Штамм Советский патент 1979 года по МПК A01N15/00 C12K3/00 

Изобретение относится к сельскохозяйтсвенной микробиологии и может быть использовано для производства энтобактерина, применяемого для борьбы с насекомыми-вредителями. Известно, что одним из средств уничтожения насекомых-вредителей является знтомопатогенный бактериаль ный препарат энтобактерина, производ ство которого осуществляется при помощи Bac.tJiuringiensis vor.gaEJe Внастоящее время микробиологической промышленностью для производства энтобактерина используют интродук ивные дикие штаммы Вас .iWringiensiS. VDP.QEEenae5-ro серотипа, выделяемые из. погибших насекомых-вредителей 1. Однако эти штаммы, являясь дикими фагпродуцирующими культурами Bac.thuHn fVenSiS , не выдерживают больших объемов производственных ферментеров и бракуются из-за лизиса при первых комиссионных проверках. Известен штамм Bac.thuHngiensib vor. tteriae- продуцент энтобактерина 69/6 вьщеленный Исаковой и. в 1969 г, из погибших гусениц большой пчелиной огневки 2, Штамм 69/6 в 1973 г. бы-i несколько улучшен сотрудниками ВДИИбакпрепарат., В настоящее время штамм 69/6 является единственным продуцентом энтобактерина- 3, но вскоре он будет снят с производства, так как часто лизируется от собственного гомологического фага и дает продукцию низкого качества. .Цель изобретения - штам Bac.Uiunn iensia var. gQtCeHQe Н5ВТ-114, отвечающий всем необходимым требованиям крупнотоннажного стацирнарного и непрерывно-циклического способов производства энтобактерина, т.е. спонтанно в условиях глубинного культивирования не продуцирует вирулентный фаг, обладает более мощной фермейтативной системой. За счет чего лучше расшепляет и усваивает компоненты дрожжеполисахаридной питательной среды (ДПС) и позволяет получать продукцию более высокого качества. Полученный штамм Вас. tHuHn fensti var. Qtfericie Н5ВТ-114 имеет следующие морфологическую и физиологическую характерисгики. Морфологические признаки. На обычном агаре типа СПА величина клеток в экспоненциальной фазе развития равна 3,0-4,0 мкм. Вегетативная орма клеток палочковидная. В уелоВИЯХ глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки под вижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны. В стационарной фазе образу овальные споры величиной 1,6-2,1 мкм энтомоцидные .округлые кристаллы, диа метр которых находится в пределах 1, 2,0 мкм. По Н-антигену штамм Н5ВТ-11 относится к 5-му серотипу. Физиологические призн.аки. Органическая среда Для поддерживающей селекции и размножения маточных культур - сухой питательный агар (СПА) . Колонии в R-форме,-плоские с ризоидными краями.Диаметр колоний 5-Ти суточной культуры достигает 0,5 0,6 см. Пигмент не образует. Питательный бульон. Осадок на 6-7 сутки. Молоко лакмусовое. Пептонизация и подщелачивание сверху, затем подки ление и редукция молока. На 3-4 сутк коагуляция. Переваривание на 5-6 сут ки сильное.Коагулированная сыворотк розовая. Картофель-ломтиками.Культура суха светло-жёлтйя. .- Агар с желатиной. Зона гидролиза 5-6 мм. Агар - казеин. Просветление полно Дрожжёполисахаридная питательная среда (ДПС), используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наб людается в 12 часу культивирования при 28-30 С. Спорообразование начина ется к 28-30 часам роста и завершает ся к 36 часу. Титр жизнес-пособных спор в 1 мл культуральной жидкости к концу культивирования на дрожжеполи сахаридной питательной среде достиг ет 2,5-3,5 млрд. Отношение к углеводам. Усваивает без выделения газа глюкозу, мальтозу, целлобиозу, глицерин , оксалаты. Не усваивает арабинозу, маннозу, лактозу, Дульцит, маннит, сорбит, ацетаты и цитраты. Отношение к органическим кислота Усваивает уксусную, молочную и лимонную кислоты. Не усваивает фумаро вую,яблочную, янтарную и винную. Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к фагам типа Fc)-2, Fol-3. Антагонизм проявляет к штаммам Вас .i-huHr iensisi 1,2 и 4-му серотипам. Для получения штамма Bac.tJiur giens vQf . gaEEer oe Н5вт-114 использов ли принцип рекомбинации гёНов, т.е. перераспределениедетерминант геном клеток в ряду клеточных поколений родительской популяции. В качестве фактора, индуцирующего это перерасределение, использовали разницу темератур, равную -10 и . В качестве исходной культуры, из оторой был получен штаг-1м d5BT-ll4, спользовали штамм ЯД-73 продуцент Дипела, находящегося на хранении о ВйИИбакпрепарат. Штамм Н5ВТ-114 отличается от роителя принадлежностью к серотипу в- связи с этим является продуценом другого энтомопатогенного преарата. Кроме того, штамм 5ВТ-1Г4 сравнении со штаммом-прототипом водуцирует на обедненной ДПС вдвое больше спорокристаллИческого компекса, что позволяет значительно низить расход сырья на производство энтобактерина,. а в связи с этим и снизить его себестоимость. Штамм fI5BT-ll4 является фагнепродуцирующей культурой, т.е. находится в критическом состоянии. По своей вирулентности штамм .й5ВТ-114 превосходит штамм-прототип более чем в 3-5 раз. Формула изобретения Штамм BaciEtus, thunn iEneis vor. ottenae H5BT-114,используемый для изготовления энтомопатогенного бактериального препарата энтобактерина, применяемого против насекомых-вредителей сельскохозяйственных культур и леса, хранится в коллекции В {ИИбакпрепарат. Морфологические признаки. Да обычном агаре типа СПА величина к:леток в экспоненциальной фазе развития равна 3,0-4,0 мкм. Вегетативная форма клеток палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидкой.питательной среде клетки подвижные, встерчаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположйтельны. В стационарной фазе образуют овальнне споры величиной в 1,6-2,1 мкм и энтомоцидные округлые кристаллы, величина которых укладывается в пределы 1,5-2,0 мкм. По Н-антигену штамм Н5ВТ-114 относится к 5-му серотипу. . . Физиологические признаки. Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения маточных культур - сухой питател.ьный агар типа СПА. Колонии в R-форме, плоские с ризоидными краями. Диаметр колоний 5-ти суточной культуры достигает 0,5-0,6 см. Пигмент не образует. Питательный бульон. Осадок на 6-7 сутки. Молоко лакмусовое. Пептонизация и подшелачивание сверху, затем подкисление и редукция молока. Коагуляция на 3-4 сутки. Переваривание на 5-6 сутки сильное. Коагулированная сыворотка розовая.

Картофель-ломтиками. Культура сухая, светло-желтая.

Агар с желатиной, она гидролиза 5-6 мм.

Агар-казеин. Просветление полное.

Дрожжеполисахаридная питательная . среда (ДПС), используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препа ратов. Интенсивный рост наблюдается к 12 часу культивирования при 28-30°С. Спорообразование начинается к 28-30 часам роста и за-..вершается к 36 часу. Титр жизнеспособных спор в 1 мл, культуральной жидкости к концу культивирования на дрожжеполисахаридной питательной среде достигает 2,5-3,5 млрд.

Отношение к углеводам. Усваивает без выделения газа глюкозу, мальтозу, целлобиозу, глицерин, оксалаты. tie усваивает арабинозу, маннозу, лактозу, дульцит, маннит, сорбит, ацетаты и цитраты.

Отношение к органическим кислотам. Усваивает уксусную, молочную и лимонную кислоты. Яе усваивает фумаровую, яблочную, янтарную и винную.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует.

Устойчив к фагам типа Fd-2, FC/-3.

Антагонизм проявляет к штаммам Вас. tfiu n iensis 1,2 и 4 серотипам.

Источники информации,

0 принятые во внимание при экспертизе

1,Швецова О.И., Зурабопа Э.Р. Биологические свойства кристаллообразующих бацилл, выделенных из разных видов насекомых. - Микробиоло5гическая промышленность , 1972,

7, с.25-27.

2.Фрейман В.Б., Щербаков Л.А.

и др. Результаты селекции производственных штаммов BaciEEuS thuHndiens-is 0 var. gQEteHqe Труды ВнИИбакпрепарат, в, 2, .в. 2, 1973, с. 74-78 (ПРОТОТИП).