Способ очистки антитоксической иммунной сыворотки Советский патент 1982 года по МПК A61K35/16 

держащ ю 8% белка, разводят до содержания 3% белка и подвергают ферментолизу в присутствии 0,25%-кого иммобилизованного пепсина (процентное содержание фермента указано без веса носителя) в течение 1 ч при рН 3,2 и температуре 22°С и еще 1 ч при той же температуре и рН - 4,2 при непрерывном шутелировании. После ферментолиза иммобилизованный пепсин отделяют декантацией. Освобожденный от пепсина ферментат сыворотки прогревают при 56°С в течение 45 мин в присутствии 14%-ного сернокислого аммония. Осажденные термолабильные неактивные белки отделяют центрифугированием. В нейтрализованную надосадочную жидкость добавляют 20% сухого сернокислого аммония и выпавший в осадок активный белок диализуют против воды для удаления сернокислого аммония. Отдиализованный раствор белка обрабатывают 30%-ным раствором хлороформа с последующим подкислением до рН 5-5,3. Осадок, состоящий из остаточных продуктов расщепления и липоидов, отделянэт центрифугированием. Освоболеденный от пепсина ферментат сыворотки прогревают при 5б°С в течение 45 минв присутствии 14%-ного сернокислого аммония. Осажденные термолабиль ные неактивные белки отделяют центрифугированием. В нейтрализованную надосадочную жидкость добавляют 20% сухого сернокислого аммония и выпавший в осадок активный белок диализуют против воды. Отдиализованный раствор белка обрабатывают 30%-ным раствором хлороформа с последующим подкислением до рН 5-5,3. Осадок, состоящий из остаточных продуктов расщепления и липоидов, отделяют центрифугированием.

В нейтрализованной надосадочной жидкости (сыворотка «Диаферм-3) определяют содержание антитоксина, объем и белок. По полученным данным рассчитывают выход антитоксина и его удельную активность (в ME на 0,1 г белка).

Отделенный иммобилизованный пепсин после суточного выдерживания при 4°С применяют для ферментирования следующих порций сыворотки (всего 8 раз).

В контрольном опыте в аналогичных условиях ту же исходную сыворотку ферментируют неиммобилизованным пепсином (той же серии, которая была использована для иммобилизации).

Для определения группоспецифического фактора «А в опытных и контрольных сыворотках используют тест торможения гемагглютинации с применением стандартной сыворотки крови П1 группы и эритроцитов И группы. В каждом из 8 экспериментов реакцию осуществляют параллельно с. опытной и контрольной сывороткой (разведенных до содержания белка 3% с последующими разведениями до 512 раз (10 пробирок).

В таблице приведены характеристики ферментированных антитоксических сывороток, полученных с применением иммобилизованного пепсина при восьмикратном его использовании.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что привосьмикратном использовании иммобилизованного пепсина средний выход антитоксина составляет 53%, а при приме-40 нении неиммобилизованного пепсина 51%. В первом случае получены препараты антитоксических сывороток с более высокой удельной активностью.

Данные реакции торможения гам агглютинации указывают на практическое отсутствие в ферментированных иммобилизованным иеисином сыворотках фактора «А (агглютинация во всех онытах наблюдается с 1-й пробирки, в то время как контрольные тормозят ее до разведений в 128-512 раз).

Формула изобретения

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют силохром с размером пор 1200-700 А° и содержанием первичных аминогрупп 100-200 мк-экв/г.