Штамм н 5вт-103 Советский патент 1979 года по МПК A01N15/00 

(54) ШТАММ BACILLUS THURINGIENSIS VAR. GALLERIAE

H5BT-103

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новый штамм Вас. IhuringiensJs, используемый для произволства энтобактерина, применяемого дл уничтожения насекомых-вредителей. Известно, что одним из средств для уничтожения насекомых-вредителей является бактериальный препарат ЭНТО бактерин, производство которого 9существляется .при псмощи штаммов Вас. tHuringieMsis Улп galleriae 1. В настоящее время микробиологичес кой промышленностью для наработки энтоёактерина используют интродукти ные штаьФШ Вас. lhurin9ieTisis 5-го , выделяемые из погибших гусениц насекомых-вредителей 2. Однако эти , являясь диким фагпродуцирующими культура Вас, thuringieTisis , не выдерживают больших объемов производственных фе ментеров и бракуются из-за лизиса при первых комиссионных проверках. Целью изобретения является штамм Вас. thuringfensis var. galleriae Н5ВТ-103, отвечаюИ1-1й всем необходим .требованиям, предъявляемым к производственным штс1ммам-продуцентам энтобактерина, т.е. в условиях глубинного культивирования он не продуцирует вирулентный фаг и позволяет получать продукцию более высокого качества. Полученный штамм Вас. thuringiensis аг. galleriae Н5ВТ-103 имеет следующие Морфологическую и физиологическую характеристики. Морфологические признаки. Величина клеток в экспоненциальной фазе развития на обычном агаре типа СПА равна 4,0-6,0 х 2,0-2,5 мкм. Преобладающая форма палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки малоподвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны. В период перехода из экспоненциальной фазы в стационарную образуют овальные cnofoi размером в 1,8-2,2 мкм и белковые, в виде луковиц, этомоцидные кристаллы величиной 2,2 х 2,5 мкм. По Н-антигену штамм Н5ВТ-103 относится к 5-му серотипу, 5а-5б. Физиологические признаки. Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения - сухой питателеный агар типа СПА. Колонии в &-фор ме,выпуклые с ризоидными краями, Диаметр колонийпятисуточной культуры достигают до О,6-,О9 см. Пигмент не образует. Питательный бульон. Всюду псмутне ние значительное, осадок нитевидный или вуаль на четвертые-шестые сутки. Молоко лакмусовое. Пептонизация и подщелачивание сверху (24-48 ч), затем подкисление и редукция молока, коагуляция на третьи-четвертые сутки переваривание слабое на шестыевосьмые сутки. Картофель ломтиками. Культура сухая желтая. Агар с желатиной. Зона гидролиза 2-3 мм. Агар--казеин.. Просветление частичное. Агар-крахмал. Зона идролиза 5-6 мм. . Дрожжеполисахаридная регламентная питательная среда, используемая для производстаа энтомопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наблюдается к 12-14 часам культивирования при 28-30 С. Спорообразование и высыпание завершается к 36-42 час роста. Титр жизнеспособ ных, спор в культуральной жидкости к концу культивирования на обедненной ДПС (2% EBK-J-1% муки) достигает 2,5-3,0 млрд/мл. Отношение к источникам углерода. Усваивает без выделения газа глюкозу, целлобиозу, мальтозу, глицери ок.салаты. Не усваивает сахарозу/ маннозу, арабинозу, , инулин маннит, сорбит, дульцит, ацетаты, цитраты. Отношение к фагам. Собственные фаги не пpoдs иpyeт. Устойчив к вир лентным фагам типа FD-2 Pi-13 . Проявляет антагонизм к Вас, thuringiensis 4,1,3-серотипам.-к Для получения штамма H5BT-ld3 . использовали принцип рекомбинации генов, т.е. перераспределение детер минант генома клеток в ряду клеточных по солений родительской популяции. В качестве фактора, индуцирующего это .перераспределение, использовали разницу температур минус 10 и плюс . В качестве исходной культуры, из которой .был получен штамм Н5ВТ-103, использовали конвер си он ный вариант 1-го серотипа HI ВТнаходящийся на. хранении во ВНИИбакпрепарат. В таблице представлены данные пр дуктивности мтамка Н5ВТ-103 в сравнении с данными продуктивности штам мов 69/6-прототип и штамма HIBT- родитель. Как видно из таблицы,шта Н5ВТ-103 отличается от родителя при надлежностью к серотипу и в связи с этим является продуцентом другого э омопатогенного препарата.Кроме того, тамм Н5ВТ-103 в сравнении со штаммом рототипом продуцирует на обедненной ПС вдвое больше споро-кристалличесого комплекса, что позволит знаительно снизить расход сырья на прозводство энтобактерина а в связи этим и снизить его себестоимость. тамм Н5ВТ-103 является фагнепродуирующей культурой, и превЪсходит: тамм-прототип посвоей вирулентноеи более чем в 6 раз. Формула изобретения Штамм Bacillus thurinqiejisis var. ST0.1 ler-iaeHSBT-lOB,используется для изготовления энтомопатогенного препарата энтобактеркна Получен из Вас. ihutingiensis первого серотипа Н1ВТ-2 путем рекомбинации генов при воздействии температурой минус плюс . Хранится в коллекции ВНИИбакпрепарат. Морфологические признаки. Величина клеток в экспоненциальной фазе развития ,на обычном агаре типа СПА равна 4,0-6,0 х 2,,5мкм.Преобладающая форма палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки малоподвижные. Встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны, В период перехода из экспоненциальной фазы в стационарную образуют овалБЙые споры размером в 1,82,2 мкм и белковые в виде луковиц энтсмоцидные кристаллы величиной 2,2-2,5 мкм. По Н-антигену штамл Н5ВТ-103 относится к 5-ому серотипу, 5а-5б.. Физиологические признаки, бргани- «еская среда для. поддерживающей селекции и размножения - сухой питательный агар типа СПА Колонии в R-форме выпуклые с р изоидаыг«1 краями. 1Дйаметр КОЛОНИЙ 5-ти суточной культуры достигаетдо 0,6-0,9 см. Пигмент не образует. Питательный бульон. Помутнение значительное, осадок нитевидный или на четвертые-шестые сутки. Молоко лакмусовое. Пептониэация, подшелачивание сверху 24-48 ч, затем подкрсление и редукция молока коагуляция на третьи-четвертые сутки,переваривание слабое на шестые-восьмые сутки . Картофель ломтиками. Культура сухая, желтая. Агар с желатиной. Зона гидролиза 3-2 мм. Агар-казеин. Просветление частичное. Агар-крахмал. Зона гидролиза 5-6 мм. Дрожжеполисахаридная регламентная ,ге1тательн.ая среда, используемая для

производства энт 1опатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наблюдается к 12-14 час культивирования при 28-30°С. Спорообразование и высыпание завершаетея к-6-42 час роста. Титр жизнеспособных ctiof в в культурной жидкости к концу культивирования на обедненной ДПС (2% БВК+1% муки) достигает 2,.5-3,0 млрд/мл.

Отношение к источникам углерода. Усваивает без выделения газа глюкозу,

Сравнительная характеристика

продуктивности штамма Н5ВТ-103 и штаммов Н1БТ-2 родитель и 69/6 СПРОТОТИП) Н5ВТ-103 У 2,5-3,0 Луковица Не H1ST-21 3, 0-4,0РОмб родитель 69/6У 1,2-1,8 Луковица Pg-l прототип

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Алешина О.А. и др. Биологический метод борьбы с вредителями и болезнями сельскохозяйственных растений. .Знанйе 1975, с,33-37,

целлобиоэу, мальтозу, глицерин, бксалаты. Не усваивает сахарозу,маннозу арабинозу лактозу,инулин,маннит, сорбит, дульцит, ацетаты, цитраты.

Отношение к фагс1м. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к вирулентньи фагам типа FD-2 и Fi-l3.

Проявляется антагонизм к Вас. thuriwgicnsjs 1,3 и 4- серотипам. Не

и того же насекомого. Использование микроорганизмов в животноводстве и для защиты растений, л., 1968, с.123-126. Устойчив 0,08 продуцируетпродуциУстойчив около О к Fg-lL рует L Чувствите- 0,5 лен