Способ получения креатинфосфата,меченного фосфором-32 Советский патент 1986 года по МПК C07F9/22 

Изобретение относится к фосфорор ганической химии, а именно к новому способу получения нового фосфорилированного креатинфрсфата, меченного фосфором-32 формулы (НО)2Р-ШС -IJ-ШгСО Н о NH СНз который может быть широко использован в различного рода биохимических экспериментах, как ключевое соединенке для изучения энергетических процессов в мышцах, миграций макроэр гических остатков фосфорной кислоты в организме, как полупродукт для синтеза меченных нуклеотидов, в частности адезинтрифосфорной кислоты, меченной фосфором-32, для изучения фосфорного обмена и метаболизма различных фосфорных интермедиатов в экспериментах in vivo и in vitro. Целью изобретения является получение хроматографически чистого с высокой удельной активностью креатин фосфата, меченного фосфором-32, посредством облучения быстрыми нейтронами смеси четыреххлористого углерода, креатинфосфата и органического основания - пиридина. . Пример 1. Берут 250 мл (2,6 ГМоль) насьпценного раствора, креатина в СС1 с добавкой 0,02 мол. пиридина в круглодонной колбе на 250 МП. Вставляют внутрь колбы палец на шлифе 29 таким образом, чтобы Впоследствии помещенньш внутрь пальца PU - Be - источник быстрых нейтронов интенсивностью 710нейтр/с Иаходился в центре этой круглой колбы для равномерного облучения объема жидкости. При температуре 20 + 5 С облучают данную мишень в течение 3 сут. После облучения палец вынимают, наливают в колбу 10 мл бидистиллированной воды и отгоняют на парафиновой бане (t ) при пониженном давлении I мм до остатка в колбе 0,05 - 0,1 мл. Этот остаток капилляром переносят на бумажную хроматограмму из бумаги FN - 7 20x500 мм полоской в 3 см от края хроматограммы и хроматографируют в герметичной камере для нисходящей хроматографии известными приемами - двукратным хроматографированием в растворителе изопропанол - 25%-ный аммиак - вода 7:1:2. Параллельно в тех же условиях хроматографируют неактивную хроматограмму со свидетелями: , HiiPjOy, креатинфосфат. После двукратного хроматографирования (каждое из которых занимает время около 18ч) хроматограммы высушивают на воздухе 2 ч. Активную хроматограмму Протягивают мимо окна счетчика СБТ-13 радиохроматографа и получают запись пиков активности по длине хроматограммы на ленте ЭПП-09. Неактивную хроматограмму обрабатывают из пульверизатора жидкой смесью из 2 г ксилозы, 2 мл анилина, 20 мл воды, 20 мл этилового спирта и 60 мл н-бутилового спирта и помещают на 10 минут в сзтпильный шкаф с t 160-180 C для проявления фосфорных соединений. Последние проявляются на бумаге, как коричневые пятна на белом фоне. Неактивнзпо и активную хроматограммы сравнивают с записью на ленте ЭПП-09 и между собой, и по совпадению пика активности на ленте записи ЭШ1-09 и активной хроматеграмме с проявленным пятном креатинфосфата ни неактивной хроматограмме идентифицируют местоположение активного креатинфосфата на активной хроматограмме. Этот участок хроматограммы вырезают, элюируют водой в виал, емкостью 10 мл и получают препарат меченного фосфором-32 креатинфосфата активностью 5-10 расп/с или Ii мкКи. Радиохимический выход 44%. Часть активности порядка 600 - 1000 имп-мин берут капилляром из виала, наносят на пластинку из силуфола и хроматографируют в растворителе метилэтилкетонэтанол - 25%-нь1Й аммиак - вода 15:5: :7,5:10. Получают единственный пик активности с R 0,44, соответствзтощий положению креатинфосфата. Пример 2. Берут 125 мл насыщенного раствора креатина в СС (1,3 г. моль CClj,), 125 Мл чистого CCL (1,3 г-моль ССЦ), 0,04 мл CgH ( MOJi.%) в круглодонной колбе на 250 мл. Далее все операции: аналогичны таковым по примеру 1. После элюирования целевого меченного креатинфосфата получают препарат активностью 6-10 расп/с или 16 мкКи. Хроматографирование на силуфоле подтверждает чистоту и индивидуальность меченного фосфором-32 креатинфосфата (один пик на записи радио- . хроматографа и одно пятно на авто31

радиограмме из рентгеновской пленки РМ-1).

В табл,1 и 2 приводятся данные по радиохимическому выходу креатинфосфата в зависимости от содержания пиридина в исходной смеси, от температуры и времени облучения.

Эффективность предложенного способа заключается в получении близкоРадаохямтсскпе поголм мечстоос фосфорвм-32 продукг я т caetetM CCl4 кревтяя-аярвдяя «ависнноств от содецпакам традяМ {нол,Х)/вр«мя овйучеюп 2 сут, 20 , ячгочюл imfeacMaiiocTM ilO вгвйтр.(с)

989284

го к предельно возможной удельной активности препарата креатннфосфата-32 Р, практической одностадийности горячего синтеза меченного креатинфосфата , получения хроматографически чистого целевого продукта -без -операций промежуточной очистки продуктов синтеза

т « б Jt д I

Радяохямячесхий мосод крмтпфоефам Т а О я и ц 2 аавйсиностй от пйрамегров «впучсюм