Изобретение относится к области биохимии и предназначено для разделения белков , нуклеиновых кислот, углеводов и других биополимеров, имеющих заряд. Известный способ препаративного диск-электрофореза в полиакриламидном геле состоит в том, что через край разделяющего полиакриламидного геля, удаленный от концентрирующего полиакриламидного геля, непрерывно в течение всего времени проведения электрофореза пропускают буферный раствор, в который попадают разделенные компоненты по мере их выхода из геля, после прохождения через край разделяющего геля буферный раствор собирают; с помощью коллекто ра равными фракг ями в пробирки 1 Однако известный способ препаративного диск-электрофореза не позво ляет получить качественного разделе ния компонентов, поскольку при элюции и сборе по фракциям последних в процессе электрофореза нельзя точ но согласовать производительность ряда приборов (как минимум, микрона coca, электрофоретической камеры и комплектора фракций, объединенных в единый комплекс), зависящую, в свою очередь, от условий проведения электрофореза. Компоненты получаются слишком разведенными или же элюируются не полностью. Наиболее близким к предложенному способу является способ препаративного диск-электрофореза, при котором в вертикальной колонке на гидростатическую пробку наносят слой концентрирующего полиакриламидного геля, со смесью исследуемых компонентов, на который затем наносят слой разделяющего геля и электродный буфер, проводят электрофорез и собирают фракции разделенных компонентов 2. Однако и этот способ препаративного диск-электрофореза не обеспечивает качества разделения компонентов в связи с тем, что Е азделенные в полиакриламидном геле компоненты в процессе элюции буферным раствором в зависимости от скорости протекания последнего разбавляются или полностью не элюируются. Целью изобретения является повышение качества разделения компонентов. Для достижения этой цели перед нанесением электродного буфера на слой разделяющего геля наслаивают столб жидкости с градиентом плотности
сахарозы и таким же буфером, как в разделяющем геле.
На чертеже приведена схема предлагаемого препаративного диск-электрофореза.
В электрофоретическую камеру, представляющую собой вертикальную колонку 1, на гидростатическую пробку 2 из полиакриламидного геля,, содержащую электродный буфер, наносят слой 3 концентрирующего геля, полиакриламидного или сафадекса, содержащего исследующую смесь компонентов, например белков, и концентрирующий буфер. На концентрирующий полиакриламидный гель наносят разделяющий полиакриламидный гель 4, включающий в себя разделяющий буфер и сахарозу, над поверхностью которого затем создают столб 5 жидкости с градиентом плотности сахарозы, также содержащий разделяющий буфер Наибольшая концентрация сахарозы в столбе жидкости равна или несколько меньше, чем ее концентрация в разделяющем геле. Поверх этого столба жидкости наслаивают .электродный буфер 6 не содержащий сахарозы. После проведения электрофореза жидкость с градиентом плотности сахарозы, в которую перешли из геля разделенные компоненты исследуемых веществ, собирают по фракциям.
Принцип работы предлагаемого устройства состоит в том, что в электрофорртическую камеру,представляющу собой вертикальную колонку, вносят с концентрирующим гелем (полиакриламидным или сефадексом) исследуемые белки или другие биополимеры, имеющи заряд.
Поверх концентрирующего геля наслаивают разделяющий гель, между поверхностью которого и верхним электродным буфером создают столб жидкост стабилизированной от перемешивания градиентом плотности сахарозы, В процессе электрофореза белки и други биополимеры, имеющие заряд, двигаясь вверх по колонке, концентрируются и разделяются в соответствующих , а затем переходят в жидкость с градиентом плотности сахарозы и разделяющим буфером, где продолжают двигаться и {Зазделяться.
Таким образом, в предлагаемом способе препаративного диск-электрофореза разделение вначале происходит в полиакриламидном геле, а затем продолжается в жидком зональном носителе, г стабилизированном от перемешивания градиентом плотности сахарозы.Сконцентрированные и разделенные биополимеры, попадая из полиакриламидного геля в жидкость с градиентом плотности
сахарозы, при соответствующих условиях проведения электрофореза сохраняют устойчивость, существенно не уширяясь и не седиментируя. Последнее обусловленно тем, что движение заряженных биополимеров происходит снизу вверх, т.е. из области с большей концентрацией сахарозы в меньшую. Величина прещельной загрузки белком в предлагае. мом способе находится в прямой зависимости от величины градиента плотности сахарозы в столбе жидкости. Предлагаемый способ препаративного дискэлектрофореза может найти широкое применение в лабораторной практике при анализе белков, нуклеиновых кислот, углеводов и других биополимеров, имеющих заряд, так как. он является простым и повышает качество разделения.
Формула изобретения
Способ препаративного диск-электрофореза, при котором в вертикальной колонке на гидростатическую пробку наносят слой концентрирующего поиакриламидного геля со смесью исследуемых компонентов, на который затем наносят слой разделяющего геля и электродный буфер, проводят электрофорез и собирают фракции разделенных компо,нентов, отличающийс я тем, что, с целью повьшения качества разделения, перед нанесением электродного буфера на слой разделяющего геля наслаивают- столб жидкости с градиентом плотности сахарозы и с таким же буфером, как -в разделяющем геле.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1.Маурер Г. Диск-электрофорез, М., Мир, 1971, с. 141.
2.FurEong С.М. et а6 Analytical Biochemistry,1973, 5, p. 297 (прототип) .
-I-5
