Штамм @ @ @ , @ @ -51-продуцент протеолитических ферментов Советский патент 1986 года по МПК C12N9/54 C12N15/00 C12N9/54 C12R1/07 

СХ)

со

О) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частнос ти к получению нового штамма, исполь зуемого для получения протеаз. Целью изобретения является получение нового штамма Bacillus thurin qiensis var. galleriae GFP-51, обладающего высокой протеолитической активностью. Штамм Вас. thurinqiensis GFP-51 продуцент протеолитических ферментов вьделен из генетически нестабильного штамма Вас. thurinqiensis var. galle riae 26 путем рассева его и отбора морфологически отличающихся колоний. Штамм GFP-51 отличается от родительского штамма 26 отсутствием плазмидных гономов, обладающих свойством интегрировать с хромосомным геномом клетки, в результате чего полученный штамм GFP-5t отличается генетической стабильностью по сравнению с родительским генетическим нестабильным штаммом Вас. thurinqiensis v. galleriae 26, Ытамм хранят в споровом состоянии в физиологическом растворе при 4°С, а также в лиофилизированном виде. Полученный штамм Вас, thuriqiensi V, galleriae GFP-51 - продуцент протеолитических ферментов депонирован в коллекции Центрального музея промьшшенных микроорганизмов ВНИИ генетики и селекции промьшшенных микро, организмов, коллекционньй номер В-3004. Штамм характеризуется следующими признаками. Культурально-морфологические признаки. Вегетативные клетки размером (0,3 0,6)х(1,5-2) мкм расположены отдельно или небольшими цепочками. Образую споры, расположенные эксцентрально, споры овальной формы. Перитрих, Акристаллйческий, Мясо-пептонньй агар. Образует колонии белого цвета. Рост неебильный, наблюдается врастание в агар. Мясо-пептонный бульон. Образует кольцеобразную пленку, наблюдается равномерное помутнение бульона. Картофельный агар. Рост обильный, сплошной. Цвет колоний белый. Врастания в агар не наблюдается Сухой питательный агар. Рост обильный, сплошной-. Цвет колоний белый с серым оттенком. Форма колоний - неправильная, профиль колонии - изогнутый, край колонии - волнистый, структура колонии - однородная. Физиолого-биохимические признаки. Факультативньш анаэроб. Грамположительный. Дает хороший рост при 30t. Крахмал гидролизует. Желатину разжижает, Молоко пептонизирует. Уреазоотрицательный. Лецитиназоотрицательный. Эскулиноположительный. Усваивает; глюкозу, лактозу, ара- бинозу, целлобиозу. Не усваивает ман1|ит, Нитриты восстанавливает в нитриты. Антигенные свойства. Относится к У серотипу вида Bacillus thurinqieftsis Не продуцирует те1:)мостабильного - экзотоксина. Штамм Вас, thurinqiensis v, galleriae GFP-51 синтезирует протеолитические ферменты, Протеолитическую активность культуральной жидкости определяли по расщеплению азоказеина. В табл. 1 приведены сравнительные данные по активности ферментов предлагаемого штамма и ранее известных. За единицу брали активность фермента, необходимую для расщепления 1 мг азоказеина в течение 60 мин при 30°С, Из табл. 1 видно. что предлагаемый штамм GFP-51 обладает протеолитической активностью, которая в 3 раза вьшхе, чем у известного продуцента Вас, subtilis 203. Культура Вас, thurinqiensis v. galleriae GFP-51 - продуцента протеолитических ферментов обладает устойчивостью к вирулентным фагам, самопроизвольно фаг не ввделяет (см. табл. 2). Пример, Для приготовления посевного материала используют культуРУ выращенную до спорового состояния на питательном агаре. Перед засевом в МИБ для получения инокулята споры прогревают при 15 мин. Культуру подращивают в МПБ при 220 об/мин, температуре ЗОС в колбак емкостью 750 мг (100 мл питательной среды), Полученную посевную вегетативную культуру используют для засева ферментационной среды. Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе протеазы, %: MgSO, 0,05 0,04 , 3 11813164 0 23Протеолитическая активность ацеCaCl, 008тонового порошка, определяемая модиК НРО113фицированнь1м методом Ансона, составKHjPOО 001ляет 90-180 ед/г. Синтез экзопротеоCuSONa-цитрат 0,015 литических ферментов осуществляется (NH4)SO 0,02штаммом GFP-51 стабильно. Дрожжи кормо-Т а б л и ц а 1 вые сухие 2 КукурузныйПротеолитическая активность экстракт 0,5, культуральной жидкости штамСобвая мука 0,5мов Вас. subtilis и Вас. thuptf среды до 7,2-7,3 доводят 40% NaOH.rinqiensis Культивирование проводят при - температуре 30 С, 220 об/мин в кача-Штамм Активность лочных колбах емкостью 750 мл со протеаз по 100 МП питательной среды, Длитель-расщеплению ферментации, т,е. до 95% высы-азоказеина, пания спор, 44-48 ч. После оконча-ад/мл имя ферментации биомассу отделяют от--. культуральной жидкости центрифугиро- Вас. subtilis 203 52,5 ванием. Из культуральной жидкости методом осаяздения ацетоном белков вВас, thurinqienсоотношении 1:2 получают ацетоновый.sis v. galleriae GFP-51 120+20 порошок - ферментный препарат.,; Устойчивость штаммов 26 и GFP-51 Вас. thuringiensis к производственным фагам ШтаммыПроизводственные фаги . 4 J 18 25 29 148Т Д8Т Д4Тд1бТд29Тн кТи-77Гэ-5 26 + + + ++ + + ++++ + GFP-51--- Условные обозначения: знак + чувствителен к фагу; - устойчив к фагу. Таблица2:

Штамм Bacillus thurinqiensis var.galleriae GFP-51 (хранится в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промьшшенных микроорганизмов под номером В-3004) продуцент протеолитических ферментов.