Способ получения аминопроизводных тетрациклононана или их солей Советский патент 1985 года по МПК C07C211/19 A61K31/135 A61P31/12 C07C209/44 

Изобретение относится к способу получения новых химических соединений - аминопроизводных тетрациклононана общей формулы: V .где R - атом водорода или С -Сд-алА - 1,2 - этиленовая группа или группа формулы - CH-R, где Rj - атом водорода, С -С -алкил, циклогексил, фенил-С.-Ср-алкил, (-алкил фенил, 4 - С.,-С -алкоксифенил или 4-хлорфениЛ, причем при значении А - CH-R по крайней мере один из R и . Rj - не атом водорода, или их солей, обладакяцих антивирусным действием. Аминопроизводные тетрациклононана например 8-аминотетрацикло(4,3,0, ) нонан, обладают выраженным анти вирусным действием 1 . Однако данное соединение обладает недостаточно высокой функциональной активностью при низких концентрациях препарата, например соединение не оказьшало противовирусного действия в концентрации 50 мкг/мл. Известна реакция восстановления оксимов кетонов боргидридом натрия при нагревании в инертном органическом растворителе с образованием соот ветствующего амина C2J также реакции восстановления оксимов, амидов или нитрилов с помощью алюмогидрида лития или водородом в присутствии ро дия на окиси алюминия при нагревании в инертном органическом растворителе таком как низший спирт зТ. Цель изобретения - разработка сп соба получения новых аминопроизводных тетрациклононана, обладакщих по вышенш 1м антивирусным действием. Указанная цель достигается новыми химическими соединениями - амино производными тетрациклононана общей формулы (1) или их солями, . обладаю пщми противовирусным Действием. Указанные соединения получают сп ,собом, основанным на известных рекциях и заключаю1демся в том, что Тетрациклононана общейроизводноеормулы: Б-л Ki где R имеет указанное значение; В метиленовая группа или простая связь цианогруппа, карбамоильная группа или группа общей формулы:где R имеет указанное значени, R - атом водорода, оксигруппа или группа формулы №i-Y, где Y - атом брома или иода, причем при значении В-метиленовая группа, R2 - атом водорода, а при значении В - простая связь по крайней мере один из R и Rj - не атом водорода, подвергают восстановлению боргидридом натрия в присутствии хлористого кобальта или хлористого никеля или водородом в присутствии родия на окиси алюминия при значении В - простая связь, X группа указанной формулы (III), где R2 метил и RJ - оксигруппа, или алюмогидридом лития с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли. Пример 1. 8-(2-аминоэтил) тетраиикло(4,3,0,,) нонана гидрохлорид. Из магния (12,0 г) и йодистого метила (71,0 г) в эфире (400 мп) получают раствор метилмагнийиодида. Эфир отгоняют и заменяют сухим толуолом (300 мл). К раствору толуола добавляют 8-цианЬтетрацикло(4,3,0,. 02|,)нонан (58,0 г), которьй по данным газожидкостной хроматографии является смесью экзр- и эндоизомеров в соотношении 3,6:1. Смесьнагревают с обратным холодильником до тех пор, пока не вступит в реакцию весь нитрил (около 6 ч). Этот раствор охлаж,т;ают до комнатной температуры и к неьгу медленно при перемешивании добавдиют суспензию

3

алюмогидр1ща лнтия (7,6 г) в безводном эфире (200 мл).

Смесь нагревают в течение 6 ч, охлаждают до комнатной температуры, а избыток алюмогидрида лития разлагают осторожным добавлением воды каплями при сильном перемешивании. Затем добавляют разбавленный раство едкого натра (15 мл pacTieopa 18,6 г едкого натра в 50 мл воды) для разложения комплекса Гриньяра. Осадок затем отфильтровывают и тщательно промывают эфиром. Объединенные жидкости и промывные части высушивают над безводным карбонатом калия, отфильтровывают и обрабатывают избыт914

ком газообразного х-пористого водоро да. Таким образом получают осадок 8-(2-аминоэтил)тетрацикло-(4,,, ОО нонана хлоргидрата, который отфильтровыва от, промывают эфиром, высушивают и перекристаллизовьшают из изопропилового спирта. Продукт имеет т.пл. 265,5--266 С. Получают 33,4 г целевого продукта (выход

41,8%),

Пример 2. В условиях, описанных в примере 1, с использованием соответствунщего галоидного алкила, галоидного арилалкила или галоидарила, получают следующие соединения (см.табл.1).

Таблица 1

СН- ЗНг-НХ R

Способ получения аминопроиэводных тетрациклоионана общей формулы Т: V. х A-NHz R. где Кд - атом водорода или С -С -алкял, А - 1,2 - этиленовая группа или группа формулы -CH-R2, где Rj - атом водорода, С -С -алкил, диклогексил, фенил-С -С -алкил, 4-С -С -алкилфешш, 4-Ci-С (.-алкоксифенил или 4 хлорфенил,причем при значении A-CH-R, по крайней мере один кз R и Rj - не атом водорода. или их солей, отличающийс я тем, что, прризнодное тетрациклононана общей формулы II: где R имеет указанное значение, - метиленовая группа или простая связь, X - цианогруппа, карбамоильная группа или группа общей формулы III: О) RrCl-N-R где R2 имеет указанное значение Rg - атом водорода, оксигруппа или группа формулы Mg-Y, где Y - атом брома или иода, причем при значении В О1 метиленовая группа, R2 О) атом водорода, а при значеся нии В - простая связь по со крайней мере один из R и R2 - не атом водорода, подвергают восстановлению боргидридом натрия в присутствии хлористого кобальта или хлористого никеля, или водородом в присутствии родия на окиси алюминия при значении В - простая связь, X - группа указанной формулы (ill), где R - метил и Rj - оксигрупца, или алюмогидридом лития с последукишм вьщелением целевого продукта в свободном виде или в виде соли.

СНгСНзХлор Йодистый этил СН2СН2СНз Бензоат Бромистый пропил Бромистый L-пропилБромистый 191клог гексил Бромистьм фенилпропилБромбензоЛ| ;h-хлорбромбензол О/ Jl

п-броманизол-/QN Q j Бензоат188-19126,5

П-бром толуол {ОУ- СН,Бензоат217-21918,5

Пример 3. Экзо-8-(1-амино-Экзо-8-(1-оксиминоэтил)|тетрацнкло

этил)тетрацикло(4,3,0,02.+,0з.т) иона- (4,3,0,02, ,0.-)нонан (3,0 г) растворяна гидрохлорид.ют в сухом эфире (20 мл) при комнат- Бензоат Бензоат Бензоат Бензоат 229-231 185-187 175-178 114-116 148-150 158-160 198-201 ной температуре и добавляют каплями с перемешиванием к нагреваемой с обратным холодильником суспензии алюмп гидрида лития (1,0 г) в сухом эфире (50 мл). Когда добавление заканчивают, смесь нагревают еще в течение 16 ч, охлаждают и осторожно каплями добавляют воду для разложения избытка алюмигидрида лития. Осадок отфиль тровывают от органической фазы и тща тёльно пpo Iывaют эфиром. Органическу фазу и промывку соединяют, высушиваю с использованием безводного поташа, фильтруют и обрабатьшают избытком сухого хлористого водорода в эфире. Таким образом получают осад(31 зкзо-8 - (1 -аминоэтил )тетракцикло (4,3,0,, 0. ).нонана хлоргидрата, которьш затем перекристаллизовьтают из изопропилового спирта. Перекристаллизованный продукт имеет т.пл. 254-255°С. Получают 1,1 г целевого продукта (выход 32,5%). Экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло (jSjOjO.O/O ноиан, используемьй в качестве исходного материала, полу чают следующим образом. 8-цианотетрацикло (4,3,0, , ) нонан (29 г) обрабатьгоают метилмагнийиодидом, полученным из магния (6,0 F) и йодистого метила (35,5 г) Этот раствор охлаждают ниже 5С на ледяной бане и добавляют холодный раствор ледяной уксусной кислоты (25 мл) в воде (25 мл) каплями с перемешиванием и охлаждением. Температуру поддерживают не выше . К густой суспензии добавляют воду (150 мл) и перемешивание продолжают, пока твердые элементы не растворятся Органическую фазу отделяют, промывают три раза водой (50 №i), высушивают с использованием сульфата магния и фильтруют. Толуол упаривают на роторном испарителе и оставшееся Mac ло перегоняют в вакууме. Получают смесь экзо- и зндо-В-ацетилтетрацикло(3,4,3,0,021%0зл) нонана, т.кип. 66€/0,5 мм. Указанное а детнльное производное (16,2 г) растворяют в этаноле (60мл), к ргаствору добавляют хлоргйдрат гидроксиламина (7,6 г), безводный ацетат натрия (Т2,3 г). Смесь нагревают с обратньии холодильннком и небольши- 5 ми порциями добавляют воду, пока твердые частицы не растворятся окончательно. Кипячение продолжают в тeчение 21 ч, а затем раствор охлажда-i ют на ледяной бане. Кристаллическое белое, твердое вещество отфильтровывают. Перекристаллизация из смеси этанола и воды (70:30) дает экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетра1хякло(4, 3,0,0i, Оз,)нонан, т.пл. 103-104 С. . П р и .м е р 4. 8-1щанотетрацикло(4,3,0,,0 Ононан получают способом Хол.аа (1960). Он представляет из себя смесь экзо- и эндо-изомеров, как показьшает газожидкостная хроматография. Изомеры разделяют газожидкостной хроматографией и получают чистый образец экзо-изомера. Однако эндоизомер получают только с 80%-ной чистотой. Раздельное восстановление их в эфире при помощи алюмогидрида лития дает чистьй экзо-8-аминометилтетрацикло(4,3,0,0.,) нонан, т.пл. хлоргидрата 270-271С и 80%ной чистоты эндо-изомер, т.пл. хлоргидрата 274-276 0. Пример 5. Экзо-8-аминометил-эндо-8-метилтетрацикло ( 4,3,0, , Оз,7)нонана гидрохлорид. Экзо-8-циано-эндо-8-метилтетрацикло(4,3,0,0,05)нонан (2,0 г) медл:;нно добавляют к суспензии алюмогидрида лития (0,6 г) в дяэтиловом эфире (25 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 16 ч. Избыток восстанавливающего агента Разрушают осторожным добавлением вотды. Бельй осадок отфильтровывают, хорошо промывают эфиром, промывки и фильтрат объединяют, высушивают с использованием безводного поташа и обрабатьшают избытком хлористого водорода, растворенного в эфире. Получают экзо-8-амин.ометил-эндо-8-метилтетрацикло ( А, 3,0, , О . ) нонана хлоргидрат, который после перекристаллизации из изопропанола/этилацетата 425:75 об/об) имеет т.пл, 245-24бС. Получают 0,7 г целевого продукта (выход 26,9%). Экзo-8-циaнo-эндo-8-мeтилтe paциклo(4,3,0,02|%0) нонан, испольэ(уемьй в качестве исходного материала, может быть получен способом Шраузера и Р.Глокнера. Для получения чистого материала необходима интенсивная очистка капиллярной хроматографией, Газожидкостная хроматография показала 95% экзо-нитрнла, 5% эндо-нитрида. Пример 6. Эндо-8-аминометил -экзо-8-мет11лтетрацикло(А,3,0,, О«)нонана гидрохлорид. Эндо-8-циано-экзо-8-метилтетрацикло-(4,3,0,02.,0310нонан (80% эндо -циано-иэомер, 500 мг) восстанавлива ют алюмогидридом лития (0,5 г) аналогично примеру 5. Получают эндо-8-аминометил-экзо-8-метш1Тётрацикло-(4,3,0,,) нонана хлоргидрат (80% эндоаминометил, 20% экзо-аминометил), т.пл. 222°С, Получают 0,2 г целевого продукте, (выход 31,9%). Эндо-нитриловый изомер, используе мый в качестве исходного материала, получен следугацим образом. Бутиллитий (15,4 мл 1,43-10ЗМ раствора в тетрагидрофуране 0,022 М) медленно добавляют к раствору диизопропиламина (2,22 г, 0,22 м) в сухом . тетрагидрофуране (10 мл) под азотом при 5-10с и перемешивают в течение 15 мин. Этот раствор охлаждают до и к нему добавляют 8-диано-тет рацикло(4,3,0,0%05) нонан (3,045 г 0,022 М), растворенный в гексаметаноле (4,5 г). Смесь перемешивают 1 ч .при . Раствор йодистого метила (3,55 г, 0,025 м) в сухом тетрагидрофуране (5 мл) добавляют каплями также при , смесь перемешивают в течение 1,5 ч при этой температуре а затем в течение 16 ч при комнатной температуре. Добавляют воду (20 мл), тетрагидрофуран упаривают, а оставшу юся смесь экстрагируют хлороформом (3-15 мп). Экстракт высушивают с использованием безводного сульфата магния, фильтруют, растворитель отгонякуг. Остаток хромат о графируют на силикагеле с толуолом в качестве элюента Получают эндо-8-циано-экзо-8-метилтетрациклб(4,3,0,02,03.0 нонан (80% эндо-циано-изомера, 20% экзо-цианогизомера по данным гязожидкостной хроматографии), т.пл 118-120 С/18 мм Пример 7. 8-(2-аминозтил) тетрацикло(4,3,0,,) нонана гид рохлорид. 8-цианометкптетрацикло (4,3,0, , ) нонан (0,5 г) восстанавливают алюмогидРИДОМ лития (0,5 г) в условиях, описанных в примере 5. Получают 8-(2-аминоэтйл)тетрацикло (4,3,0,0., О | )яонана хлоригидрат, т.пл. 252254 С. Получают 0,35 г целевого продукта (выход 55,8%). 8-цианометилтётрацикло(4,3,0,0, О )яонан, используемьв в качестве исходного материала, получен следукяцим образом.. . К раствору 8-1щанотетрацикло(4,3, 0,,0)нонана (87 г) в четьфеххлористом углероде (600 мп) добавляют пятихлористый фосфор (168 г). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 60 ч, охлаждают и выливают в смесь колотого льда и воды (1 л). Смесь перемешивают в течение 30 мин и отделяют органический слой. Его промывают 10%-ным водным раствором карбоната натрия (200 мл), насьпценным соляным раствором (ЮОкп), а затем высушивают-с использованием безводного карбоната калия. Фильтрат затем высушивают для удаления растворителя, а з,атем перегоняют для получения 8-циано-8-хлортетрацикло(4, 3,0,02,%03О нонана, т.кип. 136140С/20 мм, выход 83%. Полученный хлорнитрил (13,45 г) растворяют в этаноле (60 мп), охлаж-т. дают до на льду и медленно добавляют раствор гидроокиси натрия (2,4 г) в воде (20 мл) с перемешиванием и охлаждением. Перекись водорода (2 7 МП 29 вес.%/об раствора в воде) добавляют каплями и получают плотный бельп4 осадок. Эту смесь перемешивают в течение 3 ч при 0С, а затем 2 ч при комнатной температуре. Бельй осадок отфильтровывают и сохраняют. Фильтрат упаривают для удаления этанола, а водный остаток экстрагируют хлороформом (100 мп). Органическую фазу высушивают, фильтруют и упаривают до получения белого твердого вещества. Это твердое вещество и белый осадок объединяют, перекристаллизовьшают из этанола и получают 8-хлор- 8-карбамоилтетра-цикло(4,3,0,0,0з,) нонан, т.пл. 124-126С. Этот хпорамид (19,75 г) нагревают с обратным холодильником под азотом в смеси гидроокиси калия (16,8 г) и ч-пропанола (200 мл) в течение 40 мин. Пропанол вьшаривают, а остаток распределяют между эфиром (100 мп) и водой (100 мл). Органическую фазу промывают насьпценюлм соляным раствором (50 мл),высушивают с использованием безводного поташа, фильтруют, растворитель упаривают. Остаточное масло перегоняют под вакуy юм до получения 8-оксотетрацикло , 4,3,0,,0) нонана, т.к.ип. 12i130°С/29 мм. 911 Гидрид натрия (2,4 г, промытый от масла) обрабатьгоают диметилсульфоксидом (100 мл) и подогревают под азотом до УЗ-бО С в течение 35 мин. Смесь затем охлаждают до комнатной температуры и каплями добавляют раствор диэтилцианометилфосфоната (17,7 г) в сухом тетрагидрофуране. Смесь перемешивают в течение 30 мин. Раствор указанного кетона (13,4 г) в смеси диметилсульфоксиДа .(100 мл) и тетрагидрофурана (100 мл), затем Добавляют каплями и перемешивают в :Течение 16 ч при комнатной температуре. Продукт выпивают в воду (1000 мл и смесь экстрагируют эфиром (5-100 мл) Объединенные экстракты промывают насьвценным соляным раствором, высушивают с. использованием карбоната калия, фильтруют и упаривают. При перегонке под вакуумом получают б-гщанометилентетрацикло(4,3,0, 02,,Оз.О нонан, т.кип. Г38-140°С/ /18 мм. Этот неиасыщенньй нитрил (6,17 г) восстанавливают в атмосфере водорода при комнатной температуре и давлении в присутствии 5 вес.%/вес палладия на угле (1,7 г) в растворе этанола (200 мл). Когда водород больше не. абсорбируется, продукт отфильтровывают и растворитель упаривают для получения 8-Щ1анометилтетрацикло(4,3,0, ,)нонана, который анализируют масс/спектром, , инфракрасным спектром и ЯМР-спектром ,этот продукт затем используют без дальнейшей очис тки. Пример 8. Эндо-8-(1-аминоэтил)тетрацикло(4,3,0, ,0)нонана гидрохлорид. . . К раствору эндо-8-(1-оксиминоэтил -тетрацикло(4,3,0, ,03)нонана (1,0) в этаноле (50 мл) добавляют 5 вес.%/вес родий на окиси алюминия (0,3 г).Смеси гидрируют в автоклаве при 60-65С в течение 24 ч при давлении 50 атм водорода,фильтрация продук та с последующим осторожным выпарива нием растворителя дает эндо-8-(1-ами ноэтил)тетрацикло(4,3,0,,) нонан в виде бледно-желтого масла.Хлоргид рат, т.пл. 265-266,5С, при перекрис таллизации из изопропанола.получают .путем добавления эфирного раствора хлористого водорода к эфирному раствору свободного основания. Эндо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло (4, 3,0, ,0)нонан, используемьй 1 в качестве исходного материала, получен с.педу1ощим образом. После получения экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло(4, 3,0,0-. ,00 нонана аналогично примеру 3 остаются реакционные ж щкocти, которые содержат и экзо- и эндо-оксиизомеры. Упаривание этанола под вакуумом из раствора приводит к осазвдению смешанньгк изомеров в виде липкого твердого элемента. Пробы этого материала (по 2,0 г каждый) подавались для сухой капиллярной хроматографии на 1,0 кг силикагеля (кизельгель 60,0; 0,630,2 мм размер частиц) с использованием смеси толуола и этилацетата в соотношении 9:1 (вес/вес). Положение разделенных материалов на колонке определяют отбором проб,- после чего следует тонкослойная хроматография. Зоны колонки, содержащие чистьй экзо- и чистый эндо-изомеры, вырезались и промывались отдельно этилацетатом. Выпаривание элюатов дает общий выход чистых изомеров приблизительно 1,2 г, но действительньм выход экзо- составляет от 0,8-0,2 г, а эндо- 0,4-1,0 г в зависимости от соотношения изомеров образца, подаваемого в . После разделения указанным способом экзо-изомер имеет т.пл. 103ЮЗ С, а эндо-изомер - 80-83°С. . Пример 9. Экзо-8-(1-аминоэтил ) тетрацикло- (4,3,0,,0) нонана хлоргидрат, получаемый по примеру 3, является смесью двух диастереоизоме.ров, казвдый из которых в свою очередь является смесью двух оптических изомеров. То же самое касается и эндо-изомера примера 8. Эти диастереоизомеры определяются как отдельные пятна на тонкослойной хроматографии на силикагелевых Пластинах с использованием какой-либо из двух систем растворителя. Пятна можно увидеть в системе растворителя 1 либо при помощи иодового лара или распрыскивания раствора церийаммоний нитрата в серной кислоте, после чего следует нагревание, либо в системе 2 при помощи 1 вес.%/об нингидрида в бутаноле. Систе.ма 1: толуол/ /этан6л/этилацетат7а 1миак (уд. вес. 0,880)6:4:2:0,25 об/об. Система 2 : ацетон/аммиак (уд.вес.О,880) 40: :0,5 об/об (см.табл.2). 11 г а б л н ц а 4 диастереомера могут также опр деляться по спектрам резона са от хирального атома боковой цеп в то время как определение относительного содержания каждого изомер можно определить по высоте пика. Х мические показатели сдвига каждого диастререомера меняются в зависимо ти от концентрации и типа соли, но смесь основных хлоргидратов, полученная в примере 4, имеет следующ показатели см.табл.3). Т а б л и тг а 3 Химический Показатели сдвиг от тет раметилсилан мил.доли Разделение экзо-диастереомеров достигают следующим образом. К раствору экзо-8-.(1-аминоэтил)-тетрацикло(4,3,0,0), )конана (32,2 г) в сухом эфире (250 мл) добавляют раствор L -() винной кисло ты (7,16 г, €,25 моль) в смеси эта ла (100 мл) и сухого эфира (300мл) Осадок винной соли отфильтровывают промьшают сухим эфиром и подвергают 9112 фракшюнальной перекристаллизации из этанола пять раз. Конечным продуктом являлся чистый тартрат верхнего экзо-пятна (9,0 г), которьй превращают через основание в хлоргрщрат (4,3 г), т.пл. которого составляет 257-259С. Хотя не ошадалось, что этим способом можно осуществить отделение одного из оптически активных изомеров деастереомера, указанньй продукт показал 1гулевое вращение при проверке в поляриметре, а спектр ЯМР с использованием оптически активного реагента показал, что эта смесь равных количеств оптических изомеров. Добавление дальнейшей порции Ь(+)-винной кислоты (7,15 г, 0,25 моль) к жидкости из первого осалэдения приводит к получению липкого осадка, которьй после двух фракциоиальных перекристаллизации из этанола с последующей конверсией до хлоргидрата дает чистьй материал нижнего экзо-пятна. Перекристаллизация этого хлора хлоргидрата из этанола дает очень мальй выход первой фракции (0,12 г) и остаток (1,74 г). Первая фракция оказалась оптически активной(oi )° +22°, а согласно спектру ЯМР с оптически активным реагентом является чистым оптическим изомером. Отделение нижнего экзо-пятна достигают путем переведения аьвша в основание из всех жидкостей, фракциональной перекристаллизации (всего 13,3 г), растворения в сухом эфире (100 мп) и добавления раствора D-(-)-миндальной кислоты (6,2 jr, 0,25 моль) в смеси этанола (10 мл) и сухого эфира (50 мгг). Осажденную соль (14,6 г) фракционно кристаллизуют дважды из этилацетата, переводят в хлоргидрат и перекристаллизовывают из этанола до получения чистого хлоргидрата нижнего экзо-пятна (3,0 г), т.гш. 266-268С. Этот продукт имеет нулевое вращение и представляет из себя, согласно ЯМР с использованием оптически активного реагента, смесь оптических изомеров. АналогиЧиьй способ отделения применяют с использованием эндо-аминового основания (10,8 г), получаемого в примере 8. Ь-(+)-тартрат фракционально кристаллизуют пять раз из изопропанола до получения чистого тартрата моногидрата верхнего пятна

(1,16 г), т.пл. 195-205С. Остатки переводят обратно в основание. D-(-)манделат получают в эфире, содержащем немного спирта. Было получено три фракции. Фракцию 1 фракционально кристаллизуют 3 раза из этилацетата до получения чистого манделата верхнего эндо-пятна, т.шт. 191192 С (0,38 г), в то время как фракции 2 и 3 соединяют и перекристаллизовьшают 4 раза из этилацетата до получения чистого манделата нижнего эндо-пятна (1,1 г), т.пл. 166-167°С. Пример 10. Раствор экзо-8-(1 -оксиминоэтил)тетрацикло (4,3,0,0. ) нонана, полученного как в последней части примера 3, в смеси пиридина (35 мл) и уксусного ангидрида (30 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 48 ч. Растворитель удаляют под вакуумом, а черньй осадок взбалтывают с эфиром (порции 3-50 мл). Фильтрацией удаляют черное твердое вещество, а фильтрат экстрагируют водным 1(5 вес.%/об раствором бикарбоната натрия (3-20 мл). Органическую фазу высушивают и упаривают что дает коричневое масло (4,3 г), которое затем хроматографируют на си.ликагепе с использованием системы толуол/эфир (9i1 об/об) в качестве элюента. Фракции, содержащие материал пятна с ,36 на тонкослойных пластинах силикагеля, которые проявляют в системе толуол/этилацетат (9: :1 об/об), объединяют и упаривают, оставшееся масло кристаллизуют из петролейного эфира, т.кип. 40-60 0. Таким образом получают шероховатое твердое вещество (0,618 г), которое затем сублимируют до получения Е-изомера-8-(1-диацетиламино)-этилендентётрацикло (4,3,0,02,) нонана (0,60 г) (конфигурация, интерпретированная с помощью Я№). Упаривание петролейного эфира из маточного раствора дает бесцветное масло, iJoTOpoe перегоняют под вакуумом для получени z-изомера 8-(1-диацетиламино)этилидететращ1кло (4,3,0,,) нонана, т.т. бЗ-УЗ С (0,) (концентрация, интерпретированная с помощью ЯМР).

Е-изомер (377 мг) гидрируют в присутствии окиси платины (100 мг) в этаноле (15 мл) при комнатной температуре и давлении. Когда теоретическое количество водорода абсорбируется реакционную смесь Фильтруют и растворитель упаривают, оставляя бесцветную смолу. Экстрагирование ее кипящим петролейным эфиром (т.кип. 60ЗО С) и охлаждение экстрактов дают аморфное белое твердое вещество, т.пл.112-128 0, которое является 8-(1-ацетиламиноэсил)тетрацикло(4,3,0, , 0 ) нонаном.

Этот продукт подвергают гидролизу концентрированным спиртовым едким ка;ш с охлаждением в течение 36 ч. После упаривания этанола, разбавления водой, экстрагирования эфиром, высушивания и осаждения эфирным раствором хлористого водорода получают 8-(1-:, -аминоэтил)тетрацикло(4, 3,0,,0)ч, нонана хлоргидрат. Этот продукт по данным тонкослойной хроматографии является смесью диастереомера нижнего экзо-пятна и диастереомера нижнего э що-пятна. Получают 0,05 г целевого продукта (выход 1,1%).

Этот продукт получен цис-гидрированием двойной связи известной стереохимии, позволяет интерпретировать абсолютную конфигурацию этих двух диастереоизомеров. Это в свою очередь позволяет интерпретацию абсолютной конфигурации диастереоизомерор верхнего экзо-пятна и верхнего эндо-пятна. Эти интерпретации представлены в табл.4.

Таблица 4

ш

СНСНз

NH,

Абсолютная кон4 1ГураДиастереоодяизомер

8 S, 10 S и 8 R, 10 R

8 S, 10 R и 8 R, 10 S

8 R 10 R и 8 S, to S

8 R 10 R и 8 S, 10 R П p и ,м e p 11. Экзо-8-( 1-аминоэтнл)тетрацикло(,3,0,02. ,03-) нонана гидрохлорнд. Обрабатывают раствор 1,77 г экзо-8-(1-оксиминоэтил)-тетрадикло(4,3, 0,02-,0)-нонана и 4,76 г гексагидрата- хлорида кобальта в 100 мл этано ла при комнатной температуре 3,8 г боргидрида натрия маленькими порциями, при перемешивании и охлаждении, чтобы сохранить температуру ниже 20°С4 После окончания прибавления смесь 2 ч перемешивают при комнатной температуре, затем 2 ч кипятят с обратным холодильником. Черную суспензию фильтруют через диатомитовую земпю и бесцветньй фильтрат упаривают в вакууме, остается липкое твердое вещество. Его распределяют между эфиром и 2 Н раствором гидроокиси натрия. Органическую фазу промывают насьоценным рассолом, сушат над безводным карбонатом калия, фильтруют и обрабатьшают избытком эфирного раствора хлористого водорода. Полученный бельй осадок солянокислого экзо-8-(1 -аминоэтил)-тетрацикло(4,3,0, , -нонйна отфильтровывают, промывают эфиром и сушат. По данным тонкослойной хроматографии он является чистым имеет величины Rf для двух экзо-диас тереоизомеров, как приведенные в при мере. 6. Получагегг 1,59 г целевого продукта (выход 79,0%). Пример 12. Экзо-8-(1-аминоэтил)тетрацикло (4,3,0,0,0) нонана гидрохлорид. Используют методику и загрузку примера 7 с тем исключением, что гек сагидрат хлорида кобальта заменяют гексагидратом хлорида никеля и всю реакцию проводят в течение 20 ч при комнатной температуре. Первоначальный солянокислый продукт показывает следы примесей, которые удаляют кристал лизацией из изопропанола. Этот конеч ный продукт является чистым по данным тонкослойной хроматографии и име ет т.пл. 26(5-267°С. Антивирусное действие предлагаемых соединений изучают следующим образом.. Трахею 3-месячного хорька вскрывают с использованием асептических методов н разрезают поперечно на кольда ткани. Получают 30-40 колец из одной трахеи. Каждое кольцо помещают в стерильную стеклянную испытательную 1 9116 трубку (9-1 см) я погружают в 0,5 м.п стерильной поддерживающей среды, содержащей соответствующую концентрацию испытываемого соединения. Конечные концентрации соединения составляют 45, 9, 1,8, 0,4, 0,08 мкг/мл и ноль. Для каждой концентрации используют три трубки. Трубки выдерзкивают в течении суток при 37 С в опоре, которая мягко вращается, чтобы погружать каждое трахейное кольцо в питательную среду. На следукяцее утро каждое кольцо осматривают под микроскопом, чтобы определить приблизительно, какое количество ресничек на внутреннем люмене кольца еще колеблется. Результат следукщий: 1. 25%i . OcNfOTp показывает, является ли соединение однотоксичным по отношению к ресничатому эпителию. Затем трубку заражают путем добавления стандартизированного количества вируса гриппа и вьщерживают в течение 2 ч при . В течение этого времени вирус адсорбируется на клетках и проникает в клетки каждого кольца и начинается про ;есс заражения. После 2 ч содержащие вирус ждцкости сливаются,, кольца осторожно промьгоают свежей средой, а затем добавляется 0,5 мл среды, содержащее соединение. Затем их выдерживают при , как и предьщущие, до последукщего утра, когда происходит второй осмотр ресничатого эпителия. Результаты проверки незаряжен-, ной части показывают токсичность препарата, результаты проверки зараженной части без препарата показьшают степень поврезкдения, вызванного вирусом, и результаты проверки обработки препаратом показывают степень защищенности. Среда удаляется из каждой трубки и объединяется со средой из двухдругих трубок идентичной концентрации препарата. Объединенные пробы обрабатьюают 0,3 мл стерильного бьмьего альбумина плазмы, замораживаются при температуре - и хранят для дальнейшего титрования вируса. Свежий раствор препарата добавляют к каждому комплекту трех трубок и продолжают, выдерживание. казанный процесс повторяют еще три аза, так что из казвдого раствора репарата и контрольных частей полу чается всего четыре порции среды. 171 Образцы замороженной среды оттаивают до и вирус, который они содержат, титруют в первичные почечные клетки теленка с использованием уже известного количественного способа гемоадсорбироваш1Я И.Б.Финтср. Поэто му ЯБляется возможным сравнить и визуально и количественно действие испытываемого соединения на рост вируса гриппа в кусочках трахейного рееничатого эпителия. Все соединения, описангше в примерах, являются активными в этом тек сте против вирусов гриппа А и А,;, а некоторые соедине1шя являются также активными гротив вируса гриппа Ар. Таким образом, зсе соединения являются активными в этом испытании против вируса гриппа А НК в концентрации 5 мкг/ьш или ниже и имеют соотношение токсичность (активность от 9 до более, чем 550). Известное соединение 8-аминотетрацикло(4,3,0, 0. ,0-|)ионан не является активным относительно вируса гриппа при концентрации 50 мкг/мл (см.табл.1). Испытание вчруса гриппа на мышах проводят следуюцим образом. Две группы по 10 свободных от патогена самцов белых мышей весом 2022 г каждый, стоматически вводят испытьгоаемое .соединение, одной группе 125 мг/кг (2,5 мг/мышь), а другой группе 50 мг/кг (1,0 мг/мышь). Третья группа из 10 мышей не обрабатыва ется соединением и используется в ка честве контрольной группы. Спустя

K-CH-NHz

.0,36 СНл

R-CH-NHz

I3

0,36

CHj

44

ио

44

7110 118 два часа мышей помещают индивидуально в аэрозольную камеру и в течение 0,5 ч подвергают аэрозолированию вирусом гриппа. Час спустя после заражения, а затем 4 ч спустя после заражения мьшги в первых группах получают стоматически дозу испытуемого . вещества. На следующий день те же мыши получают испьггуёмое соединение в 9 ч утра, в 13 ч и в 17 ч. Спустя 8 ч после зараже1тоя мьшJeй убивают., а легкие вьфезают. Легкие из каждой отдельной группы соединяют в две группы по пять, и после осмотра повреждеНИИ на поверхности легких, каждая из 6 групп гомогенизируется в смесителе со стерильным физиологическим раствором Ханке а. Гомс генаты центрифугируют для удаления обрезков ткани, а расштьшшуюся часть помещают в бутылку и разбавляют 9 частями бычье Го альбумина плазмы. Разбавленные вспльгешие части затем хранят при температуре до тех пор,пока концентрация вируса может бытьана.пизирована количественным способом гемоадсорбции, описанным выше.Таким образом, рост ;вируса в легкихживотных, обработанных препаратом,сравнивают с ростом I вируса в Mbouax,не обработанных препаратом. В мьшшх, получивших описываемые соединения, не замечается явных признаков токсичности. Терапевтические свойства предлагаемых соединений представлены в табл.5. Таблица 5

19 Пример, Соединение Минимальная активная концентра 191Я, MKr/tm

0,36

0,36

0,36

0,36

6

0,36

7

Нет активности при 50 мкг/мп

1156591

20 Продолжение табл. 5 Ток

110

63

63

63 63

Нет токсичности при 50 мкг/мл Токсичность я Активность Минимальная концентрация, мкг/мп