Способ дифференциации бруцелл Советский патент 1979 года по МПК C12K1/04 

1

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для диагностики бруцелл.

Известен способ дифференциап.ии бруцелл путем посева культуры бруцелл на питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением видовой принадлежности бруцелл.

Однако известный способ является трудоемким, громоздким и не обеспечивает быстроты дифференциации Brucella melitensis от других видов: бруцелл.

Цель изобретения - упрощение и ускорение дифференциации Brucella melitensis от других видов бруцелл.

Эта цель достигается тем, что культуру бруцелл засевают на питательную среду, содержащую, г/л мясо-пептонного бульона: Глутаминовая кислота 3,7-6,2 Двузамещенный фосфорно-кислый калий0,5-0,75

Лимонная кислота1,25-3,7

Сернокислый магний0,5-0,75

Железоаммониевый цитрат0,05-0,075

Агар Дифко1,25-3,7

Глицерин23,6-39,4

Аминопептид101,5-152,2

и определяют Brucella melitensis ло наличию кодьца на глубине 1-2 мм от поверхности среды через 20-24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20-25 мм на 14 сутки инкубирования. Для осуществления способа готовят днфференциально-диагностическую среду. В 1 л подогретого мясо-пептонного бульона последовательно растворяют 5,0 г глутаминовой кислоты, 0,62 г двузамещенного фосфорно-кислого калия, 2,5 г лимонной

кислоты, 0,62 г сернокислого магния, 0,062 г железоаммониевого цитрата, 31,5 г глицерина. Раствор регзлирз ют с помощью 1 н. NaOH до рН 7,0-7,2, после этого добавляют 2,5 г агара

Дифко, смесь доводят до кипения до полного растворения агара. Готовую среду разливают по 4,0 мл в стерильные пробирки, которые закрывают ватно-марлевыми пробками, и стерилизуют при 0,6 атм 30 мин.

Правильно приготовленная среда должна быть гомогенной и прозрачной.

Идентификацию Brucella melitensis проводят следующим образом. Исследуемая культура должна быть в

S- или R-форме. Смешанная полуляция не допз скается. Это условие обязательно при выполнении всех известных способов дифференциации. Перед посевом в пробирках расплавляют на водяной бане, остужают до

50°С и содержат при этой температуре в процессе работы. В стерильных условиях в каждую пробирку добавляют 0,5 мл аминопептида и 0,5 мл 3-миллиардной взвеси двухсуточной культуры бруцелл в 1 мл физиологического раствора по стандарту мугности для бруцелл. Содержимое пробирки тщательно перемешивают. Для исключения случаргных погрешностей каждую исследуемую культуру засевают не менее чем па 3 пробирки среды. Для посева наряду с эталонными штаммами (Вг. melitensis 16М, Вг. abortus 544, Вг. suis 1330, Вг. neotomae 62/2 Вг. cauis 1066, Вг. ovis 63/290) используют культуры бруцелл, выделенные от людей и от животных. После посева пробирки оставляют при комнатной температуре до застывания агара, затем запаивают пробками, смоченными расплавленным парафином. Посевы инкубируют при 37°С.

Учет результатов проводят через 20-24 ч и ежедневно в течение 14 суток.

Через 20-24 ч Brucella melitensis всех биотипов образуют ростовое кольцо толщиной 2-3 мм, расположенное на глубине среды в 1-2 мм от поверхности. В отличие от Вг. melitensis брзцеллы других видов через 20-24 ч растут в непосредственной близости к Поверхности, прорастая в глубину среды на 1-2 мм, ростового кольца на глубине не образуют. Через 1,5-2 суток различия в характере роста бруцелл сглаживаются и вновь окончательно формируются к 14 суткам. Это выражается в том, что только Вг. melitensis прорастают на глубину 20-25 мм, постепенно формируя второй ростовой СЛОЙ - кольцо осаждения в глубине среды, в то время как другие испытуемые виды бруцелл -ирорастают на глубину, зпачите льцо мепьфую (5-7мм) н не формируют второго ростового слоя - кольца осаждения.

Все испытуемые штаммы бруцелл .параллельно дифферепцируют стандартными методами. Результаты идентификации Вг. теHtensis предлагаемым способом и стандартными методами совпали в 100% случаев.

Предлагаемый способ идентификации бруцелл обеспечивает значительное упрощение н ускорение исследований. Доступен любой практической лаборатории.

Формула изобретения

Способ дифференциации бруцелл путем посева культуры бруцелл на питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением ВИДОБОЙ принадлежности бруцелл, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения дифференциации Brucella melitensis от других видов бруцелл, культуру бруцелл засевают на питательную среду, содержащую, г/л, мясопентонного б -льона:

Глутаминовая кислота 3,7-6,2

Двузамещенный фосфорно-кислый калий0,5-0,75

Лимонная кислота1,25-3,7

Сернокислый магний0,5-0,75

Железоаммониевый

цитрат0,05-0,075

Агар Дифко,1,25-3,7

Глицерин23,6-39,4

Аминопептид101,5-152,2

и определяют Brucella melitensis ПО наличию кольца на глубине 1-2 мм от поверхности среды через 20-24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20-25 мм на 14 сутки инкубирования.