Способ высушивания иммобилизованных холинэстераз Советский патент 1979 года по МПК A61K38/46 

Изобретение относится к области получения биохимических препаратов, в частности к способу получ&ння иммобилизованных ферментов. Иммобилизованные холинэстеразы, получаемые различными способами, обычно хранят во влажном состоянии в холодильнике. При длительном хранении в растворе все биологически активные вещества, в том числе и иммобилизованные ферменты, теряют свою, активность. Причиной этого являения может быть либо инактивация фермента, либо раствор ние поверхности носителя и вымывание первоначально иммобилизованного фермента. Наиболее близким по технической сущности является общеизвестный способ высушивания биологически активных материалов-лиофильная сушка. Лиофильная сушка заключается в испарении воды из замороженного материала в вакууме. Недостатком лиофильной сущки иммобилизованных на неорганических (пористое стекло, силикагель, окись алюминия) или органических (целлюлоза и ее производные) носителях холинзстераз (ацетил-, бутирил- и пропионилхолинэстераза) является заметное или йолное исчезновение ферментативной активности препаратов W. Целью изобретения является сохранение ферментативной активности иммобилизованных холинэстераз при их высушивании. Поставленная цель достигается дополнительной обработкой препаратов перед высушиванием. Способ высушивания иммобилизованных холинэстераз согласно изобретению заключается в пропитывании препаратов 2-20%-ными, преимущественно 10-15%-ными, водными растворами альдосахаров и высзтиивании препаратов в вакууме. Высушиванию обычно подвергают холинэстеразь,иммобилизованные на неоргани ческих и целлюлозных носителях. Пример. Высушиванию подвергают холинэстеразы, иммобилизованные на пористом стекле, активированном фосгеном, после обработки раствором -у-аминопропилтриэтоксисилана; на силикагеле, окиси алюминия в целлюлозе, активированных хлористым циануром, и на карбоксиметилцеллюлозе, карбоксильные труп Ш.1 которой переведены в азндные.

Названные препараты в количестве 0,2-03 г, переносят в пробирки с растворами Сахаров. Через 30 мин избыток раствора отделяют от препаратов на стеклянном фильтре и обработанные таким образом препараты высушивают в вакууме в лиофилизаторе ОЕ-950 (для высушивания можно использовать любое вакуумное сушильное устройство). Предварительное замораживание образцов перед наложением

вакуума (как обычно делают при лиофильной «сушке) не является обязательным.

Результаты высушивания оценивают по активности препаратов после вымывания Сахаров 0,15 М р.аствором NaCI. Активность определяют по скорости гидролиза ацетил- или бутирилхолина при рН 8,5. Полз енные результаты приведены в таблице.

a Effeii5a;:i2itsi3E;;;-.-v.v:i.;

При применении изобретения удается высушивать иммобилизованные на неорганических материалах холинзстеразы с сохранением ферментативной активности. Активность высушенных иммобилизованных на целлюлозе холиизстераз в случае применения изобретения сохраняются на 80-100%, в то время как без применения изобретения - только на 20-30%.УвеличиваетСя стабильность при хранеиш. Например, при хранении препаратов при иммобилизованные холинзстеразы в мокром виде теряют свою активность полиостью в течение нескольких минут, в то время как высушенные сохраняют активность в пределах 3080% после семи суточного хранения в этих же условиях.

Формула изобретения

Источники информации, принятые во при экспертизе I.J. Euerk, F. Е. Stolzenback, Lyophilization in Methods in Enzymology v. 22,

s. 33-39, 1971 (прототип).