Способ получения @ -глицерофосфата,меченого фосфором-32 Советский патент 1985 года по МПК C07F9/09 

Id)

ГС

ч1 Изобретение относится к области химии фосфорорганических соединений а именно к способу получения о -глицерофосфата, меченого фосфором-32, являющегося биологически активным веществом, играющим центральную рол 9 биосинтезе соединений, ведущих к образованию глицерофосфатидов в клетках эу-и прокариотов. Известен способ получения о -глицерофосфата, меченого фосфором-32 фосфорилированием of ,С-изопропили- денглицерина, меченой хлорокисыЬ фосфора в присутствии тщательно измельченной гвдроокиси бария и сухог хинолина с последующим нагреванием бариевой соли 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-метилфосфорной Р кислоты с разбавленной серной кислотой lj. Недостатками известного способа получения 0 -глицерофосфата, меченог фосфором-32, являются: многостадийность синтеза промежуточных меченых продуктов, необходимость использова ния специальной аппаратуры, позволя щей проводить все операции процесса без. ,нарущения герметичности системы необходимость очистки промежуточных .продуктов. Известный способ не позволяет получать целевой продукт с высокой удельной активностью, так как она не может быть вьше удельной активно ти меченой Н, кислоты, из которой получен исходный реагент хлорокись фосфора, меченая фосфором-32 2. Целью изобретения является упрощение процесса и повьшение удельной активности целевого продукта, Поставленная цель достигается описьшаемым способом получения (-гл церофосфата, меченого фосфором-32, заключающимся в том, что смесь четыреххлористого углерода, о(, -йзопропилиденглицерина и пиридина, взя тых в мольном соотношении (100100,13):(0,161-0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 728 суток. Отлшштельным признаком способа является то, что смесь четьфеххлори того фосфора, .d,-изопропилиденглиц рина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100-100,13):(О,161-0,03):0,02, облучают быстрыми нейт ронами в течение 7-28 суток. Облучение проводят на Ро-Ве-источннке быстрых нейтронов интенсивностью 4,0-10 нейтр./с в стеклянных колбах или ампулах при температуре . Идентификацию, вьщеление и очистку целевого продукта осуществляют с помощью метода бумажной хроматографии Средняя энергия быстрых нейтронов на применяемом Ро-Ве-источнике составляет v- 4 Мзв. Предлагаемый способ основан на совмещении реакции получения.атомов отдачи фосфора-32 по ядерному процессу (n,d)P и химических реакций атомов отдачи Р с молекулами системы ССе -СН -СН-СН ОН с образоваС(СНз)2 нием целевого продукта. Поскольку указанная ядерная реакция протекает с изменением порядкового номера элемента, радиоактивный фосфор получается в состоянии без носителя. Это дает возможность получать конечные препараты фосфора-32 с удельной активностью, близкой к предельно возможной. Общая активность целевого продукта, вьщеленная посредством тонкослойной хроматографии из смеси полученных при облучении мишени меченых фосфором-32 соединений, составляет или 10 5-10 - 2,54.0 расп./мин 5 10 г по весу. Выход целевого меченого продукта в абсолютном измерении в данном случае определяется только его радиоак-; тивностью, т.е. количеством распада; в единицу времени. Чистота и индивидуальность меченого фосфором-32 е|(-глицерофосфата подтверждена данными тщательного хроматографического анализа на бумаге. Пример 1. Смесь 400 г (2,8 I .моль) СС,1 г (0,0025 г.моль) И,й-изопропилиденглицерина и 0,05 г (0,0006 г-моль) пиридина в стеклянной колбе облучают на. Ро-Ве-источнике нейтронов , интенсивностью нейтронов/с в течение 7 суток. После облучения основную массу мишени отгоняют под слоем воды досуха при температуре lOO-IIO C в вакууме 2 мм рт.ст., затем в колбу добавляют каплю соляной кислоты (1:1) и нагревают с обратным холодильником в течение 15 мин при температуре 100°С, После гидролиза эфира с,Р-изопропилиденглицерина в о -глицерофосфат активность вносят на хроматограмму из бумаги FN-13 размером 20 350 мм о -глицерофосфат, меченый фосфором-3 выделяют из остатка путем хроматографирования либо в системе растворителей: i-пропанол-аммиак-вода (7:1:2), либо в системе i-пропанол-трихлоруксусная кислота-вода-ам миак (240 мл : 15 г, 60 мл : 1 мл) Затем хроматограмму протягивают на установке непрерывного радиометрирования хроматограмм и после проявления путем сравнения хр эматограммы с записью потенциометра выявляют место расположения активного о -глицерофосфата, который затем элюируют с соответствующего участк-а хромато граммы дистиллированной водой. Получают йеченый фосфором-32 aL-гпицерофосфат в состоянии без носи теля с общей активностью около имп/мин. Для проверки надежности идентификадии в колбу добавляют каплю НЮ и нагревают с обратным холодильнвнком в течение 1 ч. о -глицерофосфат окисляется йодной кислотой. После окисления с(-глицерофосфата ак тивность наносят на хроматограмму и хроматографируют в растворителе i-CjH OH-NH40H-H,0 (7:1:2). При последующем радиометрировании хромато граммы исчезает пик активности с ве личиной R 0,55, тем самым подтверждается чистота и индивидуальность полученного oi-глицерофосфата меченого фосфором-32. 74 Пример 2. Для идентификации строения целевого продукта биологическими методами осуществляют препаративное получение а-глицерофосфата, меченого фосфором-32. Для этого смесь 3260 г (21 г-моль) CCL, 0,85 г (0,0065 г.моль) с/,-изопропилиденглицерина и 0,4 г (0,005 г-моль) пиридина облучают Ро-Ве источником нейтронов интенсивностью 410 нейтронов/с в течение 28 сут. После отгонки основной массы мишени остаток количественно переносят в микроколбу и отгоняют содержимое при температуре 100-110 С в вакууме досуха. Затем добавляют в колбу 1 мл разбавленной соляной кислоты (1:1) и нагревают в течение 15 мин с обратным холодильником при температуре 100 С, после чего содержимое колбы выпаривают досуха. Активность смьтают со стенок колбы водно- ацетоновой смесью и наносят на хроматограмму. Хроматографирование производят в растворителе i-C H OH-NH OH-H O (7:1:2) и после высушивания хроматограммы снимают радиоавтограф. С хроматограммы вырезают участок, соответствующий местонахождению {/-глицерофосфата и элюируют oi-глицерофосфат дистиллированной водой. Получают водный раствор oL-rmt церофосфата, меченого фосфором-32, в состоянии без носителя с общей активностью 3 мккюри. Аналогично проводят получение е -глицерофосфата, меченого фосфором-32, при различных соотношениях исходных реагентов, В таблице приведены соотношения реагентов и радиометрический выход меченых фосфором-32 соединений.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ'о^-ГЛИ-,ЦЕРОФОСФАТА, МЕЧЕНОГО ФОСФОРОЦ-32, с использованием'с!'^ -изопропилиден-глицерина, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повьпиения удельной активности целевого продукта, смесь четыреххло- ристого углерода, о', Р-из о пропил ид ен- глицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100-100,13):(О,161- 0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток.2. Способ по к.1, отличаю- •ц и и с я тем, что облучение проводят на Ро-Ве-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0-10 нейтр/с.

0,0006 36,0

0,0008 (0,03) (0,02)

0,0042

0,0006 56,5 (0,02) (0,16)

4,5 9,9 11,4 22,9 3,4 4,2 Оптимальным соотношением реагентов для получения меченого фосфором-32 Ы1-глицерофосфата является следующее (в ГМоль): четыреххлористый углерод 2,6, с/, -изопропилиденглицерин .0,0025, пиридин - 0,0006. При этом соотношении выход с6-глицерофосфата. 5 меченого фосфором-32, составляет 59,5%,