Способ разделения белков шерсти овец Советский патент 1979 года по МПК C07K1/14 C07K14/47 

(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ШЕРСТИ ОВЕЦ

,. 1 Изобретейие относится к улучшенно му способу разделения белков шерсти овец, который может найти применение в лабораторной практике при изучении химической структуры, химического состава и качества шерхзти овец Известен способ выделения из шерсти овец тирозин-содержащих белков 1, который состоит в растворении шерхзти в смеси 6 М мочевины и 0,2 М тиогликолята натрия при рй11, алкилировании иодацетатом сульфглдрильных групп, выделении-.богатых тирозином белков в виде S-карбоксиметилпроизводньлх фракционированным осаждением и диализом. Однако этот метод позволяет выделять из шерсти овецТОЛЬКО фракцию белков богатых, тирозином, к ,тому же обработка шерст тиогликолятом сопровождается длитель ной очисткой белков от мочевины с применением мелкопористых диализных мембран, Наиболее близким к заявляемому является способ разделения белков шерсти овец 2, включающий: окисление шерсти 1, надуксусной кислотой в течение 48 ч при 25,промывку и высушивание шерсти.последующее растворение окисленной шерсти в едкой щелочи (24 ч при 25°), отделение нерастворившейся части шерсти, представляющей собой бета-кератозу, . фильтрованием, определение содержания в фильтрате общего .белка и альфа-ке.ратозы, и, наконец, расчет содержания гамма-кератрзы как разницы между общим белком и альфа-кератозой. Таким способом белки, выделенные из шерсти овец, были разделены на три группы: бета-кератозы, г редставляющие собой кутикулу и остатки клеточньк оболочек шерстяного волокна; альфа-кератозы - белки высокого молекулярного веса с низким содержанием серы и га№ла-кератозы - нйзкомолекулярные белки с высоким содержанием серы. При этом лишь одна группа белков (бета-кератозы) может быть получена в чистом виде, Однако этот способ позволяет разделить белки шерсти овец лишь на три группы, причем тирозин-содержащие белки присутствуют во всех трех фракциях в виде примесей и препятствуют определению истинного содержания белка в каждой фракции.

Цель настоящего изобретения - повшиение селективности разделения белков шерсти овец.

Поставленная цель достигается описываемым способом разделения белков шерсти овец, заключающимся в том, что осуществляют обработку шерсти 40-кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта 20%-ым раствором едкого натра до рН 6.0-7,0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в сгсадок белков.

Шерсть, после отделения надмуравьинокислого экстракта, окисляют 1,6%-ой надуксусной кислотой при комнатной температуре в течение 48 ч промывают дистиллированной водой,просушивают, растворяют в едкой щелочи (24 ч, комнатная температура),нераствор ив 1ии ее я белки отделяют фильтрованием.

Отличительными признаками способа ЯВЛЯЮТСЯ: обработка шерсти 40кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта едким натром, диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в осадок белк ов .

Использование настоящего способа позволяет разделить белкишерсти овец на 4 фракции, одна из которых представляет собой тирозинсодержащйе белки, а остальные три - бета-кератозы, альфа-кератозы - белки высокого молекулярного веса с низким содержанием серыми гамма-кератозы - низкомолекулярные белки свысоким содержанием серы. Последние три типа белков свободны от тирозин-богатых белков.

Пример. Шерсть заливают охлажденной до 0°надмуравьиной кислотой (на единицу веса шерсти 40 часРезультаты разделения шерсти овец асканийской тонкоруной породы и австралийского мериноса. Соотношение различных групп белк ов (%)

Австралийский, меринос 5,4

той надмуравьиной кислоты) и вццерживают 30 мин при 0°.

Надмуравьинокислый экстракт отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр. Остаток шерсти на фильтре промывают небольшим количеством муравьиной кислоты, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции, .Промывку муравьиной кислотой и надмуравьинокислый экстракт объединяют, охлаждают до О и медленно нейтрализуют JiacTBopoM едкого натра.

Нейтральный раствор диализуют че.рез оберточный целлофан против дистиллированной воды в течение 12 ч. Выпавщиев осадок белки центрифугируют и промывают дистиллированной водой .

Остаток шерсти, после обработки последней надмуравьиной кислотой помещают в колбу, заливают стократным объемом 1,6%-ой надуксусной кислоты, плотно закртлвают и окисление проводят при комнатной температуре в течение 48 ч при непрерывном встряхивании.

Окисленный остаток- шерсти тщательно прсмьшают на стеклянном.фильтре дистиллированной водой, затем заливают стократным объемом 0,02 М раствором едкого натра и растворяют при комнатной температуре, непрерывно встряхивая в течение 24 ч.

Нерастворившиеся белки отделяют фильтрованием. К фильтрату добавляют ледяную уксух:ную кислоту до конечной концентрации 5% и оставляют на 24 ч в холодильнике. Выпавший осадок, (бед ные серЬй белки) отделяют фильтрованием.

В фильтрате, представляющем собой раствор богатых серой белков, шерсти содержание белка определяют по Кьельдалю или спектрофотометрически при 272 нм. Белки сушат лиофилизацией.

Результаты разделения белков овец асканийской тонкоруной породда и австралийского мериноса, а такke аминокислотный состав этих белков приведены в табл. 1-3.

Таблица 1

55,7

24,4

14,5

Содержание серы в различных группах

Богатые тирозином

Нерастворимые в

Аминокислотный состав белковых фракций шерсти по данным хроматографии на бумаге кислотных гидролизатов (%)

Аминокислоты 1. Фракции асканийской Цистеиновая кислота Лизин Гистидин Аргинин Аспарагиновая кислота, глицин, серин Глутсминовая кислота, треонин Алании Тирозин Валин, метионин Фенилаланин Лейцин, изолейдин 2. Фракции австралийской Цистеиновая кислота 10,8 12,3 Лизин8,8 4,2 Гистидин5,2 2,5 Аргинин5,2 9,4

7020296

Таблица 2 ; белков шерсти (%)

2,04

2,21

Таблица 9,0 7,1 4,6 7,2

.. .-M ivi6Wit.Jt - -формула изобретения

Способ разделения белков шерсти овец, вк|г1ючающий обработку шерсти карбоновыми надкислотами, растворение в щелочи и фракционное осаяздение, р т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения селективности разделения, осуществляют обработку шёрсги 4 О-к ратным объемом надмуравьинЬЙ кислоты в течение 25-35 мин гфи саслаяэдёнии, с последующей нейтрализацией Охлажденного надмуравьйного экстракта 20%-ым раствором едкого

Продолжение табл.3

натра до рН 6,0-7,0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в осадок белков.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

2 .DziatosMnsVi U, MotciejeNWBka M ,Meto6a Dznacrqinia ir-acji KeratozoxN cti wetnx.ov/czvTclieniia ooiae-styma,-1964,9, 447(прототип) . .