Пример. К 2,5 мкгд -(5,б-диметилбензимидазолил)-гидрогенобамида) присутся вующего в 25 мкг сыро го материала, полученного при вьфащивании штамма хроматиум АТСС 17899 в присутствий 5,6-диметИлбензи:мидаэоЛа) в 3 мл этанола прибавляют раствор хлорида двухвалентного кобал та-57 (0,40 милликюри в 0,054 кобальта, что соответствует распрост раненности изотопов 82%) в 0,4 мл воды с величиной рН от 7,0 до 7,5 и раствор выдерживают при комнатной температуре в темноте, в течение 48 ч. К этой реакционной сМеси доба:В ляют 1 МП О,1%-ного водного раствора гидроксокобаламина, а затем 1 мл 1%-ног6 вес/об/водного раствора цианида калия, который нейьсредственно до ввода в реакционную смесь подкисляют соляной кислотой. Сырую реакционную смесь разделяют на две лорцйи и каждую порций выпаривают досуха. Эти пор1ции подвергают различным обработкам. .-. : - . , / - . .. Л аХ Смола ХАД-2;.- ,-:--::::;;-.,:Оставшийся после выпаривания осадок одной из порций растворяют в 1 мл воды и подвергают хроматографйческому разделению в колонке, йапол нейной смолой ХАД-2 (Ыберлит) с час тицами прймёрйо 1 б О , йебрганйчёскйё ионы отмывают водой. Цнанокобаламин элюируют вЪдйый раствором третичного бутанода. б), экстракция растворителем. Оставцшйся после выпаривания оса док даугой псфции растворяют в 3 мл воды и экс рагаруют 2 мл с1меси крёэола С четыр1ехзспорйстым yt-JiepqiibM fl сортйодении . С|тделёйн5т) Ьрганическую фазу промййают 1 мл воды, а затем экстрагируют 6 мл смёсй н-бутайола с четыреххлорйстым углеродом в соотйошении 2: J. - : .. . . Исследование пробиз яерврй и второй порций Путем электрофореза йа бумаге с испрльзовайием буферной смёсй, йклюяающей 1-молярную уксусную кислоту и фосфат, с величиной рН, равной 6,5, показало/ что в каждом случае выход цианоко(}аламина в реакционной cмedи срйтавляет 50 60% (а расчете по Кобальту-57). Для получения витамина меченйого 11 6балЬтом-58 процесс проводят в те}{ же условиях, но вместо хлористого 1ко6ал| та-57 применяют хлористый KO6aj bT-5i5. Пример 2. В опыте испол1 зуют с оофнсшение t 5 молекул предшествёйника витамина В-12 на атом кобаль та.- , -; -, : : -; - - 340 мкг-вС-(5,6-димвтилбенэи «дазо Лил)-П1дрогенобги«1да, содержгицихся в 3,4 мг сырого материала, растворяют в 2,0 МП воды, получают мутный оранжево-розовый г pacTieop. Прибавляют Ьаствор хлорида двухвалентного кобал
667145 та Со-57 (20 милликюри Ср-57 в 2,7 мкг кобальта, что отвечает распространенности изотопа в 82%) в 3,0 мл воды с величиной рН от 7/0 до 7,5, раствор выдерживают в герметизированном сосуде на водяной бане при температуре , в темноте в течение 2ч.. По истечении этого времени отбирают 5%-ную аликвоту раствора, добавляют к нему 1 мл водного О,1%-ного раствора носителя гидроксокобаламина и затем 1 мл 1%-ного водного раствора 11ианйда калия. Реакционную смесь хроматографируют на колонке со смолой ХАД-2 (как и в примере 1). Продукт эЛюируют 20%-йым водным раствором третичного бутанола и исследуют пос редством электрофореза (как и в примере 1). В результате электрофореза обнаружей ряд зон радиоактивности, включая острый пик/ точно йс отвётствуюций уэкой окрашенной в рбзовый цвет полоске цианокобаламина. На основаййи полученных данных вычисляют, что в реакционной смеси присутствует 2,0 милликюри цианокобаяамйна, Со-57, что соответствует 10%-ному выходу из расчета на со-57..:-. - ;.. : ; Реакционную смесь обрабатывают кАк это было описано выше/ без добавлёййя оксО-кобаламина. Выделяют свыше 1 милликюри цианокобаламина, Со-57 с 90%-йой степенью радиохимической чистоты (50%-ный выход из . расчета йаС6-57). Основной объем реакциоййой смеси подвергают обработке, как было описаЙо йьзшё, без добавления йосителя. Эта обработка заключается в выпаривании реакционной смеси досуха, растворёййй оставшегося помеле выпаривания осадка в 5 мл воды и в двухкратном экстрагировании 2 мл смеси крезола с четырегсхлористым углеродом в соотношений l-:i. Органическую фазу отделлот, прс 1ывают 1 мп воды, а затем экстрагируют 6. мл смеси н-бутанола с. четыреххлорйстым углеродом. Цианокббаламин активностью равной 1 мКи, Со-57, со стёпеныр радиохимической Чистоты 90%, после хроматографическрго разделения водного раствора подвергают регенерации, используя целлюлозу СМ и ДЕДЕ; ив качестве элйей а; воду (выход 5% в расчете на Кобальт-57). Это количество слишком мало/ чтоЬы можйо бЙЛо произвести определение удельной активности. Расчет показал/ что активность составл;яет 300 микрокюри на 1 мкг, §тот pnfciT можно повторить с приме нением хлористого кобальта-58 вместо хлористого кобальта-57/ что дает &нал6гичные результаты. Те формы витаМийа В-.12, в которых |(иайидиая группа заменена гидроксильj oft или-другой группой легко могут быть получены из цианокобаламина известным способом.
Очистка исходных материалов известными споеобами дает более высокие результаты.
Формула изобретения
1. Способ получения витамина меченного кобальтом-57 или кобальтом-58, от Л и ч а ю щ и и с я тем, 4Toet-(5,6-диметилбензимидазолил)-гидроРенрбамид подвергают взаимодей ствию с солями кобальта в инертном растворителе, при соотношении 0,250 молекулоС.-(5,6-диметилбензимид671456:
азолил)-гидрогенобамида ,на атом кобальта, при температуре 0-100 С, с последующим выделением целевого про ; дукта. - . ...; :
2.Способ ПОП.1, от ли ч а ю щи и с я тем, что процесс проводят
5 при рН 4-8.
3.Способ по П.1, отличающ и и с я тем, что процесс проводят
в темноте; |Источники информации, принятые во jQ внимание при экспертизе
1.I.Chort Biosynthesis of Radioactive Vitamine Containing Co, Science, 1950,111 , p. 601.
2.Bavrakat R.M. Assayof Vitamin :Bj in Blood, A simple method. Lancet
15
1961, 2, p. 25.
