо его дезинфицировать, это производят путем погружения испоттьзованного тампона в 20/о-ныйраствор парамида. Было проведено исследование на 100 здоровых женщинах и больных carinoma colli iteri, carcinoma corparis u carcinoma insiti. Тампон вводили на 1-30 мин. После его извлечения были обнаружены следующие цветовые изменения: нет окраски - результат отрицательный у здоровых жен1цин; розовая окраска - у здоровых женщин (в том числе и у беременных до 15 дней); светло-голубая окраска с фиолетовыми точками - Диагноз «зона перерождения ;, голубая или синяя окраска - карцин, 4tOсовпадает с результатом патологического исследования. Определение in vitro, например, сыворотки или плазмы проводят в буферной среде раствора триэтаноламина и NaOH при знач%нии рН в пределах от 6,0 до 6,5. Пример 1. Гигиенические тампоны плотно до 2-х раз обертывают клеющей лентой :U финoй 1. см. Оболочку тампона снимают С противоположной стороны, на которой находится вытяжная нитка. С пробирок сби- . ваюг дно, в образовавщуюся трубку вводят тампон таким образом, чтобы открытый с одной стороны тампон закрывал конец трубки. Вытяжную нитку прикрепляют с другой стороны.при помощи пластыря или клейкой ленты. Трубку со сторон снятой оболочки опускают в раствор, тампон впитывает 1,0 мл раствора. Приготовленный таким образом тампон сущат вымораживанием. Высушенные тампоны удаляют из стеклянной трубки и хранят в темноте в светонепроницаемой бумаге или пленке или в цветной бу.маге 6 защищенном от света месте. Пример 2. При помощи щприца вводят 2,0мл раствора состава для проведения исследований в тампон. Иглу щприца прокалывают через оболочку и, ме/членновпрыскивая, проводят иглу в продольном направлении ко второму концу тампона, этим достигается равномерная пропитка тампона. Затем тампоны сущат и замораживают. Предлагаемый способ обеспечивает возможность быстрого и точного определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы, что позволит быстро выявить патологические измене- ния в организме. Формула изобретения 1.Способ определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы путем взаимодействия в буферной среде лактата и никотинамидадениннуклеотиода до пирувата, и выявлениТО изОЭнзимов по появлению синего окрашивания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения изоэнзимов 4 и 5, взаимодействие ведут в буферной среде при значений рН в пределах от 6,0 до 6,5. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве буферной среды применяют раствор три.этаноламина и ЫаОП. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе I. Biochemica Biophisyca Acta 1968, v 159 h2, pp. 236-244.