Способ получения препарата клубеньковых бактерий Советский патент 1979 года по МПК C05F11/08 

1

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано в производстве препаратов клубеньковых бактерий, которые применяют в сельском хозяйстве при выращивании бобовых растений.

Известны различные способы получения препаратов клубеньковых бактерий путем перемешивания инокулята азотфиксирующих микроорганизмов с различными субстратами 1.

Известен также способ полуг1ения бактери апьного удобрения смешиванием торфа с инокулюмом механическим путем или путем периодического напьшения инокулюма на торфянуй крошку при температуре слоя последней не выше 35°С до достижения равномерной влажности препарата 35-40% 2.

Как известно, сухой торф с влажностью 15-20% отличается значительной гидрофобностью Кроме того, в торфе содержится до воска и смол (битум), существенным образом снижающих смачиваемость торфа водой или различными водными растворами. Высушивание торфа при 150-180С приводит к полимеризадии би:Тумов, усуглубляющей эффект несмачиваемостн Поэтому во всех сл чаях смеитвание происходит в течение длительного времени (10-25 мин), следствием чего является низкая выживаемость клубеньковь Х бактерий.

Пель изобретения - повысить выживаемость бактерий в процессе механического перемепдивания инокулюма с сухим торфом.

Эта цель, достигается тем. что механическое перемешивание сухого торфа с инокулюмом проводят в присутствии неиногенного поверхностно-активного вещества (ПАВ), имеющего высокую смачивающую активность по отношению к cjTtOMy торфу, нетоксичного для клубеньковых бактерий и не снижающего азотфиксирующую активность растений в симбиозе с клубеньковыми бактериями.

Используются ПАВ общей формулы RO(C2H40)n Н, где R -С8Н17СбН5 С17Н25СбН5 или CioHjl -С2оН41 .

Обработка сухого торфа такими ПАВ или внесение их в жидкий инокулюм значительно сокращает время, необходимое для тавномгрного распределения бактериальных клеток в маеее торфа при перемеипшаиии. Сокращение крсмени перемеашвания существенно снижает ироцен1 гибели вносимых в торф бактериальных клеток. Благодаря этому становится возмож1Н)м уменьпшть количество инокулюма при сохранении требуемого для препарата исходного титра (0,8-1,5 млрд/г). Пример. Подготавливают 170 кг нейтрализованного и высушенного торфа с тониной помола 0,1 мм и влажностью 18-20%. Затем к нему одновременно прибавляют 130 л инокулюма (с титром 14,2 млрд/мл) и 0,1% (к весу торфа) оксиэтилированного спирта. фра ции CIQ-Сзо со средней степенью оксиэтилирования 3 моля окиси этилена на 1 моль спирта и перемеишвают компоненты до равномерного распределения жидкости в препарате. Время перемешивания 3 мин. Равномерность распределения инокулюма в торфе определяют двумя способами: определением -влажности отдельных проб весом г и определением числа бактерий в отдельных пробах весом 1 г. Готовый препаpai расфасовывают и хранят в течение 6 мес. при низких положигельн1)х температурах. По предаагаемому способу выживаемость бактерий после пермеишвания составляет 827о (11,6 млрл/г), а в контрольном варианте (без ПАВ) дан получения равномерного распределения инокулюма требуется время перемешивания не менее 20 мин и в этом случае выживаемость бактерий составляет не более 25% (3,5 млрд/г). При тех же исходных условиях и введении аналогичного ПАВ выживаемость бактерий после 3 мин перемешивания составляет 78% (11,1 млрд/г) от исзодного титра. П р и м е р 2. Поступают как в примере 1, но в качестве ПАВ берут оксиэтилированный нонилфенол со средней степенью оксиэтилирования 7 молей окиси этилена на 1 моль нонилфенола в количестве 0,1%. В этом случае выживаемость бактерий после перемегиивания составляет 75% (10,6 млрд/г), а при KOFUieHTpaium ПАВ 0,5% - 73% (10,3 млрд/г) от исходного титра. Результаты примеров 1 и 2 приведены в таблице.

Перемеашвание составляющих препарата без ПАВ (известный)

Перемешивание составляюш11х препарата is присутствии оксиПримерз. Смесь торфа с ПАВ (без инокулюма), приготовленную аналогично примерам 1 или 2, расфасовывают в непроницаемую для микроорганизмов упаковку, например полиэтиленовые пакеты, стерилизуют одним из известных способов и инокулируют в асептических, условиях инъекцией жидкой культуры клубеньковых бактерий непосредственно в пакет. При этом жидкий инокулюм равномерно распределяется в массе торфа без дополнительного перемешивания.

XX

60

20

25

Таким образом, новый способ получения препарата клубеньковых бактерий по сравнению с известным обеспечивает сокрап1ение времени перемешивания торфа с инокулюмом с 15-25 до 3 мин при обеспечении равномерности смешивания; повышение выживаемости клубеньковых бактерий в процессе приготовления препарата с.25 до 78-82%.

Результаты испытаний выживаемости клубеньковых бактерий в препаратах, изготовленных разными способами, при условии достижения

5697489

равномерного распределения инокулюма на субстрате- носителе

у

Препарат обладает низким качеством из-за неравномерного перемешивания инокулюма с торфом.5

Xi

Выживаемость бактерий при приготовлении препарата по существующей технологии.

Формула изобретенияЮ

культурой клубеньковых бактерий с последуюпдам перемешиванием, отличающийся.

тем, что, с целью снижения травмируемости и тбели клеток бактерий, процесс перемешивания проводят в присутствии неионогенных поверхностно-акт1шных веществ общей формулы RO (С2Н40)п И, где R - CgHiTCeHs - С12Н25СбН5 ИЛИ CioH21 - И

п 3-12.

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

2.Авторское свидетельство СССР № 477150, кл. С 05 F 11/08, 1975 (прототип).